荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控效果分析

辽阳市卫生健康服务中心临床检验科 （辽宁 辽阳 111000）

内容提要：目的：探究流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法的质控效果分析。方法：于2017年3月～2018年3月，选取本院收治的流感病例576例，全部患者都借助实时荧光定量PCR法检测流感病毒核酸，并对阳性率与阳性样本类型进行检测与总结。结果：全部病例576例经流感病毒核酸检测有136例呈阳性，阳性率23.61%；所有阳性样本中，甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分别有117例、9例、10例，所占比例分别为20.31%、1.56%、1.74%。结论：流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法检测具有科学性与有效性的特点，可快速、准确地检测流感病毒核酸，对检测结果予以质量控制，可使检测结果准确性进一步提高，临床价值显著。

流感属于急性呼吸系统疾病，通常是因为流感病毒导致的，主要以呼吸道症状、酸痛以及高热等为主要表现[1]。流感的潜伏期较短，但传播速度较快，具有较强的传染性，对人类的生命安全有严重威胁。因此充分重视流感的预防十分必要[2]。荧光实时定量PCR法将传统PCR法的特异性不强与污染等问题充分改善，借助电脑软件的配合，促使每次循环都可将一次荧光信号强度检测出来，从而获取标准曲线获得定量的结果[3]。现阶段，荧光实时定量PCR法在多个领域发挥重要作用，如疾病诊断以及食品安全等。为了分析荧光实时定量PCR对流感病毒核酸的质量控制效果，本研究选取于2017年3月～2018年3月收治的流感病例576例，都借助实时荧光定量PCR法检测流感病毒核酸，具体情况如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

于2017年3月～2018年3月选取本院收治的流感病例576例，其中有男性290例，所占比例50.35%，女性286例，所占比例49.65%；年龄13～87岁，平均（50.26±37.74）岁。

1.2 方法

提取流感病毒核酸：提取全部流感病例的流感病毒核酸，方法如下：选取一支1.5mL试管，确保其无菌、无酶，将560μL AVL加入其中，选取140μL病毒培养物置入，充分混合15s，在15～20°C环境下保温10min，予以离心处理；将560μL的70%乙醇加入其中，使混合器旋转充分混匀15s，混合液分两次吸在带滤膜离心柱上，选择8000rpm进行离心处理1min，将收集管内的离心液弃除；将柱盖小心打开，将560μL AVL加入其中，关盖，6000g，选择8000rpm进行离心处理15min，把离心后的滤柱转移至新的收集管（2mL）上，将500lAW2添加柱中，关盖，6000g，选择8000rpm进行离心处理3min，将收集管内的离心液弃除，离心处理，使AW2液完全弃除；把1.5mL离心管装入离心柱上，将杯盖小心打开，把60μL AVE慢慢加入，在室温下保持1min，6000g，选择8000rpm进行离心处理1min，对离心液有效收集，也就是提取病毒RNA。

荧光实时定量PCR法：对混合液20μL处理好的5μL样本RNA进行荧光实时定量PCR检查侧，都采用FAM通道作为反应体系25μL的荧光通道，使基团None猝灭。把PCR反应管有效盖好并予以扩增反应，条件为50°C30min～95°C10min（95°C15s～55°C40s，循环次数45次）。

1.3 判定标准

于阴阳性参考都正常的情况下，CT值＜36说明反应为阳性，没有CT值或者CT值是0说明反应为阴性，灰区表示Ct值在36～40范围内。

2.结果

于2017年3月～2018年3月采集的流感病例576例经流感病毒核酸检测有136例呈阳性，阳性率23.61%；有阳性样本中，甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分别有117例、9例、10例，所占比例分别为20.31%、1.56%、1.74%。

3.讨论

流感作为属于传染性疾病的一种，具有较快的传播速度，且传染性比较强。流感主要是因为流感病毒导致的，主要分为三类，一类为甲型，一类为乙型，另一类为丙型[4]。流感在我国具有较高的发病率，且流感在我国也很容易出现变异，人如果感染流感病毒，会直接威胁人们的生活与工作，也会导致一系列并发症，威胁人们的生命健康安全。因此，加强对流感的检测与防控，对确保人们的生命安全有积极影响。对流感病毒的检测，一般会受到检测环境的干扰，所以，加强对实验室检测方法的质量控制，可尽可能确保检验结果的准确性，进而对防控流感提供有条件[5]。

流感病毒很容易变异，人们对变异性流感病毒菌株的免疫性较弱，致使流感极易爆发与蔓延，对整个地区人们的生命健康与安全造成直接的影响。

最近几年，借助荧光定量PCR技术检测流感病毒核酸的检测效果良好，荧光实时定量PCR法就是于PCR指数扩增过程中，借助持续监测荧光信号强弱的变化情况，对特异性产物的量进行即时测定，并由此推测目标基因的初始量。荧光实时定量PCR法对流感病毒核酸的检测效果较好，具有操作简便、安全性高、可重复操作以及特异性较强的特点，由整个实验过程都处在封闭环境内，因此，使污染风险明显降，且检测效果具有科学性与准确性的特点，促使其在临床上被广泛运用[6]。

本研究探究了荧光实时定量PCR对流感病毒核酸的质量控制效果，结果显示：采集的流感病例576例经流感病毒核酸检测有136例呈阳性，阳性率23.61%；所有阳性样本中，甲型H1N1、甲型H3流感、甲通分别有117例、9例、10例，所占比例分别为20.31%、1.56%、1.74%，不同流感病毒的发生率间有明显不同，说明荧光实时定量PCR法对流感病毒核酸的检测具有科学与有效的特点。但荧光实时定量PCR法也存在一定不足，如对实验操作有较高的要求，操作人员对有关原理以及操作熟练掌握，且对实验结果的影响因素较多，需确保环境温度等相关因素的稳定，且实验的成本相对较高，基层普及有一定难度。因此，荧光实时定量PCR法对流感病毒核酸检测需予以质量控制，使实验室技术水平显著提高，促使检验结果准确性进一步提升。

总而言之，流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法检测，科学性与有效性特征显著，可对流感病毒核酸快速且准确的检测，加强对检测结果的质量控制，可提高检测结果的准确性，为临床治疗提供有利参考。