非洲猪瘟相关检测及猪场生物安全防控研究进展

孙爱军，王 芮，朱潇静，孟泽锟，刘思源，张 帅，靳家鑫，张改平，庄国庆

(河南农业大学 牧医工程学院，郑州 河南 450002)

生物安全是国家安全的重要组成部分，其含义是生物相关的各种因素对国家社会、经济、人体健康和周围环境所产生的危害或潜在风险。生物病原体引起的传染病是能够在动物与动物之间，人与人之间，或者动物与人之间传播流行的一类疾病。2018年在我国发生的非洲猪瘟(African swine fever，ASF)疫情，是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一种猪的急性、烈性、高度接触性传染病。是世界动物卫生组织(world organization for animal health，OIE)公布的法定报告动物疫病[1]。也是我国重点防范的一类动物疫病[2]。ASFV属于非洲猪瘟病毒科，非洲猪瘟病毒属的唯一成员，也是仅有的虫媒DNA病毒。ASFV基因组大小为170～190 kb，含有151～167个开放阅读框(ORF)[3]。胞外病毒颗粒直径为260～300 nm，呈二十面体对称结构，主要由类核遗传物质、核壳、内囊膜、核衣壳及外囊膜构成[4]。核衣壳蛋白基因p72相对保守，常被用做ASFV分型的依据[5]。

ASFV的宿主包括家猪、野猪和软蜱，所有性别、种类、日龄的家猪均易感[6]。作为贮藏和传播ASFV的宿主之一，病毒在软蜱体内可存活几个月或者几年的时间，因在家猪、野猪与蜱之间交叉感染传播，极易导致在新的地区ASF的暴发[7]。ASFV的传播途径广泛，可以通过人传、物传、料传和介质传播，比如患病家猪污染的饲料、饮水、人员和车辆。另外，在一些病例中，病猪打喷嚏、咳嗽也可能会形成气溶胶传播[8]。目前尚无安全有效的ASF疫苗及药物进行预防和治疗，ASF的防控主要依赖于准确快速的诊断和严格的生物安全措施。本研究总结国内外常用的ASFV检测技术最新研究进展，及国外猪场实施的生物安全相关措施，以期为我国ASF的防控提供参考。

1 ASF相关诊断方法

根据家猪感染ASF的临床表现和病理变化，可以将ASFV分为低、中、高等毒力毒株。超急性型病例常由高毒力毒株引起，主要是高热(42℃)，嗜睡，突然死亡等临床表现；急性型病例临床表现高热(40～42℃)，嗜睡，肢体末端发红发紫，伴有出血点或出血斑，病理变化表现为脾脏肿大出血，淋巴结呈大理石样，其他脏器黏膜、浆膜出血等症状，通常由中或高毒力毒株引起；亚急性型病例主要由中等毒力毒株引起，临床表现与急性型类似，但病程较长，病症严重程度较低；慢性型病例由低毒力毒株引起，主要表现为淋巴结大理石样病变，脾肿大，流产等[9]。ASF的临床症状与其他猪传染病(猪瘟)相似，只能先根据临床表现和病理变化做出初步鉴别诊断，再进一步进行实验室诊断确定病原体。目前，ASFV检测方法包括各种分子生物学方法和血清学方法，常用的检测方法有聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、免疫荧光试验(immunofluorescence assay，FA)、胶体金免疫层析试纸条(colloidal gold immunoassay strip)、红细胞吸附试验(hemoadsorption test，HAD)。其中，PCR扩增法和ELISA法操作较为方便快捷，稳定性和灵敏度高，是OIE推荐的诊断ASF的方法[7]。

