陈 斌
(福建省淡水水产研究所,福州350002)
半刺厚唇鱼(Acrossocheilius hemispinus)隶属鲤形目(Cypriniformes)鲤科(Cyprindae)鲃亚科(Barbi⁃nae)光唇鱼属(Acrossocheilus),俗称“石板”“坑鱼”,分布于湖南省湘江、资水、沅水、澧水[1]及福建省闽江、九龙江、交溪、霍童溪等水系[2]。近年来,为增加种群数量,满足人们的消费需求,人工养殖半刺厚唇鱼逐渐兴起,养殖方式包括水泥池精养、土池养殖、稻田生态养殖等,其中水泥池精养病害最多,尤其小瓜虫病对其危害最大,造成的死亡率最高。小瓜虫病病原为多子小瓜虫(Ichthyopthirius multifillis),多子小瓜虫隶属原生动物门(Protozoa)寡膜纤毛纲(Oligohymenophorea)膜口目(Hymenostomatida)凹口科(Ophryoglenidae)小瓜虫属(Ichthyophthirius),主要寄生在鱼类的皮肤、鳍条和鰓等部位,生活史分为成虫、包囊、幼虫3个阶段[3],其中幼虫阶段具有感染性,能够感染大部分的淡水鱼类[4],半刺厚唇鱼对小瓜虫的易感性较强,感染后治疗周期较长、死亡率较高,为保障半刺厚唇鱼养殖产业的顺利发展,筛选治疗该鱼小瓜虫病的有效药物迫在眉睫。
1.1.1 试验用鱼自然感染小瓜虫及健康的半刺厚唇鱼,均来自福建省顺昌县兆兴鱼种养殖有限公司,平均体重(10.5±2.7)g。试验前,将健康半刺厚唇鱼暂养于实验室塑料精养桶中,水温控制在18.0~21.0℃,暂养24 h,待半刺厚唇鱼适应环境后开始试验。
1.1.2 试验药物试验选用的8种常用渔药均购自渔药专卖店,其药物名称、有效成分含量、生产企业详见表1。试验用渔药在使用前先配制成母液,然后按照试验设置的浓度和试验溶液体积计算相应的母液添加量,按所需体积稀释。
表1 试验用药来源
1.1.3 其他材料小瓜虫传代感染容器为4 m3的黑色塑料精养桶,药物治疗试验容器为直径30 cm、高30 cm的红色塑料桶,试验用水和发病鱼池用水相同,水温18~21℃,pH 6.8~7.2。
1.2.1 小瓜虫的传代感染取30尾自然携带小瓜虫的半刺厚唇鱼放入塑料精养桶中,同时,放入600尾健康的半刺厚唇鱼,感染过程中水温保持在18~21℃,使用遮阳网避免阳光直射,正常换水和投喂,15 d后发现试验鱼体表、鳍条和鳃出现许多白点,经镜检均为小瓜虫营养体,说明试验鱼成功感染小瓜虫。
1.2.2 药物治疗试验用红色塑料桶装水,每桶10 L,按试验设计配制药物浓度并设置空白对照,每种药物浓度设置3个重复,将患病鱼随机分组,每桶5尾。每天更换1/2的水,并补充全水体50%的药物,记录患病鱼死亡情况,及时捞出死鱼。分别于试验第2、4、6、8天每桶随机取1尾鱼,鱼体相同部位用盖玻片刮取适量黏液,放回患病鱼,压片,4倍显微镜下计一个视野小瓜虫营养体数量,20 d后镜检每组存活鱼,并计算最终成活率。试验鱼累计死亡率=试验鱼累计死亡数量/每组试验鱼总数×100%;试验鱼最终成活率=试验鱼治愈后存活数量/每组试验鱼总数×100%。
1.2.3 统计分析采用SPSS 17.0软件对半刺厚唇鱼死亡率及小瓜虫营养体数量进行单因素方差分析,数据结果表示为平均值±标准差,P<0.05为差异显著。
