HtrA4和VE-cadherin在子痫前期中的表达及意义

李然然，林小满，孙礼强，张洪文，韩秋峪△

1.徐州医科大学研究生学院，江苏徐州 221004;2.徐州医科大学附属医院妇产科，江苏徐州 221006

子痫前期(PE)为妊娠期疾病，以高血压为主要特征，妊娠至20周后常伴有蛋白尿和(或)母体器官功能障碍[1]。有研究认为，PE与胎盘中滋养细胞未充分浸润及血管生成受阻有关，细胞侵袭分子及血管生成分子的表达在PE中发生明显改变[2-3]。PE使母体和胎儿的健康受到严重危害，其全球发病率约为3%～8%[4]。

(4)信任计算模块。将策略决策模块分析的结果，连同用户使用反馈作为评估CSP信任值的依据，并计算其信任值。

1.3 统计学处理 采用SPSS19.0软件进行数据的统计分析。计量资料使用表示,比较采用t检验，计数资料以率表示，比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

HtrA丝氨酸肽酶4(HtrA4)是一种丝氨酸蛋白酶，健康妊娠中，血清HtrA4水平在妊娠24～25周时逐渐升高，然后整个妊娠期间保持相对稳定[5]。研究发现，HtrA4与PE关系密切[6]。有研究表明HtrA4促进滋养细胞的侵袭[7]，也有研究表明HtrA4抑制滋养细胞的迁移和生长。在早发型PE中，HtrA4的水平在发病时明显升高[8]。然而，HtrA4在胎盘发育中的确切作用仍不清楚。

血管内皮钙黏素(VE-cadherin)为钙黏素(cadherin)的重要成员之一，主要分布在血管内皮细胞中，为内皮细胞中特异性表达的关键黏附性连接蛋白。VE-cadherin功能改变导致血管通透性异常。研究发现，VE-cadherin在正常胎盘绒毛滋养细胞中表达，可抑制滋养细胞浸润生长，对滋养细胞的侵袭行为有明显抑制作用[9]。此外，VE-cadherin也影响妊娠滋养细胞的转移[10-11]。本文主要研究母血和胎盘组织中HtrA4与VE-cadherin水平及其与临床指标的关系，探讨HtrA4与VE-cadherin对滋养细胞分化的影响，深入研究PE的发病机制。

1 资料与方法

2.43组胎盘组织中HtrA4和VE-cadherin的蛋白表达水平比较 与健康妊娠晚期孕妇比较，PE孕妇胎盘组织中HtrA4和VE-cadherin的蛋白表达水平降低(P<0.05)；与PE早发组比较，PE晚发组HtrA4蛋白表达水平升高，VE-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。见图2。

2.33组胎盘组织中HtrA4和VE-cadherin的mRNA表达水平比较 与健康妊娠晚期孕妇比较，PE孕妇HtrA4和VE-cadherin的mRNA表达水平降低(P<0.05)；与PE早发组比较，PE晚发组HtrA4的mRNA表达水平升高,VE-cadherin mRNA表达水平降低(P<0.05)。见图1。

表1 引物序列

2.23组母血和胎盘组织中HtrA4和VE-cadherin水平比较 与健康妊娠晚期孕妇比较，PE孕妇母血及胎盘组织中HtrA4水平升高，VE-cadherin水平降低(P<0.05)；与PE早发组比较，PE晚发组母血及胎盘组织中HtrA4水平降低，VE-cadherin水平升高(P<0.05)。见表3。

2 结 果

2.13组一般资料比较 3组研究对象的年龄、BMI比较，差异无统计学意义(P>0.05)，而PE孕妇在收缩压、舒张压等方面与健康妊娠晚期孕妇比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 3组一般情况比较