1.1 分子生物学检测方法

1.1.1聚合酶链式反应(PCR) PCR可以对微量病原体DNA进行大量扩增，并进行核酸电泳，或者可视化检测，具有特异性强、灵敏度高、对样本量要求低等特点。PCR方法是目前实验室检测ASFV的常用方法之一。作为ASFV分型依据的p72，常被用作PCR检测ASFV的靶基因。此外还有p54、9GL、K205R等。YUZI等[10]根据所有ASFV毒株的vp72基因的高度保守区域设计了针对ASFV的特异性引物，建立了改进的PCR检测方法，该方法比两种OIE推荐的常规PCR检测方法更具有灵敏性。ARIE等[11]基于p72基因建立了RT-PCR的检测方法，其引物和探针被OIE作为推荐序列。利用TaqMan探针实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测p72，灵敏性可以达到10拷贝/μL，是普通PCR的100倍，同时具有特异性强、可重复性良好的特点。MCKILLEN等[12]在PT-PCR的基础上针对9GL基因设计了一种用于ASFV快速、灵敏、特异检测的5′共轭小沟槽粘合剂(MGB)探针实时PCR检测方法。其灵敏性和OIE推荐的TaqMan探针RT-PCR相当，比传统PCR高10倍。

微滴数字PCR是近年来新出现的一代PCR技术，与传统的RT-PCR方法相比，无需制作标准曲线，分析结果更加准确。邬旭龙等[13]针对ASFVK205R基因分别用RT-PCR和微滴数字PCR检测方法进行鉴定，结果表明微滴数字PCR的最低检测限度可达到0.36个拷贝，灵敏度是RT-PCR的10倍，也有较强的特异性，微滴数字PCR法的阳性样本检出率较高。使实际生产中的ASFV检测成为可能。此外，纳米PCR也被用于ASFV的检测，崔尚金等[14]针对ASFVp54基因建立了高效纳米PCR检测方法，采用纳米金属颗粒作为热导介子，增加导热性，提高特异性扩增的效率，通过敏感性试验显示纳米PCR最低检测量为4.30×101拷贝/μL，是普通PCR检测的1 000倍。BASTO等[15]建立了ASFV巢式PCR检测方法，与OIE PCR相比该方法具有更好的灵敏度，可用于检测蜱类种群中ASFV的感染情况，从而有助于排查潜在威胁，及早防控ASF的发生。

除了用PCR对ASFV单独检测外，肖璐[16]建立了能够同时检测ASFV、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性日本乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重PCR与毛细管凝胶电泳分析系统(QIAxcel)以及多重PCR与液相芯片分析系统(Bio-Plex)联用的两种检测方法，其中PCR-QIAxcel对ASFV的最低检测量为4.51×103拷贝/μL，PCR-Bio-Plex对ASFV的最低检测量为2.54×103拷贝/μL，PCR-QIAxcel和PCR-Bio-Plex检测方法更加的准确、高效，同时灵敏度和特异性更好，高通量检测为多病毒共感染监测和防控提供了一个新的思路。

1.1.2等温扩增法 与常规PCR相比，等温扩增技术对目的基因进行扩增，不需要高温变性、温度循环、电泳和紫外观察等过程，具有简捷、快速和方便的优点。常用的等温扩增技术包括环介导等温扩增法(LAMP)、交叉引物扩增技术(CPA)和重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)。其中LAMP作为一种新型的核酸扩增方法，其检测速度、敏感性均优于普通PCR技术，LAMP检测费用远低于荧光定量PCR，可应用于实际生产的快速诊断。基于ASFVp72基因建立了LAMP诊断方法，该方法与OIE参考PCR方法比较具有相同的检测灵敏度[17]。LAMP技术结合eva green染料显色建立了基于p10基因的可视化ASFV检测方法[18]。使用CPA技术结合生物素和FITC特异性标记，建立了基于ASFVp54基因的特异性强、灵敏度高、简便易行、成本低核酸诊断方法，该方法具有不需要专门的设备，反应时间也大大减少。试验操作不需要专业的实验室人员，具有程序简单，易于操作的优点[19]。另一项研究将ASFVp72基因的重组酶聚合酶扩增(RPA)与侧流层析试纸条(LFD)相结合，为ASFV现场检测提供了快速可视化结果，试验结果与实时PCR阳性检出率一致，且具有较好的特异性。总之，等温扩增技术摆脱了对大型和昂贵设备的依赖，能够快捷便利的实现目的片段的短时间大量扩增，结合试纸条技术、数字显示技术能够使检测结果便于直观显示。