由表2可知,对照组鱼体黏液中小瓜虫营养体数量有轻微递减趋势。硫酸铜组小瓜虫营养体数量在第2天均倍增,且各浓度组之间差异不明显;1 000 mg/L工业盐组和对照组差异不明显,3 000和5 000 mg/L工业盐组小瓜虫营养体数量在第2天时均明显减少,且随着时间延长而递减,第8天时未检测到小瓜虫营养体;在甲醛溶液组中,3个浓度组小瓜虫营养体数量和对照组相比均有明显减少,且用药浓度越高,营养体数量减少幅度越大;在鱼康乐组中,2 mg/L组和对照组差异不明显,4和6 mg/L组小瓜虫营养体数量减少明显,且6 mg/L鱼康乐组在第6天时开始检测不到营养体,8和10 mg/L组用药浓度过高,试验用鱼过早死亡;百草解毒剂组和本稳精组小瓜虫营养体数量与空白对照组相比差异不明显;在百灵小瓜净组中,当药物浓度大于1.2 mg/L时,小瓜虫营养体数量才有明显减少,1.2、1.6、2.0 mg/L组分别在8、6、4 d时开始检测不到营养体;小瓜绝杀组中,所有浓度组第2天时小瓜虫营养体数量均倍增,之后递减,0.3、0.5、0.7 mg/L组递减明显,在第8天时开始检测不到营养体。
表2 不同药物处理后小瓜虫营养体数量
由表3可知,空白对照组第8天鱼已全部死亡,成活率为0;硫酸铜组第4天鱼全部死亡,成活率为0;3 000和5 000 mg/L工业盐组死亡情况明显减缓,最终成活率分别达(73.3±9.4)%和(86.7±9.4)%;甲醛溶液组中,随着药物浓度的增高,死亡情况有所减缓,但成活率仍为0;鱼康乐组中,4和6 mg/L组治疗效果最好,成活率分别达(46.7±9.4)%和(60.0±0.0)%;百草解毒剂组无治疗效果;本稳精组中,用药前期患病鱼死亡数明显降低,但因为此药杀虫效果不明显,最终患病鱼成活率仍为0;百灵小瓜净组中,当药物浓度大于1.2 mg/L时有明显治疗效果,当药物浓度为1.6和2.0 mg/L时,成活率分别达(73.3±9.4)%和(80.0±0.0)%;小瓜绝杀组中,当药物浓度为0.5 mg/L时治疗效果最好,成活率达(46.7±9.4)%。
空白对照组中小瓜虫营养体数量从0~6 d有轻微递减趋势,可能原因是成熟的小瓜虫营养体离开鱼体形成包囊,部分包囊因换水而流失,桶底遗留的包囊还未形成幼虫重新感染鱼体[3]。
表3 不同药物处理后患病鱼死亡情况
铜离子作为重金属离子可以与病原蛋白质结合形成络合物,从而使蛋白质变性,酶失活,因此在种植业和养殖业中应用颇多,在水产中主要用于杀灭鱼类的各种病原菌、寄生虫和藻类,如水霉、车轮虫、斜管虫、波豆虫、隐鞭虫、卵甲藻、微囊藻等。但在本试验中硫酸铜对小瓜虫营养体没有杀灭作用,反而可以使鱼体上的小瓜虫分裂增殖速度加快,大大缩短其生活周期,这和张善忠等[5]研究结果一致。
工业盐的主要成分为NaCl,可以改变水体渗透压,也被用来杀灭鱼体的寄生虫和病原菌,且在泛池抢救和气泡病治疗方面也有良好的效果[6,7]。在本试验中当工业盐浓度为3 000和5 000 mg/L时均能有效去除患病鱼体表小瓜虫营养体,因其杀虫和灭菌的双重作用保证了患病鱼成活率高达(86.7±9.4)%。
