仙牛腰骶痛颗粒对血瘀证大鼠活血化瘀作用研究

宫海全 ，刘 欣 ，许艳茹 ，石 菊 ，于艳辉 ，吴 萍 ，徐 建 *

(1.吉林修正药业新药开发有限公司吉林省中药标准化关键工程技术重点实验室，长春130103；2.修正药业集团股份有限公司，通化134001）

仙牛腰骶痛颗粒由淫羊藿、千年健、地枫皮、牛膝组成，功能主治温阳祛湿，通经止痛， 用于治疗腰骶痛寒湿阻络证。 本研究采用冰浴联合皮下注射肾上腺素造成大鼠急性血瘀证模型，检测相关指标，探究仙牛腰骶痛颗粒活血化瘀作用，为其临床应用提供理论依据。

1 材料

1.1 动物

Wistar 大鼠，雌雄各半，体重 200～220g，均购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。

1.2 药物

仙牛腰骶痛颗粒： 由修正药业集团长春高新制药有限公司提供，批号：20191110；复方丹参滴丸：天力士制药集团股份有限公司，批号：161222；盐酸肾上腺素注射液：遂成药业股份有限公司，批号：61903012；磷酸肌酸激酶（CPK）、钠钾三磷酸腺苷酶（Na+-K+-ATP）、乳酸脱氢酶（LDH）、内皮素（ET-1）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，购自上海江莱生物科技有限公司，批号：201906。

1.3 仪器

SMP500-18272-LSIO 酶标仪；Primo 型低温冷冻离心机；LBY-N6 compact 全自动血液流变仪；JA1103N 天平。

2 方法

2.1 分组

Wistar 大鼠 60 只，随机分组，每组 10 只大鼠，雌雄各半，分别为空白组、模型组、复方丹参滴丸组、仙牛腰骶痛颗粒高、中、低剂量组（8.8、4.4、2.2g·kg-1），每日1 次，连续灌胃 14d，给药体积为 10mL·kg-1。

2.2 模型建立[1-2]

除空白组外， 其余各组每日冰浴4～5min， 连续14d，各组动物在实验第14d 下午，除空白组外，其余各组皮下注射盐酸肾上腺素注射液 (0.8mg·kg-1) 制备急性血瘀证大鼠模型， 注射后， 禁食不禁水12h。 第15天，麻醉手术。

2.3 指标检测

所有实验动物采用1.5%戊巴比妥钠（1.5mL·kg-1）麻醉， 腹主动脉取血， 部分血液 3000 r/min 离心10min，取上清液置于-20℃冰箱保存备用。另一部分血液枸橼酸钠抗凝， 取全血3mL 立即进行血流变学检测，具体检测指标：低切变率（10s）、中切变率（60s）、高切变率（150s）。

2.4 统计学分析

数据用SPSS19.0 统计学软件处理， 进行t 检验，用均值±标准差()表示，P＜0.05 有统计学意义。

3 实验结果

3.1 对血瘀证大鼠血液流变学的影响

采用冰浴联合盐酸肾上腺素造模结果显示， 与空白组比较， 模型组全血黏度明显升高 （P＜0.001，P＜0.01）；与模型组比较，复方丹参滴丸能够明显降低全血黏度（P＜0.01，P＜0.05）；复方万年青胶囊组明显降低全血黏度（低切）（P＜0.05），而中切、高切虽有所降低，但无统计学意义，结果见表1。

表 1 各组大鼠血液流变学指标比较（，n=10）

表 1 各组大鼠血液流变学指标比较（，n=10）

注：与空白组比较，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

-1全血粘度/mPa.s低切（10s） 中切（60s） 高切（150s）空白组 － 6.34±0.70 5.14±0.56 3.45±0.40模型组 － 8.51±1.71### 6.63±1.43## 4.03±0.41##复方丹参滴丸组 0.0729 6.78±1.23** 5.23±1.25* 3.26±1.03*高剂量组 8.8 7.20±0.52* 5.74±0.40 3.83±0.25中剂量组 4.4 7.02±0.61* 6.35±1.08 4.05±0.57低剂量组 2.2 7.18±1.10* 5.77±0.74 3.75±0.35组别 剂量（g/kg）

3.2 对大鼠血清中ET、CPK 含量的影响

与空白组比较，模型组大鼠血清中CPK、ET 含量升高(P＜0.01，P＜0.05)；与模型组比较，复方丹参滴丸组中CPK、ET 含量降低(P＜0.01，P＜0.05)；仙牛腰骶痛颗粒能够降低 CPK、ET 含量（P＜0.05，P＜0.001），结果见表 2。