1.2 血清学检测方法

1.2.1酶联免疫吸附试验(ELISA) 作为常用的实验室免疫学检测方法，ELISA检测分为抗原检测和抗体检测2种，其中抗体检测ELISA为OIE国际贸易指定试验[20]。ELISA取代最早的ASF血清学分析方法免疫电渗透试验(IEOP)成为检测大量血清样品的方法，具有更高的灵敏性[21]。WARDLEY等[22]建立第1个用于检测ASFV的直接ELISA方法，该方法可以检测50～500 HAD50/mL。TABARES等[23]从病毒颗粒中提取p72蛋白的半纯化工艺的发展最先使用了ELISA方法进行抗体筛选，减少了以前开发的抗原发现的假阳性反应的数量，提高了ELISA检测的可靠性。后续研究中发现p72、p54、p32、p30等蛋白可以作为血清诊断靶点建立ELISA检测方法[21]。ELISA抗体检测方便高效，适用于大批量样本的检测，但也有局限性，例如采集患病动物的血液有造成ASFV进一步散播的风险。为了消除这样的隐患，采集涎液作为检测标本，可避免因血液处理不当造成的污染，并采用免疫过氧化物酶染色技术(immunoperoxidase technique，IPT)和ELISA，对涎液中ASFV抗体水平进行了评估。研究结果表明从感染早期到试验结束，通过ELISA和IPT在所有感染动物的涎液样品中均可检测到抗体，证明涎液样品可以替代血清样品作为诊断样品[24]。

1.2.2直接免疫荧光试验(DFA) 直接免疫荧光法是另外一种常用的血清学检测方法，其原理是将能与待检抗原特异性结合的抗体用荧光素标记，在一定条件下与抗原反应，反应结束后洗掉多余的荧光抗体，室温干燥后封片处理，在倒置荧光显微镜下观察显色的有无或强弱，对待检样品中抗原做定性和定量分析。DFA检测方法的对象广泛，可以利用猪的脾、肺、肾和淋巴结等组织器官制做组织触片或者冷冻切片，对ASFV抗原进行检测。该方法较适用于ASF急性病例诊断，但不适合快速、大批量的检测样本，是ASFV的辅助检测方法之一。

1.2.3间接免疫荧光抗体试验(IFA) 间接免疫荧光抗体技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，利用抗原抗体反应进行细胞和细胞内抗原物质的定位。首先将对应某一抗原的抗体与转染病毒的细胞孵育，然后用与一抗对应的带有荧光标记的二抗孵育，在荧光显微镜下通过激发光激发荧光物质，根据荧光对抗原的有无和位置做出判断。异硫氰酸荧光素(FITC)是IFA常用荧光素。该方法敏感高，成本低，因此适用性更加广泛，此法常用于ELISA检测可疑样品的复核。HSCHELEE等[25]建立诊断ASF的免疫荧光方法，该方法可以在感染猪样品中检测出ASFV，为诊断慢性、感染性ASF提供了一种灵敏、快速的方法。

