CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌组织中的表达及其与预后的关系 ①

王 磊，刘 燕

(1.开封市中心医院病理科，河南 开封 475000；2.开封市人民医院肿瘤科，河南 开封 475002)

膀胱癌是泌尿系生殖系统常见恶性肿瘤之一，其发病率居常见恶性肿瘤的第9位，病死率位于13位[1]。随着生活环境的改变以及医疗水平的进步，使膀胱癌的发生率及检出率明显提高，成为影响人们健康状况的主要疾病[2]。近年来，在膀胱癌的发生、发展中，表观遗传学作用机制受到临床重点关注。抑癌基因表达的降低或其功能丧失，极易诱发各种恶性肿瘤，且在发生、发展中起到关键性作用[3]。尾型同源盒转录因子2(CDX2)与同源框蛋白A9(HOXA9)是与人类关系最为密切的抑癌基因，其结构改变会促使细胞转化为恶性。CDX2是人体内特异性表达的核转录因子，其表达与调控的过程复杂，是一个多因子、多渠道参与，在基因结构改变以及启动子区域的甲基化，均会导致CDX2蛋白表达降低[4]。HOXA9蛋白是同源盒基因内的一员，HOX基因可编码DNA，结合转录因子，起到调节基因表达、分化作用[5]。本研究分析CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌组织中的表达及其与预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

分析2014-12～2016-12在开封市中心医院行膀胱癌根治术100例患者的临床资料。男61例，女39例；年龄40～73岁，平均(58.41±9.18)岁；病变直径2～7cm，平均(3.97±1.02)cm；低分化25例，中分化16例，高分化59例；淋巴结转移28例，无淋巴结转移72例；T1期25例，T2期31例，T3期28例，T4期16例。另选取同期行良性膀胱炎而进行手术患者100例作为对照组，男65例，女35例；年龄40～75岁，平均(59.01±9.23)岁；两组患者基线资料比较无统计学意义(P>0.05)，可进行比较。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：(1)患者术前均未接受放化疗治疗；(2)所有患者均有膀胱组织标本，具备完整的检查、治疗及随访资料；(3)具备随访条件。排除标准：(1)术前接受放化疗治疗；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)伴其他恶性肿瘤者；(4)临床资料欠缺者。

1.3 检测方法

CDX2和HOXA9蛋白表达检测，膀胱癌组留取膀胱癌组织及癌旁组织标本，其标本超过4cm；对照组留取膀胱正常黏膜组织，组织标本以30g/L甲醛溶液固定，石蜡包埋后切片，约4μm。免疫组织化学法测定CDX2和HOXA9蛋白表达，人鼠抗人CDX2单克隆抗体(上海信裕生物科技有限公司)、人鼠抗人HOXA9多克隆抗体(上海煊翎生物科技有限公司)，按照免疫组化学法测定步骤，烤片温度低于60℃，1～2h。石蜡切片行二甲苯脱蜡，脱水至水化，用PBS冲洗。行抗原修复采用热修复，阻断灭活内源性过氧化物酶，将PBS甩去后，加入正常血清工作液37℃，孵育15～20min。滴加CDX2和HOXA9一抗，4℃冰箱内孵育、过夜。双重染色后，自来水冲洗停止显色，苏木素复染，盐酸酒精进行分化、蓝化，脱水、封片，镜检，行病理观察。每个组织切片随机选取5个染色均匀的高倍视野进行观察，统计视野内阳性细胞染色情况。阴性：视野内无阳性细胞染色；弱阳性：阳性细胞染色<1/4；中阳性：阳性细胞染色在1/4～1/2；强阳性：阳性细胞染计数超过1/2。低表达：CDX2和HOXA9蛋白阳性细胞染色为阴性或弱阳性；高表达：CDX2和HOXA9蛋白阳性细胞染色为中阳性或强阳性。

1.4 随访

膀胱癌组患者均获得随访，无失访、脱落患者，随访至2019年12月31日，统计患者3年累积生存率。

1.5 统计学方法

采用SPSS20.0统计学软件处理数据，计数资料经n(%)表示，采取χ2检验；采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同标本组织CDX2和HOXA9蛋白阳性率表达

膀胱癌组织CDX2和HOXA9蛋白阳性率分别为47.0%、65.0%，均高于癌旁组织、正常黏膜组织，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 不同标本组织CDX2和HOXA9蛋白阳性率表达[n(%)]

