云南昭通不同产地天麻质控成分的含量测定

冯晋 徐娅玲 孟庆婷 杨琼英 何芳雁

摘要：目的 以天麻的质控成分天麻素（gastrodin，GAS）及对羟基苯甲醇（p-hydroxybenzyl alcohol，HBA）含量为指标对云南昭通不同产地的天麻进行考察，以确定其最佳产地。方法 选取昭通境内彝良小草坝、镇雄盐源、威信水田3个产地的乌天麻，用95%乙醇进行回流提取，计算其提取率;采用HPLC分析方法测定天麻醇提取物中质控成分GAS及HBA的含量，进行天麻最佳产地的初步评价。结果 彝良小草坝、镇雄盐源、威信水田的天麻醇提取物的提取率分别为：17.9、9.2、10.5%，所含质控成分的总量（GAS+HBA）分别为：0.8119、0.2478、0.2022%。结论 通过分析，云南昭通境内的彝良小草坝产地的天麻醇提取物的提取率及质控成分总量均为三者中最高，可认为该地为天麻道地药材的最佳产地之一。

关键词：天麻;天麻素;对羟基苯甲醇;HPLC;道地性

中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2021）03-0076-04

【Abstract】Objective： To investigate the Gastrodia elata from different producing areas in Zhaotong region， Yunnan， by taking the content of Gastrodin （GAS） and p-hydroxybenzyl alcohol （HBA） as index and to determine which area is the best producing area. Methods： Gastrodia were selected from Xiaocaoba， Yiliang County， Yanyuan， Zhenxiong County and Shuitian， Weixin County in Zhaotong region， and 95% ethanol was used for reflux extraction to calculate the extraction rate. HPLC was used to determine the content of the ingredients GAS and HBA in the quality control of the Gastrodia alcohol extract and the preliminary evaluation of the best producing area of Gastrodia was made. Results： The extraction rates of the Gastrodia alcohol extracts from Xiaocaoba， Yanyuan， and Shuitian were 17.9%， 9.2% and 10.5% respectively， and the total quality control components （GAS+HBA） were 0.8119%， 0.2478% and 0.2022% respectively. Conclusion： The analysis shows the extraction rate and the total quality control components of Gastrodia from Xiaocaoba， Yiliang County in Zhaotong， Yunnan， has the highest content among the three and can be considered Xiaocaoba is one of the best producing area for Gastrodia elata.

【Key words】Gastrodia; Gastrodin; P-hydroxybenzyl alcohol; HPLC; Authenticity

中药的疗效取决于其发挥作用的有效成分，因此中药的有效成分是评价其质量的重要指标，是中药质量控制的核心和临床疗效的保障。中药的品种、产地、采收季节及地理条件等多种因素均会对中药有效成分的含量产生影响，因此了解不同产地的同种药材有效成分的差异，对临床合理、安全用药具有重要意义，对中药制剂的研究也具有决定性意义。云南昭通被认为是天麻的道地药材产区，但云南昭通境内多地均种植天麻，不同产地的天麻存在质量差异，为评价昭通天麻的最佳产地，该研究选择种植量较大的昭通彝良小草坝、镇雄盐源、威信水田3个产地，在同一季节采收的同一年份的乌天麻，以现行质控成分天麻素（gastrodin，GAS）及对羟基苯甲醇（p-hydroxybenzyl alcohol，HBA）為评价指标，参照2015版《中国药典》“第三部通则0512技术要求”对天麻进行提取，考察其醇提物的提取率，并采用HPLC法检测天麻醇提取物中GAS及HBA的含量，进行天麻最佳产地的初步评价，为天麻的道地性研究提供依据。

1 实验材料

1.1 实验仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。ZDHW调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）。SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。旋转蒸发仪（EYELA）。

1.2 药品与试剂 天麻素（批号：J1516031），alladdin公司。对羟基苯甲醇（批号：LP30P21），北京百灵威科技有限公司。天麻，云南彝良小草坝、镇雄盐源、威信水田产（购于昭通天麻研究所，经昭通天麻研究所陈顺芳老师鉴定）。无水乙醇（批号：20160310），天津市风船化学试剂科技有限公司。

2 实验方法

2.1 天麻醇提物的制备 将干燥的天麻药材打粉后，过2号筛。称取过筛的干燥天麻粉100 g置于燒瓶内，于电热套内90℃下用95%乙醇回流提取3次;乙醇用量分别为：10、8、6倍，提取时间分别为：3、2、1 h，过滤后合并3次乙醇提取液，置于旋转蒸发仪内浓缩回收乙醇至醇提取物呈黏稠浸膏状，后将浸膏水浴浓缩至体积质量比为1：1.25。

