乳腺癌患者组织中FOXA1、BRCA-1表达与临床病理参数的相关性

王增辉 李昊楠 李润华 冯硕

乳腺癌是发生于女性乳腺上皮组织的恶性肿瘤，如今已成为女性的头号杀手，发病率呈逐年上升趋势［1］。近来有报道指出，作为一种可修复损坏DNA 的基因片段，乳腺癌易感基因1（Breast cancer1，BRCA-1）在调控细胞周期、修复DNA 中起到关键作用［2］。叉头框蛋白A1（Forkhead box protein A1，FOXA1）是一组与内胚层相关的发育因子，较早有研究表明，FOXA1 的表达与乳腺癌细胞系中的雌激素受体（Estrogen receptorα，ER）阳性具有一定相关性［3］。FOXA1 蛋白与BRCA-1 可在体内相互作用调节p27Kip1 的表达，而细胞周期依赖性激酶特异性抑制蛋白（p27 kinase inhibition protein1，p27Kip1）蛋白的低表达在各种肿瘤类型如乳腺癌、卵巢肿瘤、结肠癌的诊断、预后中具有一定的临床价值［4］。目前联合FOXA1、BRCA-1 对乳腺癌患者病理特征进行相关性研究比较少见。因此本文通过研究乳腺癌患者组织中FOXA1、BRCA-1 表达与各项临床病理参数之间的相关性，为乳腺癌的防治、风险预测等提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 材料

收集2018年3月至2019年5月于本院收治的106 例乳腺癌患者临床资料，包括患者的年龄、组织学分级、TNM 分期、肿瘤直径大小、淋巴结转移以及肿瘤类型。纳入标准：①符合临床上乳腺癌的诊断标准［5］；②同意在本院接受治疗；③临床病理资料齐全。排除标准：①复发性乳腺癌患者；②患有心、肺、肾等器官衰竭；③患有其他恶性肿瘤。根据纳入排除标准，最终纳入97 例患者作为本研究对象。

1.2 方法

所有患者行切除术的肿瘤组织标本均使用10%福尔马林固定，脱水，石蜡包裹，连续切片4 μm，切片后常规染色，再行Envision 两步法免疫组织化学染色：切片脱蜡、水化，高压修复后，使用3% H2O2灭活过氧化物酶，低温4℃24 h，再使用DAB 染色。同时使用已知乳腺癌阳性切片作为阳性对照，使用磷酸缓冲盐溶液代替一抗作阴性对照。按照说明书操作染色，所有FOXA1、BRCA-1、ER、孕激素受体（Progesterone receptor，PR）、细胞增殖核抗原67（Kiel67，Ki67）由本院病理科采用免疫组化法进行检测，鼠抗人FOXA1、BRCA-1、ER、PR、Ki67 抗体均购自上海信裕生物科技有限公司。

1.3 结果判定

结果判定：由两位病理科医师双盲法进行确认，于光学显微镜（德国蔡司，NEOPHOT30）下随机选取5 个视野进行观察，每个视野对200 个肿瘤细胞计数。FOXA1 于细胞核定位，采用半定量法判断着色［6］，0～3 分评分，无着色=0 分，着色细胞占比＜10%=1 分，10%＜着色细胞占比＜20%=2 分，20%＜着色细胞占比＜30%=3 分，依此类推；另外按着色程度由浅、居中、强评分1～3 分，两项积分的乘积为最后得分，4～30 为FOXA1 阳性，0～3 之间为FOXA1 阴性。BRCA-1 蛋白在乳腺癌组织中多在细胞质中表达，部分于细胞核定位，细胞核阳性细胞数＞10%为阳性，阳性细胞＜10%为阴性。

