浅谈猪冷冻精液制作技术要点

姜树林，宁财，余华阳,钟志勇

（江西省农业技术推广中心，江西南昌330046）

生猪生产过程中采用本交或常温精液稀释后配种繁育，在储存、运输、利用效率、基因质量、生物安全等方面存在诸多问题。尤其在传染病流行期采取封闭防控措施的情况下，在很大程度上限制了优秀种公猪的运输和利用，影响了生猪产业的健康持续发展。猪冷冻精液有保存时间长、成本低、易于运输等优点,在生猪生产中起着非常重要的作用。应用猪冷冻精液可以杜绝公母猪直接接触，降低病毒垂直传染的概率，有利于生物安全防控，解决种猪跨地区调运及运输难题，实现跨区域联合育种，打破时间和空间限制，利于集中复产配种等[1]。同时，猪冷冻精液技术可高效扩繁优秀基因，大幅度提升种公猪的遗传效益，降低公猪饲养数量，提高养殖场收益。

自2018年开始，笔者通过数十次冷冻精液制作试验，并成功运用到地方猪冷冻精液生产实践，形成了较完善的猪冷冻精液操作规程生产工艺。利用这种生产工艺进行冷冻精液制作，可有效保证精液的冻后活力。

1 种公猪饲养管理

1.1 种猪要求

供精种公猪具有种用性能，符合国家有关规定。

1.2 免疫

种公猪在供精前要进行全面检疫，并在供精前进行程序性免疫，完成免疫程序15d后方可采精。

1.3 饲养管理

1.3.1 能量饲料。种公猪采精期间要注意营养均衡，但要适当控制能量饲料，防止种公猪过肥，影响性欲和精液质量。

1.3.2 蛋白质需求。精液中蛋白质占14%，所以供精种公猪饲料必须保证充足的蛋白质（不低于17%），特别是在采精期间要适当增加饲料蛋白质水平。有条件的养殖场，采精期间每头公猪每天可补充1～2枚鸡蛋。

1.3.3 维生素。维生素对种公猪的生殖保健有重要作用，如维生素A不足会引起睾丸萎缩，维生素D和E不足会影响精液质量。采精期间要适当补充维生素，每日添加饲喂胡萝卜和鱼肝油[2]。

1.3.4 适当运动。种公猪要适当增加运动，保证正常的新陈代谢和旺盛的性欲，避免发生肢蹄病，影响爬跨。

1.4 采精调教

种公猪10月龄、体重100kg左右开始进行爬跨调教，形成射精反应。种公猪采精频率为每周2～3次。

2 采精前准备

2.1 采精栏准备

2.1.1 采精前对采精栏进行全面清洁，冲洗干净，自然干燥后，再用紫外线消毒30min以上。

2.1.2 假台畜后方放橡胶防滑垫，调整好位置，以保证公猪爬跨时，站立舒适。

2.1.3 采精室应保证冬暖夏凉，控制在16℃～25℃之间。

2.2 种公猪准备

2.2.1 采精前将种公猪赶到采精栏，刷拭掉种公猪体表尤其是下腹及侧腹的灰尘和污物。

2.2.2 种公猪的阴毛不能过长，以免粘附污物。采精前，修整公猪的阴毛，一般以不超过2cm为宜。

2.2.3 先用0.1%高锰酸钾溶液清洗种公猪阴茎包皮，再用灭菌生理盐水清洗，并用消毒的干净毛巾擦拭包皮部位，避免采精时残液混入精液中污染精液。

2.3 集精杯准备

2.3.1 将塑料袋放入集精杯中，然后将塑料袋外翻。将滤纸盖在集精杯口上，将橡皮筋撑开滤纸固定在集精杯外沿上。滤纸安装好后，滤纸面向下陷3cm左右，放在35℃～37℃的恒温箱中预热备用。

2.3.2 将消毒纸巾盒、P E手套、集精杯放在实验室与采精栏之间的壁橱内，关上壁橱门。

2.3.3 采精时拿出集精杯并盖上盖子，然后传递给采精人员。

2.3.4 当处理室距采精栏较远时，应将集精杯放入泡沫保温箱中，然后带到采精栏。

2.4 精液营养液、冷冻稀释液、BTS解冻液配制

2.4.1 营养液配制。葡萄糖1.5g，乳糖3g，甘氨酸0.8g，加双蒸馏水至100mL。

2.4.2 冷冻稀释液配方。葡萄糖6.12g、EDTA 0.3g、双蒸馏水75mL、蛋黄20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、青链霉素各10万U、咖啡因0.2mg/mL。

2.4.3 BTS解冻液配方。葡萄糖3.7g、无水柠檬酸钠0.6g、碳 酸 氢 钠0.125g、EDTA 0.125g、氯 化 钾0.075g、双蒸馏水100mL。

3 采精

3.1 采精引导

采精员右手戴两层手套,站在假台畜的头部，轻轻敲击假台畜以引起公猪的注意，并通过模仿发情母猪声音或在假台畜上洒发情母猪尿液等方式引导公猪爬跨。当公猪爬跨有交配行为时，采精员迅速用右手按摩挤压公猪包皮囊，将其中的包皮积液挤净，然后用消毒纸巾将包皮口擦干净。

3.2 精液采集

3.2.1 采精方法。当公猪爬跨假台畜时，采精员应辅助公猪保持正确的姿势，避免侧向爬或阴茎压在假台畜上。手握龟头呈节奏性松紧给予压力进行刺激，锁定龟头，脱去右手的外层手套，右手呈空拳，当龟头从包皮口伸入空拳后，用中指、无名指、小指锁定龟头，并向左前上方拉伸，龟头一端略向左下方。为了防止未挤净的包皮积液顺着阴茎流入集精杯中，采精时要保证阴茎龟头端的最高点高于包皮口。