2.2 不同产地天麻醇提取物含量测定

2.2.1 标准品的制备 精密称定GAS标准品1.62 mg和HBA标准品1.97 mg，用3%乙腈水溶液作溶剂定容于同一个10 mL容量瓶中，以GAS浓度为基准，通过梯度稀释，稀释浓度为0.081、0.0405、0.02025、0.010125 mg/mL，过0.45 μm有机系滤头后，HPLC进样检测。

2.2.2 供试品的制备 精密称取3个产地的天麻醇提取物：小草坝0.14133 g，镇雄盐源0.14326 g、威信水田0.17175 g、分别用3%乙腈水溶液定容于10 mL容量瓶中，超声溶解10 min，过0.45 μm有机系滤头后，HPLC进样检测。

2.2.3 色谱条件 流动相为乙腈-0.1%冰乙酸水溶液（3：97），流速为1 mL/min，柱温为25℃，检测波长270 nm，进样量为10 μL。

3 实验结果

3.1 天麻醇提取物的制备 结果显示：不同产地天麻醇提取物的提取率存在差异，以彝良小草坝产地的天麻醇提取物提取率最高，见表1。

3.2 不同产地天麻醇提取物含量测定

3.2.1 标准品的制备 对羟基苯甲醇（HBA）及天麻素（GAS）标准品的标准曲线，见图1所示。

3.2.2 天麻醇提取物含量测定HPLC图谱 不同产地天麻醇提取物含量测定的HPLC图谱，见图2所示。

3.2.3 天麻醇提取物中GAS、HBA总含量计算 应用ELISA Calc回归/拟合计算程序V0.1软件计算各个提取部位的浓度及含量。结果显示，云南省彝良小草坝天麻醇提取物中所含质控成分（GAS和HBA）的总量最高，折合天麻生药所含质控成分的总量也为最高，详见表2。

4 讨论

天麻（Gastrodia elata Blume.）又名赤箭、定风草、独摇芝，是兰科多年生草本植物，为我国名贵中药之一，云南昭通为其原产地。天麻作为国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品之一[1]，除了具有传统的药用价值外，被广泛用于相关食品、保健产品的开发，市场需求量极大。七十年代末随着天麻生长习性及规律的阐明，天麻人工栽培成功，加之野生天麻资源的减少，目前市场上销售的天麻几乎都来源于种植天麻[2]。目前天麻在我国多地均有栽种，其中以云南、四川、贵州、陕西等地产量较高[3]。由于不同的气候条件、栽培措施会导致其生育期不同[4]，这也是导致药材质量不稳定的主要因素，因此对天麻进行道地性研究具有重要意义。

药物作为防治疾病的特殊商品，其质量的评定标准是与疗效相关的物质基础。GAS、HBA是天麻的主要活性成分，具有脑缺血保护[5]、抗血小板聚集[6-7]、抗炎[8]、改善学习记忆等广泛的药理作用[9]。参照我国2015版《中国药典》中规定“天麻按干燥品计算，含GAS和HBA的总量不得少于0.25%”的要求，该研究以质控成分GAS和HBA作为考察指标，以考察昭通境内天麻的最佳产地。该研究按照《中国药典》技术要求，对天麻进行提取分离制备醇提取物，建立了HPLC的分析方法，对云南昭通3个产地天麻含有的GAS和HBA含量进行比较研究。结果显示，云南昭通彝良小草坝天麻醇提取物的得率最高，提取物中所含GAS和HBA的总量为0.8119%，折合天麻生药所总量为0.454%。因此，可认为云南昭通3个主要天麻产地中，彝良小草坝为最佳产地，可为天麻的道地性研究提供依据。

参考文献：

[1]韩大荣.天麻研究新进展[J].中国处方药，2018，16（4）：19-21.

[2]丁家玺，陈世丽，周天华.天麻种质资源研究进展[J].现代农业科技，2017（6）：100-101+107.

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[4]王丽，刘大会，马聪吉，等.乌天麻箭麻在不同气候地区的生育期及农艺性状分析[J].时珍国医国药，2017，28（8）：1991-1994.

[5]颜汉文，贾媛媛，杨媛，等.对羟基苯甲醇对MCAO/R模型大鼠血脑屏障的保护作用研究[J].中药药理与临床，2016，32（6）：22-25.

[6]孟保华，李文军，淤泽溥，等.天麻素对家兔体外血小板聚集的影响[J].中药药理与临床，2006（Z1）：46-47.

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[8]蒋石，刘姗姗，向彬，等.对羟基苯甲醇对急性脑缺血损伤大鼠脑内炎症因子的影响[J].中成药，2015，37（10）：2132-2135.

[9]张志龙，郜玉钢，臧埔，等.天麻素、 对羟基苯甲醇对中枢神经系统作用机制研究进展[J].中国中药杂志，2020，45（2）：312-320.

（收稿日期：2020-09-14）