高效液相色谱法同时测定饮料中几种甜味剂的研究分析

苏进姬

广东省阳春市食品药品检验检测站 广东阳春 529600

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

试剂：糖精钠、甜蜜素、安赛蜜、乙腈、硫酸铵。

仪器：HP1100高效液相色谱仪、超声波振荡器、超声波振荡器、离心机、电子天平、固相萃取柱。

1.2 色谱条件

色谱柱：ODS-C18；流动相：20mmol/L硫酸铵-乙腈；流速/mL/min：0.8；柱温/℃：30；检测波长/nm：200、226；进样量/μL：20。

1.3 样品前处理

（1）介质为液体的样品。如碳酸饮料，分别称取10g（±0.001g），放在25毫升的玻璃器皿中，使用超纯水进行定容至25毫升，摇匀，使用0.45μm的滤膜进行过滤，放置等待测定。

（2）介质为固体的样品。把样品分别粉碎，各称取2g（±0.001g），放置在25毫升的玻璃器皿中，加水，并持续20分钟的超声震荡后加入超纯水进行定容至25毫升，然后取上层的清液，放置等待测定。

（3）含乳饮料和植物蛋白饮料。分别取样品6 g（±0.001g），放置在25毫升的玻璃器皿中，按照顺序加入2毫升的0.08mol/LK4[Fe（CN）6]溶液和2毫升的0.25mol/LZn（CH3COO）2溶液，并持续2分钟的震荡后，沉淀蛋白质，加入超纯水进行定容至25毫升，然后取上层的清液，放置等待测定[1]。

1.4 试样的净化

分别取3毫升上层清清液，使用固相萃取柱进行萃取，然后再按照顺序使用3毫升20mmol/L的（NH④2SO4和3毫升的乙腈进行洗脱，再把洗脱的溶液分别取10毫升放置在容量瓶中，使用超纯水进行定容至25毫升，并混合均匀，使用0.45μm滤膜进行过滤，放置等待测定[2]。

1.5 测定

分别取20μL的混合标准溶液和处理液放入高效液相色谱分析仪中进行分离，以保留时间定性，峰面积进行外标法定量。

1.6 计算公式

按照以下公式进行计算。

公式中：

X——糖精钠、甜蜜素、安赛蜜含量/（mg/kg）或/（mg/L）；

A2——样品峰面积；

A1——标液峰面积；

K——稀释倍数；

C——标液质量浓度/（μg/mL）；

M——样品质量/g；

V——样品洗脱液浓缩定容体积/mL。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

在本文中使用的是二极管阵列检测器，在190-400nm的范围中对所需要分析的物质进行有效的光谱扫描，经过扫描可以看出，文中的3种甜味剂最大的吸收波长如表1所示。其中除了安赛蜜是按照按226nm波长进行测定，其余的都是按照200nm波长进行测定，在此色谱条件下，3种甜味剂的标准物质色谱图见图1。

表1 3 种甜味剂最大的吸收波长

图1 标准混合溶液的色谱图

2.2 线性范围、精密度和检出限

在检验线性关系、相关系数、检出限和相对标准偏差，见表2。根据相关的结果可以看出，分析物在0.4-120mg/L范围之内都有着比较好的线性关系，能够充分地满足于定量分析的需求[3]。

2.3 实际样品中甜味剂含量及加标回收率的测定

在如表5种测定结果的基础上，加入一定的标准品进行加标回收试验，每种样品都需要进行三次的平行测定，最终的测定结果如表所示。

表2 线性关系与检出限

表3 实际样品的测定结果（n=3）

表4 实际样品的加标回收率结果

相对标准偏差 安赛蜜 0.71% 2.69% 1.99% 1.5% 1.46%糖精钠 0.86% 3.02% 2.32% 3.12% 2.12%甜蜜素 1.41% 1.15% 1.57% 1.97% 0.92%

3 结语

总而言之，通过本文对3种饮料中甜味剂进行高效液相色谱法的实验分析中可以看出，糖精钠、甜蜜素、安赛蜜在4.0-20.0mg/kg的范围之内，且在加标回收率方面为百分之88到107，相对标准偏差＜百分之3.12，此种方法简单、容易操作，且具有比较好的净化效果，能够使用在饮料中多种调味剂同时检测的方法，且还可以有效消除对饮料中单一甜味剂检测过程中而出现其他甜味剂漏检的状况。