1.2.4胶体金免疫层析试纸条(GICA) 胶体金免疫层析试纸条依据胶体金免疫层析技术制备而成，是一种快速检测抗原或抗体的方法。其制备过程是：首先在还原剂柠檬酸钠的作用下氯金酸(HAuCl4)的水溶液聚集形成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶水溶液，在静电作用下形成稳定胶体状态。再将ASFV表达蛋白与胶体金结合在一起，若标本中有待测特异抗原，就可与免疫金复合物中的抗体结合，抗原抗体复合物流至测试区可被固相抗体捕获，由于蛋白质分子的某些基团带正电荷，可与带相反电荷的胶体金牢固结合，大量胶体金聚集而达到显色效果。因为这种结合是静电吸引，所以不破坏蛋白质的功能特性。基于ASFV重组蛋白p54胶体金颗粒，以葡萄球菌蛋白A(SPA)作为检测线、p54蛋白多抗作为质控线，成功制备了快速检测胶体金试纸条，结果表明胶体金试纸条的检测结果有着高度敏感性和特异性。在ASFV感染早期，使用胶体金试纸条进行检测，其灵敏度明显高于以往常用的间接ELISA检测方法[26]。除此以外，林彦星等[27]利用量子点免疫层析试纸技术制备的试纸条特异性良好、敏感性高、操作简便，适用于ASFV抗体检测。GAO等[19]建立的交叉引物扩增结合免疫层析条(CPA-strip)，操作简便、快速诊断，适用于ASFV的现场检测。

1.2.5其他血清学检测方法 ALCARAZ等[28]开发了一种放射免疫沉淀检测法(RIPA)，RIPA检测到的自然感染中最具抗原性的ASFV诱导蛋白是病毒蛋白p243，p172，p73，p25.5，p15，p12，p30和p23.5，RIPA的易用性、特异性和敏感性可与免疫印迹法相媲美。PASTOR等[29]利用ASFV胞质可溶性抗原(CS-P)建立一种用于ASFV抗体检测的简单斑点免疫结合测定方法(DIA)，与ELISA和免疫印迹(IB)试验相比，通过DIA检测全血或保存不良的血清样品时未检测到假阳性反应。FERNANDEZ等[30]建立免疫组化法(IHC)检测急性感染ASFV猪的扁桃体组织病理学变化，通过检测发现感染ASFV猪有出血、单核巨噬细胞细胞增多和淋巴细胞凋亡的现象。免疫组化法特异性好，但对于临床症状不明显的病例，确诊有一定难度。SZEREDI等[31]使用IHC检测组织样品中ASFV的p72蛋白，结果表明所有福尔马林固定和石蜡包埋的组织样品中均存在ASFV，该试验中的IHC方法对于诊断急性ASF是十分有效的辅助实验室检测方法。KAZAKOVA等[32]利用重组表达的p30蛋白开发免疫印迹测试系统(Rec p30-IB)，对感染ASFV猪的血清和组织样品进行评估，该方法的特异性和灵敏度分别为98.75%，100%。

1.3 其他检测方法

1.3.1红细胞吸附试验(HAD) 作为一个ASFV特有的检测方法，其原理是在体外培养感染ASFV的巨噬细胞时，红细胞与ASFV感染的巨噬细胞膜发生吸附现象，巨噬细胞外围形成典型的“玫瑰花环”现象。但HAD试验的局限性是红细胞发生吸附反应之前出现细胞病变，需要使用FAT或PCR的方法辅助诊断。有研究报道，一些分离株虽然能诱导巨噬细胞出现细胞病变，但是不能产生红细胞吸附现象[33]，因此HAD可用于发生疑似疫病猪群的辅助检测。

1.3.2液态芯片技术 液态芯片技术Luminex xMAP是一种使用荧光羧化微球的高通量检测系统，可提供多达100个检测通道，通过嵌入2种不同比例的荧光染料微球，待检样本与其混合后可使样本带上荧光标记，最后使用专门的流式细胞仪进行分析。WANG等[34]基于液态芯片技术Luminex xMAP建立一种能够同时检测蓝舌病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、贝氏柯克斯体(CB)、ASFV、西尼罗热病毒(WNV)、伯氏疏螺旋体病毒(BB)、水泡性口炎病毒(VSV)、裂谷热病毒(RVFV)、埃博拉病毒(EBOV)、施马伦贝格病毒(SBV)10种虫媒病原体的液体微珠阵列，可检测至少10个拷贝的目的基因，该方法具有高通量、高灵敏性、高特异性和重复性，具有广阔的应用前景。

