一例鸭传染性浆膜炎的诊断

葛向平

（山东省胶州市动物疫病预防与控制中心 266300）

鸭传染性浆膜炎由鸭疫里默氏杆菌（Rimerella anatipestifer，RA）引起的一种慢性或急性败血性传染病，又称为鸭疫里默氏菌病，本病无明显季节性，一年四季均可发生，春冬季节较为多发，通常具有1～3d 的潜伏期，有时达到7d 左右。该病的主要传播途径是呼吸道或感染的皮肤伤口，空气传播是重要的传播途径之一，感染该病原菌后主要侵害雏鸭，除此之外也可侵害鸡、鹅、鹌鹑等多种禽类，主要症状为纤维素性气囊炎、心包炎和肝周炎[1]，发病鸭出现站立不稳、饮食废绝、精神萎靡、头部震颤等一系列神经症状，严重阻碍鸭的生长，鸭发病率为5%～90%，病死率高达80%，是危害养鸭业的重要细菌性传染性疾病。

鸭疫里默氏杆菌在自然界分布广泛，公认的有21 种血清型[2]，报道中分离的鸭疫里默氏杆菌也有多种血清型，李书光等在50 日龄种鸭分离到一株2 型鸭疫里默氏杆菌[3]，郝东敏等在13 日龄肉鸭中分离到一株7 型鸭疫里默氏杆菌[4]，孔桂慧等从29 周龄产蛋鸭分离到一株1 型鸭疫里默氏杆菌[5]，由于不同鸭疫里默氏杆菌血清型之间的交叉免疫保护力差，临床上使用抗生素不规范、滥用，加大了该病的防治难度[6-7]。

2020 年6 月份，山东省某地一养鸭场的鸭群发病，怀疑鸭传染性浆膜炎，遂送样进行诊断。

1 发病情况

一养鸭场14 日龄雏鸭出现精神不振、采食下降等现象，并出现瘫痪、神经症状，每天死亡50 只左右，剖检死亡鸭可见纤维素性气囊炎、心包炎和肝周炎。根据患病鸭的临床症状及病理解剖变化，初步怀疑该鸭群感染了鸭疫里默氏菌病，为了进一步确定该病原，进行病原分离、鉴定。

2 病原分离

在无菌条件下，用接种环取肝脏、脑和心脏，分别接种到麦康凯培养基和含2%新生牛血清的TSA 培养基，将麦康凯培养基置37℃恒温培养箱中培养，TSA 培养基置37℃、含5%CO2培养箱中培养。培养24h 后发现TSA 培养基均出现边缘整齐的圆形菌落（图1），而在麦康凯培养基上没有菌落生长。

3 病原鉴定

3.1 镜检

将分离的菌落进行革兰氏染色，染色后在光学显微镜下观察其形态特点，结果革兰氏阴性短杆菌（图2）。

3.2 生化鉴定

参考生化反应管说明书，将分离菌分别接种于微量生化发酵管中观察结果。分离菌不发酵乳糖、半乳糖、葡萄糖、果糖，甲基红、硫化氢产气试验、过氧化氢酶试验均为阴性，明胶试验和过氧化氢酶试验结果均为阳性，符合该菌的生化特性。

3.3 血清型鉴定

挑选单个菌落接种含2%新生牛血清的TSA 培养基上，培养24h 后洗脱菌液，与鸭疫里默氏杆菌1 型、2 型、7 型、10型阳性血清进行平板凝集发现，与7 型阳性血清能发生明显的凝集反应，与其他型不发生凝集反应，可见分离菌的血清型为鸭疫里默氏菌7 型。

3.4 药敏试验

将分离的试验菌涂布在含2%牛血清的TSA 培养基上，尽可能均匀，将大观霉素、阿莫西林、红霉素、头孢唑肟、多黏菌素、磷霉素药敏片贴在平板上，进行常规药物的药敏试验，置37℃、含5%CO2微氧气条件下培养24～48h。结果发现，该分离菌株对大观霉素、阿莫西林、红霉素、头孢唑肟高度敏感，对多黏菌素、磷霉素不敏感。

3.5 PCR 鉴定

用鸭疫里默氏杆菌特异性引物进行PCR 鉴定，引物序列如下，F：5'-ATTAGTATTGAAAGCTCCG-3'，R：5'-TCCGAAGAAAACCGTATT-3'，扩增片段约为800bp，进行PCR 扩增。取菌液2ml，3000rpm 离心5min，弃上清，用无菌dd H2O 重悬菌液，煮沸10min，5000rpm 离心5min，取上清液作为模板；PCR 体系：PCR mix12.5μl、模板2μl、上游引物各1μl、下游引物1μl，补足无菌dd H2O 至25μl，同时设立阴性对照。反应条件：95℃预变性3min；95℃变性30s，48℃退火30s，72℃延伸45s，共30 个循环；72℃延伸7min。结束后，取PCR 产物用1%的琼脂糖进行凝胶电泳，在凝胶成像仪下观察结果，结果与预期相符，出现大小约为800bp 的目的条带（图3），由此可以确定该场雏鸭感染了鸭疫里默氏杆菌。

3.6 分离菌株对雏鸭的致病力试验

将新鲜培养的鸭疫里默氏杆菌接种TSA 平板，37℃、5%CO2培养箱内培养24h 后，用无菌PBS 洗涤，洗涤两次，最后用PBS 重悬并调整至菌数为2×106CFU/mL，腿部肌肉接种20日龄樱桃谷鸭10 只，1ml/只，接种后10d 内雏鸭全部死亡，剖检可见明显的纤维素性气囊炎、心包炎和肝周炎，表明该株菌对雏鸭确有较强的致病力。

4 小结

随着养鸭业的不断发展，规模化养殖越来越多，养殖密度的增加导致鸭传染性浆膜炎的发病率越来越高，对养鸭业造成了严重的经济损失，而此类疾病在诊断过程中很容易与大肠杆菌感染混淆，本试验通过对剖检鸭进行细菌分离、生化鉴定、PCR 鉴定、血清学鉴定、动物回归等一系列试验表明，分离的菌为鸭疫里默氏杆菌7 型，实验室通过药敏试验及时给养殖户提供了治疗及用药方向。

目前，鸭疫里默氏杆菌公认的血清型有21 种，程安春等报道鸭疫里默氏杆菌还存在新的血清型（22～25 型）[8]。由于不同血清型的抗原性存在差异，无交叉免疫保护力，而且研究发现，不同省份地区鸭疫里默氏杆菌优势血清型分布也有差异[9-12]，这给鸭疫里默氏杆菌病的免疫防治带来巨大挑战。

市场可用的鸭传染性浆膜炎预防疫苗主要有单价或多价灭活疫苗，饲养过程中一定要合理进行科学免疫，严格控制抗生素等药物的使用，同时，改善饲养环境，规范养殖，加强饲养管理，定期更换垫料，另外，建议根据本地区的鸭疫里默氏杆菌流行血清型选择合适的疫苗进行免疫，多举并措，才能有效预防和减少此类疾病的发生。