分析高危型HPVDNA 检测在宫颈病变筛查和宫颈癌预防中的应用效果

朱月娥

玉溪市第二人民医院妇产科，云南云溪 653100

宫颈癌是对女性健康威胁较大的一种恶性肿瘤。 患者发病早期无明显症状，发展到晚期，会出现阴道出血等症状[1]。 宫颈癌目前无治愈方法，但在发病前或者发病早期进行明确的诊断，并采取积极的诊疗措施，可有效延长患者远期生存率及生存质量[2]。 世界卫生组织建议女性每年进行宫颈病变筛查，以提高宫颈癌前病变检出率，进行宫颈癌预防[3]。 临床研究显示，宫颈癌是由高危型HPV 持续感染导致，进行高危型HPV 筛查，可有效检出宫颈癌前病变，进行治疗和提前预防。 而目前的检测技术中，还不能够对高危型HPVDNA 进行细胞组织培养， 并且生殖道感染患者的血清学中，高危型HPVDNA 未有明显的显示，因此， 需要采用直接高危型HPVDNA 检测方式开展临床检测。 高危型HPVDNA 检测及薄层液基细胞学检查都是临床常用的检测宫颈病变的有效手段。 该研究将两种检测方法应用在2019 年2 月—2020 年1 月于该院进行宫颈病变筛查的300 例患者中， 目的是对比分析高危型HPVDNA 检测的应用效果。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

300 例病例均为该院宫颈病变筛查患者。 患者年龄20～62 岁，中位35.45 岁。 文化程度高中以上学历120 例，初高中学历150 例，小学及以下学历30 例。 纳入标准：患者均为已婚女性，性生活规律。 因常规体检、阴道分泌物异常、阴道不规则出血等来院检查。 排除标准：合并其他生殖系统病变者。患者及家属知情并同意参加该研究。该研究报经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 对比方法 同时对入组对象进行高危型HPVDNA检测薄层液基细胞学检查及阴道镜检查， 将阴道镜检查下定点活检作为金标准， 对高危型HPVDNA 检测及薄层液基细胞学检查结果进行对比研究。

1.2.2 检测方法①高危型HPVDNA 检测 患者行结石膀胱位， 使用窥阴器将宫颈完全暴露， 用专用的标本采集器，收集患者宫颈管及黏膜交界处细胞组织，顺时针旋转5 圈后，停留30 s。 将刷头折断后，装在专用的无菌容器（内有4 mL 保存液）中，将瓶盖拧紧后，填写患者信息，放入2～8℃的冰箱中保存并及时送至检验室。 使用第二代杂交捕获技术（HC2）检测。 检测工具为美国Digene 第二代基因杂交捕获信号放大检测系统（HC2）。使用配套的试剂盒对国内女性人群中常感染的几种高危型HPV 病毒16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、 58、59、68 进 行 筛 查。发现任意一种高危型HPV 病毒或者高危型HPVDNA 值在1.0 ng/L 以上者为检测阳性。 ②阴道镜检查检测 应用的仪器为深圳金科威公司的SLC2000 电子阴道镜。 患者行膀胱截石位，使用扩阴器扩阴，并使用醋酸棉球（5%）将宫颈湿敷30 s。 阴道镜下醋白上皮区碘染宫颈不着色或者着色浅以及有芥末黄色变色则可判定碘试验阳性或者可疑。则在异常部位进行多点活检。将病理活检标本及时送检。 病理活检结果判定为正常、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，宫颈癌。③薄层液基细胞学检查 检测采用的仪器为美国利普LPT，包括配套的宫颈细胞学采样器、细胞保存液。患者行膀胱截石位，使用专用的扩阴器扩充阴道。轻擦去分泌物。使用专用的细胞刷于患者宫颈口处以及颈管处收集细胞，朝一个方向转动细胞刷8～10 圈。 取样完毕后，将刷头放置保存液中送检。 采用TBS 描述性报告系统进行细胞学分析诊断。 诊断结果分为正常、 非典型细胞（ASCUS）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、癌细胞。 后4 种的细胞学检测结果均为阳性。

1.3 观察指标

统计3 组宫颈病变筛查结果。与阴道镜检查结果相比，评估高危型HPVDNA 检测的准确度、特异度及灵敏度。

2 结果

2.1 3 组宫颈病变筛查结果统计

高危型HPVDNA 检测出癌前病变46 例（34+7+5），宫颈癌2 例， 共检出宫颈病变48 例。 阴道镜检查检测出癌前病变共20 例（17+2+1），宫颈癌1 例。 薄层液基细胞学检查诊断癌前病变30 例（16+10+4），宫颈癌0 例。 与阴道镜检查相比， 高危型HPVDNA 对宫颈病变检出率为16.00%， 薄层液基细胞学检查对宫颈病变的检出率为1.00%。 见表1。

表1 宫颈病变筛查结果统计[n（%）]Table 1 Statistics of screening results of cervical lesions[n(%)]

