幼鼠与成鼠子宫和输卵管组织形态学比较

魏学盛，邵鹏阳，姚亚莉，姜芳霞，李明娜*，杨 耀

（1.甘肃农业大学 动物科学技术学院，甘肃 兰州 730070；2.甘南州动物疫病预防控制中心，甘肃 合作 747000）

雌性动物生殖器官包含卵巢、输卵管、子宫、阴道及外阴部。卵巢能够排出卵子，决定卵子的质量及数量。因此很多学者集中于卵巢的结构及生理功能进行研究。然而，子宫与输卵管的作用也至关重要。子宫与输卵管相连，为中空的管道，是卵子和精子运行、受精、早期胚胎发育、附植及胎儿妊娠的主要场所[1]；同时子宫上皮也能够分泌激素，调控卵巢周期性活动。因此研究子宫与输卵管的结构有助于更深入了解雌性动物繁殖机理。

随着生物学研究由体外实验转向体内，小鼠目前成为广泛使用的实验动物，这与小鼠体积小、生长周期短、易于饲养、成本低等优势息息相关。因此通常选择小鼠作为研究人和哺乳动物生理、繁殖和病理现象的理想模型[2]。

本实验选取幼龄和成年小鼠的子宫和输卵管为研究对象，制作石蜡切片，HE方法染色，比较幼鼠和成鼠子宫和输卵管的形态学差异，以期阐明子宫和输卵管的发育规律，为深入了解小鼠生殖器官的生理功能提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本研究选取10只4周龄和10只8周龄SPF清洁级雌性小鼠，均购自兰州兽医研究所。饲养3 d无异常后用于后续实验。

1.2 主要试剂及耗材

伊红、苏木精、中性树胶购自索莱宝生物公司；甲醛、乙醇、二甲苯购自国药集团化学试剂有限公司；石蜡购自上海华灵康复器械厂。

1.3 实验仪器

脱水机 KEDEE KD-TS3A，摊片机 KEDEE KD-P，烘片机 KEDEE KD-H，普通光学显微镜，切片机 LEICA RM2235等。

1.4 实验方法

1.4.1 组织固定 饲养3 d后，选取体重相近的成年小鼠（32.42±2.75 g）和幼年小鼠（24.45±2.65 g）各6只，做好标记。断颈法处死小鼠，分离出小鼠子宫和输卵管，浸入4%甲醛固定液中，使组织蛋白质变性并防止胞死亡后自溶或细菌分解。

1.4.2 流水 将组织从固定液中取出，放在微水流中流水冲洗12 h。

1.4.3 脱水透明 用不同浓度酒精（从低到高）作为脱水剂，逐步脱去组织中的水分，再将组织置于二甲苯中透明，以二甲苯替换组织中的酒精。本步骤借助自动KEDEE KD-TS3A脱水机进行脱水透明，具体浓度与时间如下：酒精（75%）45 min，酒精（85%）45 min，酒精（95%）45 min，酒精（95%）45 min，酒精（100%）45 min，酒精（100%）30 min，二甲苯酒精30 min，二甲苯7 min，二甲苯7 min，二甲苯石蜡45 min，石蜡45 min，石蜡45 min。

1.4.4 浸蜡与包埋 将自动脱水机内的组织取出，按合适的方位置于模具中，缓慢倒入已经融化好的石蜡。整个过程要求迅速、平稳。

1.4.5 切片与贴片 将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成5 um薄片。将切下的薄片放至25℃的水中摊平，再贴至载玻片上（此过程要求动作轻缓，不产生气泡为宜）。最后将载玻片置于45℃的烘片机上烘干。

1.4.6 脱蜡染色 将烘干的切片进行脱蜡，采用苏木精-伊红（HE）方法进行染色，具体操作过程如下：二甲苯5 min，二甲苯5 min，苯乙醇3 min，100%乙醇2 min，100%乙醇2 min，80%乙醇2 min，蒸馏水2 min，苏木精染色液30 s，蒸馏水1 min，分化液（1%盐酸+99%乙醇）2 s，蒸馏水30 s，0.5%伊红染色液30 s，80%乙醇2 s，95%乙醇2 s，95%乙醇2 s，100%乙醇2 s，100%乙醇2 s，二甲苯2 mi n，二甲苯2 min，最后用玻璃棒蘸取适量中性树胶于载玻片上，盖上盖玻片待凝固后观察结果。