1.3.3生物传感器法 生物传感器是将生物活性材料(酶、DNA、抗体、抗原等)与理化换能器有机结合的一门交叉科学，可进行实时和无标签检测，具有快速筛查，所需样本量少，灵敏度高等特性，对生物技术的发展必不可少。MASSIMO等[35]建立了检测猪血中ASFV DNA的表面等离子体共振(SPR)检测方法，并研制了一种ssDNA/LNA嵌合探针作为ASFVp72基因互补序列的“分子诱饵”的无标记可重复使用的核酸生物传感器，该方法可快速处理多个样本(最多40个)，单次检测时间仅需5 min，最低检测限为ASFV DNA的178拷贝/μL，定量限为245拷贝/μL。该方法可作为ASF的初步诊断方法，具有相对快速、易用、感应面的可重用性和检测成本低等优点。

1.3.4聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)检测方法 GRZEGORZ等[36]建立了聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)检测方法用于检测感染猪和野猪中是否含有ASFV，该方法使用了3个特异性引物，其中2个是外螺旋引物，对ASFV具有较强特异性，且与CSFV、PRRSV、PEDV无交叉反应，对含p72基因的质粒扩增的敏感度为7.2×102拷贝/μL。该方法结合了等温扩增PCR和传统PCR和PT-PCR的优点，检测成本低、使用便携，可作为ASF现场诊断方法。

1.3.5基于CRISPR/CAS的检测方法 CRISPR/CAS系统具有准确识别特定序列的能力，科研人员根据这种特性将其应用到ASFV的检测中，HE等[37]将CRISPR/CAS检测与基于荧光的护理点(POC)系统相结合，以实现快速准确的病毒检测。在没有核酸扩增的情况下，检测可在2 h可达到1 pmol/L，该方法具有恒温、无扩增的特点，不需要昂贵的仪器设备，不需要复杂和耗时的样品制备过程，可直接用猪血浆做检测样品。Bai等[38]建立RAA-Cas12a系统检测方法(Cas12a-based On-site and Rapid Detection System，CORDS)，它结合了重组酶辅助扩增(RAA)和CRISPR/Cas12a用于ASFV的检测。该方法可在1 h内识别出ASFV的DNA靶点，且只需要1个培养箱即可，将CORDS试剂冻干到3个试管中，在4℃可以保存7 d，且灵敏度不变。该方法具有快速、灵敏、易操作，冻干的CORDS可进行长期运输和储存，因此可作为ASFV现场检测方法。LU等[39]建立了一种由Cas12a介导的的便携式试纸检测方法，用于ASFV的快速检测，利用纳米金颗粒-抗体结合物设计试纸条与Cas12a介导的ASFV检测相结合，无需仪器即可准确检测到猪样本中是否含有ASFV，灵敏度与qPCR方法相当。WANG等[40]利用RPA技术结合测流层析，借助Cas9蛋白的功能开发的ASFV CASLFA诊断方法，与RT-PCR诊断符合率达到100%，操作快速简便，无需专业技术知识和复杂的辅助设备的情况下就能使用。

2 规模化猪场生物安全防控

ASFV对环境条件具有很高的抵抗力，在0～4℃条件下储存，可长时间保持很强的感染力，由于感染猪的分泌物和排泄物中存在ASFV，因此很容易污染环境，成为可能的病毒传染源[41]，因此猪场是否消毒彻底是控制病毒潜在传播的关键因素。有效的预防性消毒是防止传染病发生的重要部分，也是猪场生物安全的重要措施之一。选择有效的消毒方法，严格对猪场进行定期消毒，一方面可以有效阻止病原体通过载体传入猪场；另一方面对阻止病原在猪舍内部群体间扩散也至关重要。具体的措施是设立专门的消毒站对病死猪进行无害化处理，其他辅助设施如在生产区入口设淋浴和紫外消毒室，在生产区大门口设置车辆消毒池，在各猪舍门口内设脚踏的消毒盆等。ASFV不耐热，60℃作用30 min即可灭活，使用一般的消毒剂均有效，例如：1%的甲醛、0.007 5%～0.03%的次氯酸钠、2%的氢氧化钠、戊二醛、1%的卫可、0.003% QAC、克里奥林和来苏尔等[42]。以下详细介绍针对含病毒的不同物质所采取的不同消毒方式。