2.2 评估高危型HPVDNA 检测的准确度、 特异度及灵敏度

高危型HPVDNA 检测宫颈病变的准确度为92.00%，特异度为80.00%，灵敏度为96.00%。

3 讨论

HPV 感染是宫颈癌发病的主要原因。 及早发现高危型HPV 感染是宫颈癌前病变的重要诊断方法， 可有效对宫颈癌进行预防[4]。 临床研究证实，宫颈癌是一个慢性变化过程， 高危型HPV 持续感染是大多宫颈癌发生的必需条件。 而癌前病变患者，发展至浸润癌需要8～12 年左右的时间[5-6]。 由此诊断可明确，对CIN 进行早期的诊断，可对宫颈癌进行有效的预防。

临床研究显示，HPV 属于嗜上皮性病毒群，该病毒分型比较多， 已知的女性生殖道高危型HPV 感染类型有35种，而我国女性中易感染的高危类型有19 种亚型[7]。 这19 种类型与宫颈癌前病变及宫颈癌均有很大的关系。

高危型HPVDNA 检查，可通过初步筛查手段，对宫颈病变尤其是具有高风险的癌前病变有较高的应用价值。这种检查方式，可以单独应用于宫颈病变的筛查中，也可与细胞学检查方式相结合， 提高检出率。 通过高危型HPVDNA 检查，还可对筛查者的宫颈病变风险进行预测，并确定下一次的筛查时间[8]。 对于有高度宫颈癌病变风险的患者，还可以进行持续的检测，具有较高的随访价值。该检查中，患者阴性预测值也比较高，可以降低假阴性的诊断率，防止耽误患者治疗。 并且该检查方法具有较高的客观性， 检测结果比较准确。 研究结果显示， 高危型HPVDNA 检测宫颈病变的准确度为92.00%， 特异度为80.00%，灵敏度为96.00%。这与晏燕等[9]的研究中，高危型HPVDNA 检测宫颈病变的敏感性93.9%，特异性95.4%的研究结果具有较高一致性。 表明其对宫颈病变的筛查具有较高的利用价值。

高危型HPVDNA 检查，可明确高危型HPV 病毒感染情况，相比细胞学检查及阴道镜病理检查，有更高的诊断价值。 高危型HPVDNA 检查的作用原理为通过化学发光法将捕获到的抗体信号进行增强。 先将双链DNA 分解，转换成能够参加杂交反应的核苷酸单链DNA。 并通过将单链DNA 与RNA 探针组合成为RNADNA 杂合体。 将采集样本中的靶DNA 与特异的高危型HPVRNA 探针杂交捕获， 再将捕获捕获固定的杂交与碱性磷酸酶交联的抗RNA∶DNA 抗体反应[10]。通过将碱性磷酸酶应用在检测中，使酶底物发光。 通过对发光强弱的判断，可以对样本中的碱性磷酸酶含量进行确定。 碱性磷酸酶含量对RNADNA杂合体的含量有明确的指示意义。 通过将碱性磷酸酶裂解底物释放的光含量进行单位转换， 可以测得样本中高危型HPV-DNA 负荷量，从而得出实验结果。 该种检验方法中， 采集的标本中高危型HPV-DNA 负荷量在1.0 pg/mL以上时，则可认定检测阳性，具有较高的诊断准确率。通过在癌变早期有效检出，可进行及早干预，阻断宫颈癌继续发展的途径，降低宫颈癌引发的病死率[11-12]。薄层液基细胞学检查， 是通过对病变细胞进行细胞学分析而诊断疾病的一种方法。 属于一种宫颈疾病初步筛查方式，诊断结果分为正常、ASCUS、LSIL、HSIL、癌细胞。细胞学检测阳性提示有宫颈病变。可再通过阴道镜检查做进一步复查。这种检测方式，受标本采集等主观影响比较大，结果有一定的差异。 研究结果显示， 阴道镜检查检测出癌前病变共20例，宫颈癌1 例。高危型HPVDNA 检测出癌前病变46 例，宫颈癌2 例。 薄层液基细胞学检查诊断癌前病变30 例，宫颈癌0 例。与阴道镜检查相比，高危型HPVDNA 对宫颈病变检出率为16.00%， 薄层液基细胞学检查对宫颈病变的检出率为1.00%。 表明与薄层液基细胞学检查相比，高危型HPVDNA 对宫颈癌前病变及早期宫颈癌的检测结果均比较准确，可为临床诊疗提供更科学的依据。

综上所述，宫颈癌是威胁女性健康的恶性疾病之一，对于该疾病建议尽早预防和干预。 宫颈癌是高危型HPV感染导致的病变，对高危型HPVDNA 进行检测，可以通过高危型HPV 定量、分型等方法，提高宫颈癌前病变的检出率。 应用于宫腔病变以及宫颈癌的早期筛查中具有较高的价值，可有效预防宫颈癌。