表 2 大鼠血清中 ET、CPK 含量（，n=10）

表 2 大鼠血清中 ET、CPK 含量（，n=10）

注：与空白组比较，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

组别 剂量（g/kg） CPK（ng/mL） ET-1（pg/mL）空白组 － 11.84±1.40 177.2±9.6模型组 － 15.39±3.23## 187.1±8.7#复方丹参滴丸组 0.0729 11.58±3.03** 179.8±8.2*高剂量组 8.8 12.57±2.12* 167.4±9.1***中剂量组 4.4 12.32±1.81* 179.3±25.1低剂量组 2.2 10.11±1.55* 176.6±14.1

3.3 对大鼠血清中MDA、NO、SOD 含量的影响

与空白组比较， 模型组大鼠血清中MDA 含量升高，SOD 含量下降(P＜0.05)；与模型组比较，复方丹参滴丸组血清中SOD 含量升高（P＜0.05）；仙牛腰骶痛颗粒能够降低 MDA、NO 含量（P＜0.05，P＜0.001），提高 SOD含量（P＜0.05），结果见表 3。

表 3 大鼠血清中 MDA、NO、SOD 含量（，n=10）

表 3 大鼠血清中 MDA、NO、SOD 含量（，n=10）

注：与空白组比较，#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

SOD(ng/mL)空白组 － 3.11±0.30 25.76±1.44 5.33±0.22模型组 － 3.41±0.25# 27.20±3.56 4.75±0.71#复方丹参滴丸组 0.0729 3.21±0.47 26.52±1.78 5.34±0.32*高剂量组 8.8 3.32±1.03 24.72±1.41* 5.04±0.48中剂量组 4.4 3.10±0.17** 24.42±1.88* 4.80±0.64低剂量组 2.2 3.05±0.13*** 24.77±0.96* 5.38±0.46*组别 剂量（g/kg）MDA（nmol/mL）NO（μmol/l）

3.4 对大鼠血清中Na+-K+-ATP、LDH 含量的影响

与空白组比较， 模型组大鼠血清中Na+-K+-ATP含量降低，LDH 含量升高(P＜0.01)；与模型组比较，复方丹参滴丸组血清中 LDH 含量降低 （P＜0.05），Na+-K+-ATP 含量有所升高，但无统计学意义；仙牛腰骶痛颗粒能够提高 Na+-K+-ATP 含量（P＜0.05），降低 LDH 含量（P＜0.05），结果见表 4。

表 4 大鼠血清中 Na+-K+-ATP、LDH 含量

4 讨论

血液流变学，是研究血液及其有形成分的流动性、变形性和聚集性的变化规律及其在医学中应用的科学。血液流变学异常与中医血瘀证理论“脉不通则血不流”和“血行失度”的理念相似[3-4]。 血黏度升高，是血瘀证的主要表现形式， 其主要作用因素是肾功能的异常导致许多活性物质直接作用于血管，如内皮素、肾上腺素均能收缩血管，引起血黏度的升高。 同时，血管平滑肌细胞膜增加了对钙离子的通透性， 使细胞内钙离子增加，进而增强了血管平滑肌兴奋-收缩耦联，增加血收缩和痉挛而使血液黏度升高，造成血瘀[5-8]。

磷酸肌酸激酶活性高低， 只反映脏器细胞被破坏或细胞通透性的情况。是与能量代谢最为密切的酶。

CPK 活性水平越高，表明机体损伤越严重[9]。 仙牛腰骶痛颗粒能够降低磷酸肌酸激酶、内皮素活性，进而改善血管壁弹性，降低血液粘度，促进血液流通，达到活血化瘀的作用。

氧自由基受损，会造成血液循行障碍、循环阻力增加、血流速度减慢、微循环遭破坏，引起组织缺血缺氧,导致气行受阻、瘀血内停，出现血瘀。血清SOD 活性的高低反映机体清除氧自由基的能力，MDA 浓度反映机体脂质过氧化水平，SOD 活性和MDA 水平能直接反映氧自由基损伤情况。仙牛腰骶痛颗粒中、低剂量组降低MDA 含量，提高SOD 水平，具有抗氧化作用，而高剂量组虽降低MDA 含量， 但无统计学意义。 Na+-K+-ATP 酶镶嵌于线粒体内膜，是维持线粒体膜流动性正常的关键酶，酶活性下降，线粒体钠泵功能障碍，致线粒体内膜水肿，线粒体膜流动性下降，导致线粒体氧化磷酸化功能障碍，ATP 合成不足，又直接降低Na+-K+-ATP 酶的活力，二者互为因果，构成恶性循环[10]。 研究表明与模型组相比， 仙牛腰骶痛颗粒高剂量组钠钾ATP 酶活性升高、LDH 含量降低。 表明仙牛腰骶痛颗粒高剂量组具有保护线粒体膜流动性的作用。

综上所述， 仙牛腰骶痛颗粒可能通过降低磷酸肌酸激酶、内皮素改善血管壁弹性；同时，提高钠钾ATP酶活力， 降低乳酸脱氢酶生成进而降低血液粘度达到活血化瘀的作用。