2.1 对携带病原的猪肉产品及猪场饲料和饮用水的消毒ASFV可以在猪肉和猪肉产品中长期存活，在室温下可在腌肉中存活60 d甚至更长时间，ASFV在干腌处理13 d才可被灭活，但此类产品通常的加工时间最长为60 d[43]，因此应严禁外来猪肉产品进入猪场。保持猪场饮用水的卫生对预防疾病至关重要，ASFV污染的复合饲料在22～25℃条件可存活5 d，而在4～6℃的保存条件下可存活40 d[44]。其中泔水中携带大量病原体，因此猪场应禁止将泔水与饲料混合饲喂生猪[45]。另外，0.5%次氯酸钠是推荐使用灭活ASFV的化合物之一，同时也是OIE和美国国际动物生物制品合作研究所所推荐的消毒剂，具有广谱的抗菌活性，能有效杀灭各种微生物，包括病毒、细菌、真菌及其芽孢，可用于猪场饮用水的消毒，也可将0.5%次氯酸钠进行喷洒，对于冲洗后洁净的食槽、贮水槽、用具等的环境消毒[42]。需要注意的是，有机物质会抵消次氯酸钠的活性从而使次氯酸钠丧失消毒作用[46]。

2.2 对猪舍环境的消毒猪舍环境的严格消毒是预防ASF发生的主要措施，ASFV可以在被感染猪排泄的尿液、粪便中保存3～5 d，垫料也可作为ASFV传播的基质，可以伴随人员流动和场内车辆等工具间接感染其他猪只[43]。GUINAT等[8]研究发现ASFV通过气溶胶传播也是其潜在的途径。作为生猪的养殖场所，猪舍是整个养殖的核心，需要定期进行全方位无死角的消毒，包括养猪场的户外环境和养猪场的舍内环境，例如在猪舍的外部，养猪场的墙壁、道路和围栏应喷洒石灰水，消毒池、脚踏盆应定期更换消毒剂；全场主干道用石灰水每天白化1次，猪舍外墙1 m范围内铺设生石灰消毒，雨后及时添加；猪舍内过道通常用石灰水每2 d白化消毒1次，且每天使用戊二醛消毒液喷洒消毒；猪舍内每周进行带猪消毒；猪舍建立污染区和洁净区，包括更衣室和淋浴间，员工必须经过淋浴才可以从进入洁净区，禁止任何设备、人员和的动物直接从脏区进入净区[45]。对于泥浆、废水、粪便等污染物常用热处理的方式对病毒灭活，这种方法简单方便且廉价，处理后的污物可直接排放，而选用消毒剂处理可以为氢氧化钙(石灰)和氢氧化钠。需要注意的是，在选用氢氧化钙时，要考虑温度的因素，在4℃和22℃分别以1%和0.5%的浓度处理30 min可使ASFV失活。对于无法高温灭菌的设备可以进行戊二醛低温消毒，而对于戊二醛的使用和暴露需要监测，因为戊二醛是一种致癌物质。对于器械和医疗设备可用3%～5%来苏尔进行消毒，地板墙壁可用5%～10%来苏尔进行消毒，对于非关键的地面和墙壁可用QAC进行消毒[46]。