表3 3组母血和胎盘中HtrA4和VE-cadherin水平比较

1.2方法 分娩前空腹抽取研究对象静脉血3 mL，室温静置，3 000 r/min离心10 min，取上清液。胎盘娩出后，立即取胎盘母体面中央部位组织(约1 cm×1 cm×1 cm)，避开出血及钙化等部位，随后采用生理盐水漂洗，滤纸吸干水分，-80 ℃保存。分离母血及胎盘组织，采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测VE-cadherin和HtrA4水平。蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定胎盘组织中HtrA4和VE-cadherin蛋白水平。实时荧光定量PCR(qPCR)测定组织中VE-cadherin和HtrA4的mRNA表达水平。采用Trizol提取总RNA，反转录为cDNA，随后采用qPCR试剂盒进行qPCR反应，以β-actin为内参，采用2-ΔΔCt计算其循环阈值。引物序列如下，见表1。

注：与对照组比较，aP<0.05；与PE早发组比较，bP<0.05。

1.1一般资料 随机选取2018-2019年于本院住院分娩的PE孕妇78例，其中早发型40例(发病孕周≤34周)为PE早发组，晚发型38例(发病孕周>34周)为PE晚发组。选取同期健康妊娠晚期孕妇40例为对照组。收集所有研究对象的年龄、身高、体质量，计算体质量指数(BMI)，以及所有研究对象的分娩孕周、收缩压、舒张压等基本情况。

注：A为Western blot检测胎盘组织中蛋白表达水平结果；B为Western blot检测胎盘组织中蛋白表达水平结果统计图；与对照组比较，aP<0.05；与PE早发组比较，bP<0.05。

3 讨 论

HtrA4是一种特异性丝氨酸蛋白酶，在调节细胞生长、应激反应和衰老过程中有重要作用。研究发现，HtrA4与PE密切相关，HtrA4水平升高可能与PE的发病相关，HtrA4可作为诊断PE的生物标志物[6]。然而，另外的研究则认为，PE中HtrA4水平降低[7]。本研究发现，HtrA4在健康妊娠晚期孕妇及PE孕妇中均有表达，与健康妊娠晚期孕妇比较，PE孕妇HtrA4水平升高，与PE早发组比较，PE晚发组HtrA4水平降低，研究结果与孔红芳等[15]一致。然而，本研究Western blot和qPCR结果提示PE孕妇HtrA4的mRNA和蛋白表达水平低于健康妊娠晚期孕妇，与PE早发组比较，PE晚发组HtrA4的mRNA和蛋白表达水平升高。

PE是最常见且潜在的严重的妊娠相关疾病之一，是孕产妇死亡的主要原因，几乎占妊娠相关疾病病死率的15%～20%[12]。PE并非简单的妊娠并发症，而是涉及肝、肾、肺、凝血系统和神经系统等多器官功能衰竭的综合征。研究表明PE与氧化应激、内皮细胞功能障碍、血管收缩、代谢变化、血栓性疾病及炎性反应等有关，然而确切的机制仍不清楚[13-14]。

但是技术变革的速度还是令消费者和环保组织感到震惊，因为他们认为新的基因编辑技术尚未通过充分的审查就已经上市，他们已经请求监管组织进一步加强基因编辑食品安全性审查。

VE-cadherin影响正常滋养细胞的侵袭及分化等，检测VE-cadherin的mRNA 表达水平或将成为妊娠滋养细胞疾病的重要参考指标之一[16-18]。TSENG等[19]研究发现，随着HtrA4水平升高，VE-cadherin在人脐血管内皮细胞的水平降低；HtrA4在人静脉内皮细胞中裂解VE-cadherin以破坏细胞接触并增加通透性，同时表明HtrA4可能是胎盘来源的蛋白酶，其通过裂解VE-cadherin破坏母体内皮细胞。

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本文研究结果提示，HtrA4与VE-cadherin均参与了PE疾病发展，随着PE孕妇孕周的增加，HtrA4与VE-cadherin水平也发生改变，VE-cadherin的表达可能与PE滋养细胞的侵袭分化发生改变有关。