儿童TEL-AML1阳性急性B系淋巴细胞白血病的临床特点及基因表达研究

熊枫，黄慧，樊金星，吴艳，徐红艳，曾松涛，林媛媛，杨文萍

（江西省儿童医院病理科，江西 南昌 330006）

TEL-AML1融合基因由t(12；21）（p13；q22）易位形成，是儿童ALL中最常见的染色体易位异常，占儿童B系ALL（B-ALL)的25%左右[1]，对化疗比较敏感，预后较好[2]。本研究拟应用核型分析和荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization，FISH）对初诊TEL-AML1阳性患儿的基因表达特征进行研究，并初步探讨其与TEL-AML1阳性患儿预后之间的相关性。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集江西省儿童医院2016年1月至2017年12月，结合临床表现、骨髓细胞学检查及免疫分型确诊的B-ALL患儿骨髓或外周血标本238例，其中男性143例，女性95例，年龄为1岁至15岁。

1.2 主要试剂与仪器 主要试剂：TEL-AML1、BCR-ABL、PBX1-TCF3基因、MLL断裂、CMYC断裂基因探针均购自广州安必平公司；RPMI 1640培养液、新生牛血清，秋水酰胺、吉姆萨染色液（BASO）等。主要仪器：荧光显微镜（尼康80i）、染色体工作站（蔡司Axio Imager Z）、变性杂交仪（美国雅培）等。

1.3 染色体分析 肝素抗凝骨髓液2ml，G显带分析20个分裂相中期细胞。按《人类细胞遗传学国际命名体制ISCN(2009)》进行核型描述。

1.4 FISH检测及判读 检测方法参照安必平公司的操作说明书，Nikon80i荧光显微镜观察，计数200个细胞。计数方法参考文献[3]。

1.5 随访统计 化疗开始后采用电话或者查阅病例资料的方式进行资料统计，随访截止日期为2020年12月31日，随访时间为0.5～58个月。

1.6 数据分析 采用SPSS19.0统计学软件进行分析，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FISH结果TEL-AML1阳性患儿和阴性患儿在性别和发病年龄上无显著差别（P＞0.05）；TELAML1阳性患儿中常发生TEL基因等位丢失，较TEL-AML1阴性患儿差异显著（P＜0.05）。而AML1基因获得和CMYC基因获得常发生于TEL-AML1阴性患儿中，较TEL-AML1阳性患儿差异显著（P＜0.05），AML1基因扩增则只发生在TEL-AML1阴性患儿中（见表1～2、图1～2）。

图1 TEL-AML1融合阳性信号（1R1G2Y）

表1 TEL-AML1阳性患儿组和阴性患儿组临床资料及基因检测比较

2.2 核型分析结果 对41例TEL-AML1阳性患儿进行核型分析，正常核型22例，未见分裂相16例，异常核型3例，其核型结果分别为：44-46,XY,+2,6p-,7q-,-12,-21;46,XY,add(5)(q35);48,XY,del(6)(q22),add(12)(p13),+14,+16[14]/46,XY[8]。均未发现t（12；21）。

2.3 随访208例患儿随访到了141例，其中TELAML1阳性患儿34例，TEL-AML1阴性患儿107例（含7例AML1扩增患儿）。持续完全缓解125例；复发16例，其中TEL-AML1阳性患儿1例；TEL-AML1阴性患儿15例，4例发生于AML1扩增患儿中。AML1扩增患儿的复发率较TEL-AML1阳性患儿高,差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表2 TEL-AML1阳性患儿组和阴性患儿组基因表达比较

表3 TEL-AML1阳性患儿组和阴性患儿组预后比较

3 讨论

TEL-AML1融合基因型是儿童ALL常见的融合类型，发病率在15%～25%[4],发病高峰年龄为1～5岁，TEL-AML1男女比例为0.9～1.4:1[4-6]。随着年龄的增加，TEL-AML1融合发生的频率也随着降低[7]。本研究的TEL-AML1融合阳性率在17.2%，多见于B-ALL中，高峰发病年龄在2～5岁，男女比例为：1:1（20:21）,与国外结果基本一致。此外，TEL-AML1阳性组和阴性组之间在发病年龄和男女性别上无显著差别（P＞0.05)。

图2 AML1扩增信号（G信号》5个）

t(12；21)是儿童ALL中最常见的染色体结构异常，但由于染色体重排的片段从大小和形态非常相似，故常规细胞遗传学手段难以辨认[8]。41例TEL-AMLl阳性ALL患儿除16例染色体分析未见分裂相外，其余病例中22例具有正常核型，常规染色体分析均未发现t(12；21),这与文献报道的一致。这时必须通过分子手段，如FISH、PCR和Southern杂交等方可检出TEL-AMLl基因融合。

本研究中41例TEL-AML1阳性患儿无一例检测到BCR-ABL、PBX1-TCF3和MLL断裂重排，国外的多种研究亦没有发现TEL-AMLl阳性病例合并存在以上异常[9-11],这几种易位同时存在的可能性很小。

国外报道TEL-AML1患儿常有TEL等位基因缺失(20%～77%)[12]，21号染色体或AMLl基因多拷贝也常见(15%～33%)[13]，极少数患者的阳性细胞还可见3～4个TEL-AMLl融合基因。这些异常被认为是t(12；21)的继发性遗传学改变，与白血病的发生和发展相关。我们在41例初治TEL-AML1阳性患儿中也发现了类似的现象。15例患儿(36.6%)有TEL基因缺失；10例(24.4%)有AMLl基因拷贝数增加(1～2个)；1例有3个融合基因信号（1G3Y，2.4%）。这些遗传学改变可同时出现于同一患者中。此外，本组研究发现AML1扩增几乎只存在于TEL-AML1阴性患儿中，其复发率较TEL-AML1阳性患儿高,这与Niini等[14]报道基本一致。AML1扩增的患儿预后更差，更容易复发，需要用更强的化疗方案来提高生存率[15]。

TEL-AML1基因阳性的患儿一般预后比较好，对化疗反应敏感，首次完全缓解(complete remission，CR)期长，但有约10%～20%的TEL-AML1阳性患儿在停药2年左右发生晚期复发[16]，我们的研究结果显示有2.9%的患儿复发，复发率偏低的原因可能跟样本量、随访到病例数和随访时间相关。下一步我们将进一步积累病例及远期疗效追踪。