甲醛能够凝固蛋白和溶解脂类,具有广谱的杀虫杀菌功效。在本试验中甲醛试验组和对照组相比小瓜虫营养体数量明显减少,说明甲醛对小瓜虫营养体有一定的杀灭作用,但第8天时3个浓度组均能检测到小瓜虫营养体且患病鱼成活率为0,说明甲醛单独使用时治疗周期过长,不能短期内完全杀灭小瓜虫,或对患病鱼毒性较强,无法保证患病鱼成活率。
鱼康乐是福建省农业科学院自行研制的产品,是一种水质处理剂,主要成分为活性碳酸钙,具有效改善富营养化水质、降低水中微生物的存活能力,具有杀灭寄生虫的功效[8]。该试验中当鱼康乐用药浓度在4~6 mg/L时能够有效杀灭小瓜虫营养体且保证患病鱼的成活率,用药浓度过低时杀虫效果不明显,当用药浓度≥8 mg/L时则超过患病半刺厚唇鱼的耐受浓度,影响死亡率,试验结果不准确。
百草解毒剂的主要成分为天然植物炭,具有温胃和中、止泻解毒、收敛止血的功效,常用于防治畜禽的肠道疾病[9],当饲料中添加剂量为0.1%~0.5%时能显著提高大刺鳅部分消化酶和非特异性免疫酶活性[10]。该药物对纤毛虫类的寄生虫有一定的抑制作用,但本试验中对小瓜虫营养体没有明显杀灭作用。
本稳精的主要成分为干姜、花椒、杏叶的提取物,其中花椒提取物具有较强的杀虫杀菌功效[11],杏叶中含有大量的黄酮类、萜内脂类化合物成分,这些成分具有强烈的抗氧化作用,能够提高动物机体免疫力[12],干姜成分姜辣素对机体细胞形态具有保护作用,并且能够抑制炎症介质的合成与释放[13]。本试验中本稳精对小瓜虫营养体没有明显的杀灭作用,导致患病鱼成活率为0,但用药前期患病鱼的死亡率明显降低,说明该药物可能发挥了杀菌、消炎、提高免疫力的功效,对患病鱼有明显的保护作用。
本试验中当百灵小瓜净的用药浓度在1.6~2.0 mg/L时,对小瓜虫营养体的杀灭效果明显,且能够保证患病鱼较高的成活率。
小瓜绝杀的主要成分为苦参碱和辣椒碱,在农业生产中苦参碱和辣椒碱均有抑菌和杀虫的作用[14-17]。本试验中,小瓜绝杀用药早期小瓜虫虫体数量倍增,说明该药可以刺激小瓜虫营养体使其分裂增殖速度加快,而后期小瓜虫虫体数量明显减少又能充分体现其杀虫功效,这和冯桂榕等[18]的研究结果一致,即辣椒生姜法杀小瓜虫,只对小瓜虫幼虫阶段有效果,而对营养体阶段的杀灭效果不明显。
硫酸铜可以加速小瓜虫的分裂增殖,当鱼体有小瓜虫时不能使用;百草解毒剂对小瓜虫无杀灭作用;甲醛溶液单独使用时治疗效果不好,且易残留,对人体健康有害,不建议使用;本稳精虽无杀灭小瓜虫的作用,但能够明显增加鱼体抵抗力,建议和其他杀小瓜虫药物配合使用;小瓜绝杀用药前期小瓜虫虫体数量倍增,因此该药适合在患病鱼体表小瓜虫数量不多时使用,如果虫体数量较多时使用只会加速患病鱼的死亡;当工业盐使用浓度在3 000~5 000 mg/L时治疗效果较好,适合在精养桶、水泥池等小水体使用,以免增加经济成本,使用时尤其注意水温变化,以免高水温高盐度条件下造成患病鱼缺氧死亡。鱼康乐的适宜治疗浓度为4~6 mg/L,百灵小瓜净的适宜治疗浓度为1.6~2.0 mg/L,可以放心使用。鱼类小瓜虫病的治疗是一个世界公认的难题,必须充分了解小瓜虫的生活史,在其薄弱环节入手,筛选出有效药物,结合升温、清底等辅助措施,才能在小瓜虫病治疗中取得良好效果。