ER、PR 的阳性结果判定为阳性细胞数占肿瘤细胞＞15%。Ki67 定位于细胞核，有微弱胞质着色，阳性细胞数占肿瘤细胞＞10%为Ki67 阳性，阳性细胞数占肿瘤细胞＜10%为Ki67 阴性。组织学分级按照2012年WHO 乳腺肿瘤分级标准［7］分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级；肿瘤TNM 分期按照2003年修订的乳腺癌分期标准［8］分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期；淋巴结转移：根据相关文献［9］对腋窝、内乳淋巴结转移进行淋巴结活检，经箱灯照射，进行淋巴结计数和常规病理检查，检测微小淋巴结判断病例淋巴结转移状态。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行统计分析，计数资料用n（%）表示，行χ2检验，采用Pearson 法分析FOXA1、BRCA-1 的表达与乳腺癌患者临床病理参数之间的相关性，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化检测结果

BRCA-1 阳性率最低，为35.05%；FOXA1 阳性率最高，为61.86%。见表1、图1。

表1 免疫组化检测结果［n（%）］Table 1 Immunohistochemical test results［n（%）］

图1 免疫组化染色结果（Envision 两步法，× 200）Figure 1 Results of immunohistochemical staining（Envision 两步法，×200）

2.2 不同临床病理参数乳腺癌患者的FOXA1、BRCA-1 表达情况

不同组织学分级、TNM 分期、ER 表达、PR 表达、Ki67 表达的乳腺癌患者FOXA1 阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）；不同组织学分级、TNM分期、肿瘤直径、ER 表达、PR 表达、Ki67 表达的乳腺癌患者BRCA-1 阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 乳腺癌患者各临床病理参数与FOXA1、BRCA-1 表达的相关性［n（%）］Table 2 Correlation between the expression of FOXA1 and BRCA-1 and clinicopathological parameters in breast cancer patients［n（%）］

3 讨论

FOXA1 蛋白是FOX 家族的重要成员，能与靶基因染色体的启动子结合，促使靶基因转录，从而在组织器官发育、肿瘤发展等方面发挥关键作用［10］。早有学者研究发现，FOXA1 在肿瘤组织中呈现高表达［11］。但关于FOXA1 在乳腺癌发展的具体作用，目前仍存在一些争议。部分报道指出FOXA1 在乳腺癌早期起到促进作用［12］。而有研究发现乳腺癌组织中FOXA1 的表达与患者的无病生存期密切相关，FOXA1 表达可能预示着ER阳性乳腺癌患者的预后较好［13］。BRCA1 最早由国外科学家发现［14］，BRCA1 基因分布于17q21 染色体，可编码大量的氨基酸残基的BRCA1 蛋白，同时也能对DNA 损伤蛋白进行修复，在肿瘤抑制功能中发挥较好的作用。而通过检测BRCA1 表达，有助于乳腺癌的早期发现、诊断与治疗［15］。但BRCA1 与乳腺癌发病机制的关系仍是目前尚未解决的问题。

有研究表明，40 岁以下的乳腺癌患者组织学分级差于年长患者，且不同年龄段乳腺癌发病率比较差异具有统计学意义［16］。本研究结果发现临床病理分型较为复杂多样。闫振宇等人［17］在研究中亦得出类似结论，提示乳腺癌临床病理特征具有多样性，同时需将镜检、免疫组织化学结果相结合，以便进行有效、及时的鉴别诊断。免疫组织化学检测是乳腺癌临床病理诊断和鉴别的重要手段另外有临床实践显示，FOXA1 在约40%的乳腺癌中表达，但在ER 阳性的乳腺癌中阳性率可达80%［18］。本研究结果与文献报道数据有一定偏差，有可能是ER、PR 阳性率较低（57.73%、41.24%）导致。另一方面，本研究结果发现BRCA-1、FOXA1 的表达与乳腺癌患者的临床病理特征（如组织学分级、TNM 分期、ER 表达、PR 表达、Ki67 表达）具有较好的相关性。而组织学分级、TNM 分期等临床病理特征均为乳腺癌患者预后评估的有效指标，并且与BRCA-1、FOXA1 表达的相关性良好，推测BRCA-1、FOXA1的表达可对乳腺癌患者预后的评估起到一定作用。

综上所述，FOXA1、BRCA-1 的表达与乳腺癌患者临床病理特征具有良好的相关性，有望作为乳腺癌临床治疗与预后风险评估的新因素。