比对固定液对冷冻组织病理切片HE染色的质量的影响

江门市中心医院病理科 （广东 江门 529000）

内容提要： 目的：比对固定液对冷冻组织病理切片HE染色的质量的影响。方法：选择2018年5月～2019年2月本院临床科室术中进行送检的800例新鲜组织展开切片观察。结果：应用丙酮、95%乙醇的单一固定液实施HE染色的切片，其细胞质、细胞核的染色效果不好，同时对组织结构的表现也比较模糊。当采用复合固定液实施HE染色的时候，其整体染色效果较好，AFF液染色后的组织结构是相对较为清晰的，细胞核、细胞质的染色效果则不尽人意；改良AFF液染色后，其组织结构、细胞核、细胞质染色效果也是清晰的。结论：采用复合型固定液切片的病理组织其染色效果具有更加的优异性，特别是经过改良之后的AAF液，其应用在病理检查中的固定效果更加的显著，不但能够显著提升病理组织的染色质量，也能够更加准确地进行疾病诊断，给疾病的后续治疗提供了有利的理论基础。

临床上冷冻切片在快速病理诊断中具有非常重要作用，然而实际的检查中冷冻切片质量容易受到影响，较为重要的则是冷冻切片固定液的选择，为了选择出最佳的固定液，本文选择了四种固定液展开分析[1]。详细情况如下所示。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选择本院2018年5月～2019年2月临床科室术中进行送检的新鲜病理组织为例，合计为800例，具体有862例的恶性病变病理取样，有118例良性病变的病理取样，详细的病变组织取样囊括了甲状腺组织取样，乳腺组织取样，肺组织取样，淋巴结组织取样等。

1.2 方法

在本次研究中，当采样了新鲜病理组织之后，不能够直接进行切片，需要应用专业的病理切片仪器加以操作，从而最大程度的完成病理组织的有效应用。一般情况下，如果新鲜的病理组织需要切片，其选择的仪器为：德国生产的LeicaCM1950型号恒冷切片机，根据相应的切片标准展开操作；随后应该将病理切片需要的、实验中的固定液准备好，详细的4种固定液分析如下：①单独的丙酮固定液；②95%的乙醇固定液；③AAF液加以固定；④改良后的AAF液加以固定。其中，AAF液中包含的成分为：15mL甲醛液体（40%含量），80mL乙醇（95%）溶液，5mL的冰醋酸溶液；改良后AAF液包含的成分则有些差异，即15mL福尔马林，40mL乙醇溶液（95%），42mL苦味酸饱溶液，乙醇液（95%），3mL冰醋酸溶液以及0.2mL Triton等溶液。上述所有的操作完成之后，则需要OCT冷冻包埋剂操作，把新鲜病理取样包埋起来，并放置到冷冻切片机之中，需要注意的是：病理组织切片只有被冷冻到合适的硬度，才能够更好地实施组织切片操作，也能够更好地加以固定处理，一般把冰冻机箱体温度调节到-18°C～-20°C；对于切片的厚度而言，其应该维持在8μm左右，且每一个标本均都需要实施四次的切片操作，最后呈现出四张有效病理切片，并使用固定液加以固定和实施HE染色操作，并借助显微镜实施观察，将相应的结果记录下来，从而提高其诊断效果。

1.3 观察指标

通过显微镜观察切片标本的组织结构、细胞核收缩以及染色情况。

2.结果

在本次研究之中可以得出以下结果：①通过丙酮固定液进行固定的切片，借助显微镜观察的效果不显著，组织结构、细胞核等均观察不清楚，即整体的染色效果均不佳，诊断结果也不够准确。②对于实施95%乙醇固定液的病理切片而言，其通过显微镜观察后，整体的组织结构相对比较清晰，但是依然有细胞核收缩情况、细胞核染色模糊情况发生，染色效果依然不佳，对临床确诊存在不良影响。③对于实施AFF液加以固定的病理切片而言，其在显微镜表现出组织结构较为清晰，然而其细胞核轮廓显示则不够理想，总体的染色效果还是不够显著，进行临床确诊的理论依据不够充足。④实施改良AFF液固定后，可以很清楚看到病理组织和结构，同时也可以看到清晰的细胞核、细胞质，染色的颜色也鲜艳有质，具有较为明显的对比效果，可以提高诊断的效果，帮助患者尽快的展开治疗操作[2]。

3.讨论

冰冻切片的最关键点在于快速冷冻，防止冰晶形成，使组织最接近原始状态，其二是不同的组织需要不同的切片温度，但日常工作中，冰冻机难以在短时间内升高或者降低到所需切片温度，因此一般把冰冻机设置到一个比较适合的范围，使大部分组织能在该温度范围内切出满意的冰冻切片，本文所有冰冻切片均在箱体温度-18°C～-20°C完成。甲状腺组织取样完成后，蛋白质和细胞核会出现极速改变，切片后不能及时冷冻的话会影响其观察，即误认为毛玻璃核，在展开冷冻的时候，根据经验，其温度控制在-18°C，可以切出较为满意的切片，温度低于-20°C，组织容易发脆，切片容易出现裂纹和组织碎成粉末状，严重影响后续操作[3]。对于肺组织而言，其因有丰富的血供、腔隙，极可能会有大量坏死、炎性分泌物现象存在，需在冷冻的期间进一步控制冷冻时间，切片温度为-18°C即可，低于-20°C同样会使肿瘤组织出现裂纹，影响切片的观察结果。乳腺组织在制成冷冻切片的时，应该确保没有重叠褶皱的情况，同时检查切片是否在存在裂隙，一旦存在需更换切片，防止影响检查结果[4]。对于淋巴结组织而言，速冻尤为关键，温度过低会使组织碎裂，修片过深，由于冰晶的过多，会破坏其正常形态结构，必须保证淋巴结包膜完整切出并没有重叠皱褶。

病理组织在经过切片操作之后，其实施固定的目的则是帮助组织蛋白发生质变，之后让病理组织以及细胞等可以呈现其最初的形态，若是切片固定效果不符合标准，则会导致HE染色的时候无法得到最佳的效果，造成病理切片存在不良情况，无法给予患者确诊，耽误其后续的治疗工作。为此对AAF液进行了一定程度的改良操作，主要的操作便是把苦味酸饱、95%乙醇液、Triton均加入在AFF液之中，而苦味酸属于酸性固定剂的一种，可以实现蛋白质有效沉淀，且收缩效果比较明显。应用丙酮、95%乙醇的单一固定液实施HE染色的切片，其细胞质、细胞核的染色效果不好，同时对组织结构表现也比较模糊，改良AFF液染色后，其组织结构、细胞核、细胞质染色效果也是清晰的。

综上所述，对于冷冻切片检查工作而言，其中固定液的选择是非常重要的环节，主要是对染色效果会产生直接性的影响，经过改良之后的AAF液能够最大限度的固定冷冻组织病理切片，有助于准确地进行疾病诊断。