前列腺癌组织CHK2和Rsf1蛋白表达及其与临床病理和预后的关系

程蔚蔚，孙硕彤，邓青，徐鹏育，田笑笑

（河南科技大学第一附属医院病理科，河南 洛阳 471000）

前列腺癌多发于老年男性，其发病率在我国泌尿系统恶性肿瘤中居于第三位，仅次于膀胱癌与肾癌[1]。根治性手术是目前治疗前列腺癌的主要手段，但术后复发率高达20%-50%，而复发后采用化疗、放疗等补救性治疗的效果不佳[2]。因此，寻找前列腺癌早期诊治与预后评价的可靠的生物学指标，对于改善患者预后具有重要意义。细胞周期检测点激酶2（CHK2）是参与受损DNA的修复过程的重要因子，近年研究报道，CHK2表达水平与胃癌等多种肿瘤的发生风险以及治疗预后密切相关[3]。染色质重染色质重塑因子-1（Rsf-1）是乳腺癌患者中高表达，且其表达水平与肿瘤体积、分期、化疗药物耐药性等具有明显相关性[4]。但关于前列腺癌患者CHK2、Rsf1的研究还较少见，本研究检测了前列腺癌组织中CHK2与Rsf1的表达情况，并分析其与病理特征及患者预后的相关性，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月至2017年 12月在我院治疗的前列腺癌患者121例为观察组，纳入标准：⑴经病理检查确诊前列腺癌；⑵均行根治性手术；⑶自愿参加研究，临床及随访资料完整；排除标准：⑴非首次确诊；⑵合并糖尿病、冠心病等基础疾病；⑶合并其他恶性肿瘤。另选取同期行手术治疗的良性前列腺增生患者148例为对照组。观察组年龄53～74岁，平均（65.24±9.48）岁；前列腺特异抗原（PSA）水平：≤20 ug/L 67例，＞20 ug/L 54例；TNM分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期31例；Ⅲ期46例，Ⅳ期18例；Gleason评分：＜8分52例，≥8分69例；淋巴结转移45例。对照组年龄59～78岁，平均年龄（66.84±11.42）岁，两组年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 检验方法 采用免疫组化法检测癌组织、良性增生组织中CHK2、Rsf1表达情况，癌组织进行石蜡包埋、切片、脱水、修复后，HE染色，光学显微镜下（400×）随机选择5个视野，每个视野选择200个细胞，分别由2位工作经验丰富的病理医师双盲阅片，观察染色强度与阳性细胞百分比。当两位医师评估结果不一致时，取评估结果平均值。染色强度计分，无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；按照参考文献CHK2阳性细胞百分比计分标准为：5%及以下计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，75%以上计4分。Rsf-1阳性细胞百分比计分标准为：25%及以下计0分，26%～50%计1分，51%～75%计2分，75%以上计3分。结果判读取二者之积，选取中位数，分数大于等于中位数为高表达；反之为低表达。

1.2.2 随访情况 术后通过电话以及门诊复查对观察组患者进行随访，随访时间至2020年12月。

1.3 统计学方法 使用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料符合正态分布采用t检验；计数资料采用χ2检验。生存分析用Kaplan-Meier法，组间生存率比较用Logrank检验；采用Cox比例风险回归模型分析影响生存预后的因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CHK2与Rsf1的表达情况 观察组CHK2低表达、Rsf1高表达比例明显高于对照组（P＜0.001），见表1。

表1 CHK2与Rsf1的表达情况

2.2 CHK2与Rsf1表达水平与前列腺癌临床特征的相关性 见表2。

表2 CHK2与Rsf1表达水平与前列腺癌临床特征的相关性

2.3 CHK2与Rsf1表达水平对前列腺癌患者3年生存情况的影响 术后随访3年，观察组共32例患者死亡，89例患者生存，总生存率73.55%。Kaplan-Meier生存分析表明，CHK2高表达患者3年总生存率 （56.52%）低于CHK2低表达患者（77.55%）（χ2=4.235，P=0.039）；Rsf1高表达患者总生存率（82.35%）高于Rsf1低表达患者（62.26%）（χ2=6.179，P=0.013），见图1、图2。

