Duffy、Diego等4种血型系统基因频率及多态性研究

易 玲，黄志翔，谭 涛，向雅香

湖南省岳阳市中心血站，湖南岳阳 414000

红细胞血型系统在输血技术学中具有重要意义，目前已发现人类红细胞有36种血型系统，360种血型抗原[1]。红细胞血型系统具有高度的遗传多态性，不同民族和地区存在差异[2]。本研究采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法(PCR-SSP法)对Duffy、Dombrock、Diego、Kidd 4种红细胞血型系统8个抗原基因进行分型，分析岳阳地区汉族人群血型抗原基因频率和多态性。

1 资料与方法

1.1一般资料 随机留取本血站2019年12月303份非血缘关系岳阳籍、汉族、ABO血型不限、RhD(+)固定献血者5 mL EDTA抗凝全血标本。年龄18～55岁，男131名，女172名。本研究经无偿献血者知情同意。

1.2仪器与试剂 仪器：离心机(Eppendorf公司，德国)；凝胶成像仪(Bio-Rad公司，美国)；PCR仪(Life technologies公司，美国)。试剂:EX-DNA Kit(天津TIANLONG公司，批号:E0819040131);人类Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系统抗原基因分型检测试剂(天津吉诺泰普生物技术有限公司，批号:E20191009)。

1.3方法

1.3.1样本DNA提取 按TIANLONG EX-DNA Kit试剂说明书提取全血基因组DNA。

1.3.2PCR扩增及电泳 按照按照试剂盒说明书进行PCR-SSP法扩增。Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系统PCR循环参数:96 ℃预变性2 min;96 ℃ 20 s,68 ℃ 60 s,5个循环;96 ℃ 20 s,65 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,10 个循环;96 ℃ 20 s,62 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,15个循环;72 ℃延长 2 min,4 ℃保存。PCR产物采用2.5%琼脂糖凝胶于电压140～150 V条件下电泳10～15 min,采用自动凝胶图像分析仪成像并记录电泳结果。

1.3.3PCR-SSP法结果判定 每个PCR反应都产生强弱不一的1 009 bp内对照产物。根据有无PCR产物及产物长度按表1指定相应血型基因。在相应碱基对位置观察有无特异性条带，若出现特异性条带判读为阳性，未出现则判断为阴性。

1.4统计学处理 应用SPSS24.0统计软件进行数据分析。按基因计数法计算基因频率，计算观察值和期望值，采用χ2检验分析基因分布是否符合Hardy-Weinberg平衡法则，按参考文献[3]计算抗原不配合率。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1岳阳汉族人群红细胞血型系统抗原基因型及基因频率 Duffy、Dombrock、Diego和Kidd血型系统抗原基因频率具有多态性，其血型系统对偶抗原不配合率分别为0.095 0、0.142 3、0.047 0和0.374 6。采用χ2检验比较基因型分布的观察值和期望值，各血型系统的P>0.05，符合Hardy-Weinberg平衡法则。见表2。

表1 红细胞血型分型试剂盒PCR引物及扩增产物长度

表2 岳阳汉族人群红细胞血型系统抗原基因型和基因频率

2.2岳阳汉族人群与其他地区、民族人群血型系统等位基因多态性比较 见表3～6。

表3 Duffy血型系统等位基因在中国不同地区、民族人群中的分布

续表3 Duffy血型系统等位基因在中国不同地区、民族人群中的分布

表4 Dombrock血型系统等位基因在中国不同地区、民族人群中的分布

续表4 Dombrock血型系统等位基因在中国不同地区、民族人群中的分布

表5 Digeo血型系统等位基因在中国不同地区、民族人群中的分布

表6 Kidd血型系统等位基因在中国不同地区、民族人群中的分布

3 讨 论

红细胞血型系统在临床输血中具有重要意义，也是人类的重要遗传标志，每个人的红细胞选择性表达其中一部分血型抗原。目前临床输血主要关注ABO、Rh血型系统，对Duffy、Diego、Dombrock、Kidd血型系统关注较少，即临床输血大多执行的ABO、Rh血型系统相配合，其他血型系统相容性的原则，这对第1次输血的患者影响不大，但对需多次输血的患者则影响很大[16]。临床对多次输血的患者进行交叉配血和不规则抗体筛选时，常有交叉配血不合现象发生，发现有抗-Jkb、抗-Dia、抗-Dob、抗-Fya等不规则抗体[17-18]，甚至还有由抗-Fyb、抗-Jkb、抗-Ce联合抗体引起的溶血性输血反应的个例报道[19]。这给输血带来极大麻烦，往往短时间内难以找到合适的献血者，危及患者的生命。因此，了解一个地区人群多种红细胞血型系统基因频率分布特点，对指导临床科学合理用血，特别是需要反复输血的患者的用血安全具有重要意义。

有研究发现，岳阳汉族人群的Duffy、Dombrock、Diego、Kidd血型系统抗原基因频率具有多态性，Dombrock血型系统的Doa/Dob、Kidd血型系统的Jka/Jkb对偶抗原不配合率较高，分别为0.142 3、0.374 6，这些血型系统的个体因随机输血或妊娠，产生同种抗体的概率也较高，再次输血时易引起溶血性输血反应或存在交叉配血难以找到相容性血液的风险，再次妊娠时易发生新生儿溶血病[20]。

本研究结果显示，岳阳汉族人群的Duffy、Dombrock、Diego、Kidd血型系统抗原基因频率的多态性与我国其他地区汉族和少数民族相比，大部分差异无统计学意义(P>0.05)，仅岳阳汉族人群的Duffy血型系统与山西运城汉族人群差异有统计学意义(P<0.05)；Dombrock血型系统与西藏藏族、新疆哈萨克族差异有统计学意义(P<0.05)，与哈尔滨满族差异无统计学意义(P>0.05)；Duffy血型系统与新疆哈萨克族差异有统计学意义(P<0.05)，与西藏藏族、哈尔滨满族差异无统计学意义(P>0.05)；Diego、Kidd血型系统与新疆哈萨克族、西藏藏族、哈尔滨满族差异无统计学意义(P>0.05)。提示不同血型系统在我国的不同民族、不同地区人群中分布存在着共性和个性。

随着输血技术学的发展，如何使临床精准输血、最大限度地避免免疫性输血不良反应，从而达到科学合理、效果更好是输血技术研究的重要方向[21]。对固定献血者检测多种红细胞血型系统、建立献血者血型基因信息库，对稀有血型患者选择配合型血液输注具有重要意义。

本研究初步建立了岳阳地区多种红细胞血型系统数据库，充实了国家稀有血型献血者数据库，为临床精准输血提供了保障。