1.4.7 镜检 将制作好的切片置于显微镜下观察、拍照。

2 结果与分析

2.1 小鼠子宫的组织结构观察

家畜子宫分为子宫角、子宫体和子宫颈三部分组成。从子宫颈前端到子宫基部为子宫体。子宫颈前端与子宫体内相通，后端突入阴道内称为子宫颈阴道部。从组织结构由外向内依次为浆膜、肌层及黏膜。子宫浆膜与子宫阔韧带的浆膜相连接。子宫黏膜由上皮和固有膜构成，上皮陷入固有膜构成子宫腺。小鼠与家畜不同，为双子宫，呈“Y”型。左右子宫角汇合至子宫体，形成两个独立的子宫，再向外汇合形成子宫颈。如图1所示，小鼠的子宫内膜腔上皮由单层柱状上皮细胞构成，被大量的基质细胞所包围[3]。固有膜又称为基质膜，含有大量的淋巴、血管及子宫腺。子宫腺为简单、分支、盘区的管状腺，其中子宫腺以子宫角最为发达，子宫体较少。子宫内膜被平滑肌所构成的子宫肌层所包围，形成子宫边界。肌层外层薄，为纵行肌纤维，内层厚，为螺旋形的环状肌纤维。

图1 小鼠子宫组织切片图

2.2 幼鼠与成鼠子宫结构比较

幼鼠与成鼠子宫切片进行比较，可以看出子宫结构，形态存在很大差异（见图2）。成年小鼠子宫内膜褶皱多于幼年小鼠，子宫黏膜面积也较幼鼠大。内膜中子宫腺的数量也是成年小鼠多于幼年小鼠，这可能与成鼠完善的生殖功能有关。

图2 成年与幼年小鼠子宫角切片图

2.3 小鼠输卵管组织形态观察

输卵管是卵子进入子宫的必经之道，包在输卵管系膜内，形状弯曲。输卵管的管壁从外向内由浆膜、肌层和黏膜构成（见图3）。肌层可分为内层的环形或螺旋形肌束和外层的纵行肌束（见图4），其中有斜行纤维，使整个管壁能协调地收缩。肌层从卵巢端到子宫端逐渐增厚，黏膜形成若干纵璧。黏膜上分布有柱状纤毛细胞和无纤毛的楔形细胞[4]（见图4）。纤毛细胞在输卵管的卵巢端，特别是在输卵管的伞部，较普遍，子宫端较少。无纤毛楔形细胞为分泌细胞，含有特殊的分泌颗粒，其大小和数量在不同种间和发情的不同时期有着很大的变化。分泌的黏蛋白和黏多糖，可供给早期胚胎营养，且结构和分泌机能也受卵巢激素的调节。

图3 成年小鼠输卵管组织切片图

图4 成年小鼠输卵管组织切片局部图

2.4 幼鼠与成鼠输卵管结构比较

幼鼠与成鼠输卵管切片比较，成鼠黏膜较发达。幼鼠输卵管纵壁较成鼠少，且直；相反成鼠输卵管中纵壁多而弯，还有不同程度的分支现象。成鼠每个纵壁黏膜上皮的纤毛细胞和分泌细胞较多，细胞小而密，同时纤毛分布较多；幼鼠中这两类细胞较大，细胞核明显，分布疏松（见图5）。

图5 成年与幼年小鼠输卵管切片图

3 讨论

动物到达初情期后，能够排出有受精能力的精子或卵子，然而生殖器官还未成熟[5]，因此不能作种用。本研究中比较幼鼠和成鼠的子宫和输卵管形态结构，发现子宫黏膜和输卵管黏膜都存在很大差异，包括腺体的数量、子宫内膜褶皱及输卵管纵壁等，表明幼鼠至成鼠生长过程中，生殖器官也持续发育，结构趋于成熟，功能趋于完善。因此在生产实践中常见对幼畜实施超数排卵，以得到一定量的具有受精能力的卵子，后通过体外成熟、体外受精，将质量较好的胚胎移植入成年雌性动物体内妊娠，缩短世代间隔，加快育种进程。

成鼠子宫腔上皮较幼鼠发达，一方面向子宫腔延伸，另一方面向子宫内膜延伸形成更多腺体；整体看来子宫内膜褶皱增多。同时成鼠输卵管纵襞也较幼鼠发达，纤毛细胞和分析细胞数量增多。以上结构均为卵子的运行提供方便。卵子排出后在输卵管中运行，依靠输卵管黏膜的纤毛摆动及输卵管管壁的收缩将卵子输送向前；受精后的受精卵到达子宫后，同样依靠子宫内膜褶皱的蠕动及子宫壁的收缩运动。因此，成年小鼠的子宫和输卵管结构完善，具备卵子受精及妊娠的生理环境。

4 结论

本研究初步对成年和幼年小鼠子宫和输卵管进行组织形态学观察，发现成鼠子宫腔上皮较幼鼠发达，内膜结构完善；输卵管纵壁结构分支明显，细胞分布紧密，纤毛数量多。