图1 不同CHK2水平患者生存曲线

图2 不同Rsf1水平患者生存曲线

2.4 影响前列腺癌患者预后不良的危险因素分析单因素分析结果显示，年龄（HR=1.235，95%CI：0.743～1.530）与患者总生存时间无关（P＞0.05）。PSA（HR=3.157，95%CI：1.335～3.285）、TNM分期（HR=3.328，95%CI：1.834～4.245）、Gleason评 分（HR=2.288，95%CI：1.628～3.382）、淋 巴 结 转 移（HR=1.729，95%CI：1.598～3.453）以及CHK2（HR=3.693，95%CI：1.894～4.553）、Rsf1（HR=1.839，95%CI：1.678～3.552）是影响前列腺癌患者总体生存时间的因素（均P＜0.05）。

以患者是否生存为因变量，以上述单因素分析有统计学意义的因素为自变量，建立Cox回归模型，见表3。

表3 影响前列腺癌患者总生存时间的危险因素分析

3 讨论

手术、激素治疗和放疗等对局限性前列腺癌的治疗效果较好，患者5年生存率可达95%，然而一旦发生远处转移或激素非依赖性前列腺癌，患者治疗效果不佳[1]。寻找利于前列腺癌诊治和预后评价的指标是临床及基础研究的重点。

在肿瘤的发病过程中，细胞受到自身以及外界等多种因素的影响,可造成细胞内DNA的损伤，从而导致体内原癌或者抑癌基因、DNA修复基因等出现病理改变,继而促使细胞向异常方向转化。CHK的重要作用是在DNA双链受损时，延缓细胞周期的进行，为DNA修复提供充足时间[3]。已有多项研究证实，CHK2在胃癌、卵巢癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中呈现低频突变状态[5-7]。此外，研究还报道，在甲状腺癌患者中普遍存在CHK2基因座丢失[8]；在头颈鳞状细胞癌患者中发现CHK2表达的表观遗传沉默[9]。因此多数研究者认为CHK2可能是重要的抑癌基因，其通过调节细胞周期，参与DNA损伤修复过程，从而影响恶性肿瘤发生的风险[5-8]。本研究结果显示，观察组CHK2低表达比例明显高于对照组，且PSA＞20μg/L、III～IV期、Gleason评分≥8分、淋巴结转移患者普遍存在CHK2低表达，表明CHK2水平与前列腺癌患者临床病理特征密切相关。

Rsf-1是由染色体11q13.5区域基因所表达的一种特殊蛋白质，它能够作用于蔗糖非发酵蛋白2同源物（h SNF2H），形成染色质重塑因子（RSF）复合物，参与多种细胞生长信号的调节过程，可引起核小体的空间重构，诱发正常细胞恶变，在肿瘤进展过程中起着重要作用[4]。已有研究表明，Rsf-1在胃癌、子宫内膜癌、宫颈癌组织中高表达，并且其表达水平与肿瘤体积、TNM分期存在正相关[10-12]。谢兆光等[13]研究报道，Rsf-1高表达与肿瘤细胞的侵袭性相关，Rsf-1表达水平越高，患者对化疗药物的耐药性越高，预后越差。本研究结果显示，观察组Rsf1高表达比例高于对照组，且Rsf1表达水平与PSA水平、TNM分期、Gleason评分及淋巴结转移情况密切相关，表明Rsf1与前列腺癌的进展有关，与上述关于其他恶性肿瘤的研究结论一致。

影响前列腺癌预后的因素较多，本研究显示，Gleason评分和淋巴结转移是前列腺癌3年总体生存时间的独立危险因素，这与既往研究一致[14]。本研究中，CHK2高表达患者3年总生存率（56.52%）低于CHK2低表达患者（77.55%）；Rsf1高表达患者总生存率 （82.35%）高于Rsf1低表达患者（62.26%）。多因素分析显示，CHK2低表达（HR=1.628，95%CI：1.378～2.345）、Rsf1高 表 达 （HR=4.282，95%CI：2.682～4.339）是影响患者生存时间的独立危险因素，表明CHK2、Rsf1的表达水平均与前列腺癌患者的总体生存时间密切相关，可作为评估患者长期预后的生物学指标。

综上所述，前列腺癌组织中CHK2呈明显低表达、Rsf1明显高表达，两者均与患者PSA水平、TNM分期、Gleason评分以及淋巴结转移密切相关，提示此两种蛋白参与前列腺竞品的发生及发展，可作为评估前列腺癌病情及预后的参考指标。