2.3 对猪场人员和车辆的消毒ASFV在环境中较强存活能力，尤其是受到有机物的保护的情况下可以存活时间很长，病毒的抵抗力意味着可能通过被污染的衣服，鞋子，设备和车辆进行传播[47]。人员流动在传播病原体中的作用已得到充分的证明，外来人员的衣帽，鞋靴，头发等都可能携带有病毒[43]，因此，员工进猪场前，需在指定隔离点隔离，更换隔离点衣服和鞋靴，自己的衣服鞋子要用消毒液浸泡消毒，设置专用洗澡消毒通道，在隔离点需要采样(手掌、鼻孔、头发、鞋底)进行ASF检测，检测结果为阴性方可进场，入场前更换专业消毒服进入。ASFV可以维持很长时间在被污染的产品或车辆上，通过转猪车辆可将病毒带入猪场[48]，运输车辆中残留有粪尿、血渍、体表渗出物、饲料残渣等，因为ASFV可以承受相当大的pH值变化，消毒剂直接作用于这些富含蛋白质的污染物是无效的[42]，运输生猪、饲料或者收集死猪的车辆及驾驶员构成了疾病传播的主要风险，在每次运输后，应及时清洁和消毒车辆，必要时使用官方授权的消毒剂进行清洁和消毒，并提供操作执行证明，特别注意对车辆与猪接触的地方，驾驶室以及装卸时使用的防护服重点消毒，驾驶员处理动物应严格遵守农场的生物安全流程，猪场应建立生猪装载区和禁止驾驶员进入生产区来预防车辆污染[6]。对于大面积的车辆等运输工具，较为有效的消毒措施为2%的烧碱溶液进行清洗，污染严重的衣物鞋子在进行物理清洗后也需要用2%的烧碱进行浸泡清洗消毒[46]。

2.4 对猪场动物媒介管理ASFV除了通过直接接触患病动物的体液或排泄物，间接接触受污染的车辆人员感染外，还可以通过虫媒传播，ASFV可以在软蜱中存活至少8周[41]。试验表明喂食感染ASFV血液的苍蝇，体内病毒存活时间长达12 h[49]。另一个试验中，猪食入添加了ASFV血液为食的苍蝇而感染，证明苍蝇可作为ASF的潜在传播媒介[50]，其他吸血的无脊椎动物，如虱子、螨虫吸食感染ASFV猪的血液后，可传播病毒[46]。因此，猪场对于ASFV传播媒介的管理也不容忽视，定期对猪舍进行灭蝇，灭蚊和杀虫，以减少媒介数量，最大限度减少节肢动物在ASF中的传播作用，提高猪场生物安全防控。

3 讨论

2018年，我国首次暴发ASF[51]，并迅速蔓延至全国，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。尽管国内外对于ASFV疫苗的研发已经有100多年的时间，迄今为止，尚无安全有效的商业化疫苗上市。只有采取快速准确的诊断才能实现对ASF发生和流行的监控。目前应用的各种ASFV检测技术各有优缺点。ELISA技术检测所需样品的处理时间短，操作程序较为简单，经济成本也较低，但是相较于RT-PCR技术灵敏度较低。RT-PCR技术具有灵敏度高的特点，但样品的处理相对繁琐，且需要较为昂贵的仪器。在PCR的基础上，LAMP和RPA等温扩增检测技术，具有快速简便、仪器简单且便于携带等特点，适用于生产应用，但仍需提高特异性和灵敏度。随着分子生物学和血清学技术水平的不断提高，试纸条检测技术的灵敏度和特异性方面有很大的提高，同时还具有操作方法简便、操作时间短、经济成本低等特点，非常适合基层生产的推广使用。在这几种技术的基础上，衍生出许多具有更高创新性的检测方法，但它们的实用效果还需要作进一步检验。在实际生产的检测诊断过程中，应当选择符合当地实际情况的一种，或者联合应用多种检测方法进行检测和确诊。

我国是世界上最大的生猪养殖和消费国家。但在生猪的生产过程中缺乏统一的生物安全标准，在运输、屠宰、肉制品加工等各个环节也没有统一的规范和管理。另一方面，由于饲养模式、规模大小、猪场管理和经济状况不同等因素的影响，猪场的生物安全措施的制定和执行等方面存在众多问题。目前，只有将生物安全的国家宏观调控和生物安全措施的有效实施有机结合在一起，才能最大程度地避免ASF疫情的发生和流行。在健康一体化(one public，one health)的时代背景下，加强动物的生物安全保障，就是对人类健康的有力保障。