3.2.2 精液收集。最初射出的精液不含精子不能收集，当公猪射出乳白色的精液时，左手将集精杯口向上接近右手小指正下方。最后的精液稀薄基本不含精子，不要收集。要保证公猪的射精过程完整。采精过程中，即使最后射出的精液不收集，也不要中止采精，直到公猪阴茎软缩，试图爬下假母猪，再慢慢松开公猪的阴茎。取掉集精杯上的滤纸，盖好集精杯盖，标明公猪耳号，送入化验室橱窗。

4 品质检测

用带有恒温设施的显微镜进行检测，载温台温度应恒温维持在37℃。检测指标主要有：外观（淡乳白色或灰白色，均匀一致，无杂质）、气味（略带腥味，无异味）、活力（≥70%。）、畸形率（≤15%）。

5 鲜精处理

5.1 精液稀释要求

最终稀释密度为4亿/mL。

5.2 预稀释

营养液先预热到32℃。将活力检测合格的鲜精，记录好精液密度、剂量等相关数据，按1：1比例与营养液混合均匀。预稀释后的精液放入17℃恒温箱内，等同温至17℃后，进行离心操作。

5.3 离心

将预稀释精液装入100mL的离心管内，在恒温17℃和重力900g条件下离心15min。精液离心后，吸走离心管的上清液。

5.4 稀释

冷冻稀释液预热至17℃。以每毫升4亿的最终稀释浓度，计算出需要的冷冻稀释液。将2/3冷冻稀释液加到离心管中，以吸吐方式充分混合均匀、合并，再用剩下的1/3冷冻稀释液洗涤离心管底，合并。

5.5 平衡

将稀释好的精液放至17℃水浴杯中，一同放进4℃冰箱，平衡4h。

5.6 分装

细管上应用字母标明生产场、公猪品种、公猪号、生产日期。检查灌装好的细管精液，将有气泡、未灌满的不合格的细管精液捡出。将分装好的细管精液铺放在冷冻支架上。

6 冷冻

6.1 冷冻方式

6.1.1 程序冷冻。在程控冷冻仪的冷冻柜里，以每分钟下降30℃的速度填充液氮将精液冷冻。

6.1.2 熏蒸冷冻。采用自制冷冻箱或泡沫箱冷冻，可以降低生产成本，冷冻效果较理想。冷冻箱的深度应该在50cm以上，使用前先倒入液氮冷却10min以上。冷冻支架与液氮面保持2cm，冷冻8min即可。

6.2 包装

将冷冻好的细管精液包装好，外包装上标明品种、猪号、支数、生产日期等。

6.3 质量检测

6.3.1 解冻。BTS解冻液预热至26℃。从液氮罐中取出2～3支细管精液，迅速放到38℃水中，解冻15s，或50℃水中，解冻7s。剪开细管精液封口端，挤入数滴精液至1mLBTS解冻液中，搅匀，回温到37℃，静置20min。在37℃载温台上，检测精液活力。

6.3.2 冻精品质要求。活力≥30%，精子畸形≤18%，密度≥4亿/mL，每支（0.25mL规格细管）菌落数≤800个。

7 讨论

7.1 种公猪饲养管理

种公猪饲养管理至关重要，特别是营养均衡方面，要根据种公猪的生产需要进行调配饲料及添加营养物质，保证种公猪的能持续提供符合冷冻制作的优质精液。种公猪从体重70kg开始就要饲喂专门的种公猪饲料[4]，控制能量饲料的投入，防止过胖影响生产性能。运动对种公猪的健康十分重要，不仅能保持种公猪的性欲，还能有效提高精液质量，根据不同情况合理安排种公猪的运动量及运动方式[5]。合理的采精频率是保障精液质量和延长种公猪利用年限的重要措施，根据种公猪不同的年龄合理安排每周采精频率，后备种公猪1～2次/周，青年种公猪2～3次/周[5]，具体采精频率还要根据鲜精品质进行调整，一旦发现精液量减少或精子密度下降，应该适当减少采精频率或停采一段时间。

7.2 采精时间

种公猪精液品质不仅受营养水平、年龄等因素影响，而且受季节气温因素影响。通常夏季高温高湿，冬季低温天气都会对种公猪精液质量有影响，难以制作成功，外界气温超过35℃或低于5℃时，建议停采。另外天气突变，如大幅升降温对种公猪的精液质量也会有影响，但这种影响通常是短暂的，几天就能恢复正常。

7.3 温度控制

温度控制在猪冻精生产中至关重要。采精及处理鲜精时，所用的器具应保持同等温度，减少温差带来对精子的打击。在进行4℃平衡时，应放置在17℃水中，同步降温，减少降温带来的冷打击[6]。现在大多数企业生产生猪冻精多采取程序冷冻，控温效果较好。但部分企业为了节省成本采用自制冷冻箱或泡沫箱熏蒸冷冻，采用这种方式冷冻时，应该提前倒入液氮，静置10min以上，让冷冻箱能充分均温，才能保证冷冻效果。冻精冻制成功后，应该全部浸没在液氮中，避免回温带来的影响。检测精液活力时，应确保载温台在37℃，才能准确观察精子活力，温度过高或过低都会影响判断。

7.4 冻精保存

冻精制作好后，应该及时投入液氮罐进行深度冷冻。冷冻1～2周后，应该再进行一次冻精质量检查，将合格精液入库保存。每罐冻精装2/3左右，充满液氮，每周定期检查，及时补充液氮。冻精库房应该保持凉爽、干燥、避风、避光，液氮罐外标注品种名、猪号、支数、生产日期等信息，尽量减少不必要的开罐查找精液。