牛羊布病的诊断方法

古丽娜尔·木斯塔法

（新疆阿勒泰地区哈巴河县加依勒玛乡农业（畜牧业）发展服务中心，新疆 哈巴河 836701）

牛羊布病是由布氏杆菌引起的人畜共患病，该病被世界动物卫生组织列为B类传染病，是我国规定的二类动物疫病，也是国际贸易必须检疫的疾病之一。布氏杆菌可以分为6个种19个生物型，其中牛种布氏杆菌有8个生物型。牛种布氏杆菌和羊种布氏杆菌是新疆地区较为常见的布氏杆菌，对人来讲，羊种布氏杆菌的毒力比牛种强。目前，对布氏杆菌病诊断的方法包括病原学诊断、血清学诊断以及分子生物学诊断三大类。

1 病原学诊断

无菌条件下采集胎盘小叶、阴道分泌物以及胎儿胃内容物，对其进行改良抗酸染色或KOSTERS染色，当出现洗白内的发颗粒和弱抗酸的布氏杆菌形态时，可以认为是布氏杆菌感染。此外，还可以在分娩、流产或尸体解剖的过程中分离阴道粘液、胎盘、乳汁、乳房、睾丸、咽后淋巴结等病料，经过分离培养后，可以通过其培养特性、形态学以及革兰氏染色结果来判断是否为布鲁氏菌菌落。

2 血清学诊断

2.1 虎红平板凝集试验 在玻璃板上分隔出数个4cm×4cm的方格，在方格中标记待检测的血清编号，每个方格内滴入30μL待检血清，再在待检血清旁边滴加30μL布氏杆菌抗原，将血清和抗原充分搅拌、混合，如果血清和抗原混合后产生红色的片絮状、颗粒状凝集，则认为是阳性血清；如果血清和抗原混合后为均匀的粉红色，则认为是阴性血清。通常判定时间不超过4min。

2.2 试管凝集试验 用0.5%石碳酸生理盐水将抗原原液进行1:10的稀释，稀释后的抗原加入1:12.5、1:25、1：50以及1:100的待测血清管内混匀后，在37℃恒温箱中放置20h，室温下平衡2h，进行浑浊度判定。

2.3 补体结合试验 患有慢性布氏杆菌病的病牛在进行平板凝集试验或试管凝集试验时，可能其凝集结果为阴性或可疑，但进行补体结合反应时结果为阳性。

2.4 酶联免疫吸附试验 这种方法的灵敏度和特异性都很好，结果也比较稳定，其特异性比虎红平板凝集试验或补体结合试验稍高，在检测时先对测试板进行抗原包被，而后加入待检血清，在37℃条件下反应一段时间再先后加入酶标二抗、底物和终止液，最后用酶标仪进行读数，判定最终结果。

2.5 乳环试验 对产奶动物来说，乳汁的获取比较容易，但乳环试验仅适用于牛，将苏木精染色抗原与牛奶进行混合，如果牛奶中有抗体则会和抗原进行结合，最终在牛奶表面形成蓝色环状结构，但这一方法检测时容易出现非特异性反应，需要进行区分。

3 分子生物学试验

布氏杆菌可以通过测定DNA（G+C）mol%的值以及染色体的大小来进行判定，但这种方法只能确定布氏杆菌的菌属，并不能区分19个生物型之间的差别，而且方法比较繁琐，在普通实验室基本没有应用场景，但这一方法给学者带来思考。目前，PCR技术及其衍生技术，如核酸杂交、荧光标记等技术也都陆续应用于布氏杆菌病的诊断中，PCR技术检测布氏杆菌具有检测快速、特异性高、比较灵敏等诸多优势，最低可以检测1pg的DNA，这是其他手段无法实现的。此外，分子生物学检测方法可以弥补病原学诊断和血清学诊断中不能对布氏杆菌完全鉴定区分的不足，相信通过从业人员的不懈努力，分子生物学技术将为布氏杆菌流行病学追踪溯源提供可靠的技术保障。

4 讨论

对牛羊布病的防控来讲，应当本着“防大于治”的原则进行综合的防控，目前布氏杆菌疫苗的种类较多，如弱毒活疫苗、灭活疫苗、新型疫苗等等，常用于牛布病预防的疫苗为牛型19号(S19、A19)疫苗，用于羊布病预防可以使用猪型2号菌苗或羊型5号菌苗。此外，还要定期的对牛羊进行检疫，尤其是种畜，应当每年进行一次检疫，在疫区、疫点要视情况增加检疫次数。只有免疫接种配合定期检疫，逐渐筛选出健康牛，将阳性牛和隐性感染牛逐步淘汰，才能够达到净化疫场的目的，才能够切实的控制布氏杆菌病的发生与传播，减少该病带来的威胁。