2.2 不同CDX2和HOXA9蛋白表达患者3年累积生存率比较

CDX2和HOXA9蛋白高表达患者3年累积生存率分别为38.10%、39.39%，均低于CDX2和HOXA9蛋白低表达患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同CDX2和HOXA9蛋白表达患者3年累积生存率比较[n(%)]

2.3 CDX2和HOXA9蛋白表达与患者预后的相关性分析

Spearman 检验分析，CDX2和HOXA9蛋白表达与患者预后呈正相关性(r=0.401，0.508，P<0.05)。

3 讨论

膀胱癌作为危害人类身心健康主要恶性肿瘤，其免疫、放化疗取得一定进展，但仍未获得理想效果，预后差。而且现今膀胱癌存在的肿瘤分子标记物仍不能充分反映恶性肿瘤的生物学特征，给术后辅助治疗及预后判断带来一定难度。因此，如何开辟一条新的治疗途径，为治疗及术后复发提供依据，成为临床研究热点。

CDX2蛋白隶属于尾相关性同源盒基因家族，由3个外显子及2个内含子组成，以螺旋-环-螺旋方式，与DNA相结合，形成转录因子调节DNA的表达。当前CDX2蛋白在胃癌、结直肠癌组织中的具有典型特征基因，并呈阳性表达，且在肠上皮演变逐渐发展至癌变占据着重要作用[6]。HOXA9蛋白是HOX基因的A簇同源盒基因，可调节内皮细胞分化、活化，并具有促使胚胎发育的作用。有研究显示[7]，HOXA9蛋白对DNA不断编码，并与转录因子的结合，可能是基因突变或移位，造成DNA编码错误，进而使HOXA9蛋白不断蓄积，导致HOXA9蛋白呈高表达。CDX2蛋白表达位于正常肠黏膜上皮细胞，是维持肠黏膜正常发育、分化的重要蛋白因子，在正常黏膜组织内无表达。若蛋白水平增加，诱导了黏膜上皮化生，促使肿瘤侵袭性的发生。HOXA9蛋白是调节细胞分化、发育以及增殖的重要调节因子，随着肿瘤进展，恶性肿瘤的形成，或基因突变及移位，导致编码错误，造成肿瘤细胞内HOXA9蛋白的高表达。本组研究中，膀胱癌组织CDX2和HOXA9蛋白阳性率分别为47.0%、65.0%，均高于癌旁组织、正常黏膜组织，差异有统计学意义(P<0.05)。此次研究结果表明，在膀胱癌组织标本内，CDX2和HOXA9蛋白呈高表达，其阳性率明显增加。可能是膀胱癌的形成，恶性肿瘤细胞的形成以及迁移，致CDX2和HOXA9蛋白表达升高[8]。张健锋等[9]研究分析CDX2蛋白与胃癌之间的关系发现，CDX2蛋白表达与胃癌浸润深度、胃癌的TNM 分期、有无淋巴转移有关。张盛等[10]研究发现，在浆液性卵巢癌中HOXA9蛋白表达阳性率为75.8%明显高于良性浆液性肿瘤的34.8%，与卵巢癌的分级和预后转归具有一定相关性，差异有统计学意义(P<0.05)。因此CDX2和HOXA9蛋白在恶性肿瘤的发生、进展中占据着重要作用。

患者预后方面，CDX2和HOXA9蛋白高表达患者3年累积生存率分别为38.10%、39.39%，均低于CDX2和HOXA9蛋白低表达患者，差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman 检验分析，CDX2和HOXA9蛋白表达与患者预后呈正相关性。本研究提示，CDX2和HOXA9蛋白高表达促使膀胱癌的进展，其原因可能是CDX2和HOXA9蛋白高表达会促进恶性肿瘤的生长及侵袭，肿瘤恶性程度高，使患者预后差。因此根据CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌发生、发展中的作用，通过抑制CDX2和HOXA9蛋白的表达，或许可作为治疗膀胱癌的新方法。

综上所述，膀胱癌组织中尾型同源盒转录因子2与同源框蛋白A9表达均有所提高，两种蛋白表达与患者预后密切相关，高表达患者生存率越低，在膀胱癌中的发生、发展中占据着重要作用，并为临床治疗方案的选择及制定提供新的思路。