ABO血型正反定型不一致原因及对策分析

薛雷

（周口市中心医院输血科，河南 周口466000）

ABO血型是发现最早,对临床输血最有意义的血型系统。它的特征之一就是红细胞上存在血型抗原和血清中存在血型抗体。正常情况下要求正反定型一致才能确定ABO血型。正确的ABO血型鉴定是确保临床输血安全的前提条件，ABO血型不合的输血会发生严重的溶血性输血反应,危及患者的生命。在ABO血型鉴定过程中，常因年龄、亚型、某些恶性疾病、不规则抗体阳性、高效价冷凝集素、异常血浆蛋白等因素导致患者血型鉴定困难，为临床安全输血埋下隐患[1,2]。为了分析临床常见ABO血型正反定型不一致的原因并找到各自适合的输血对策,我们对科室近一年来送检的住院患者ABO血型标本进行了分类研究,报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2017年6月-2018年10月,我科共收到住院患者血型鉴定20256例。患者年龄6月-91岁,来源于全院各个科室。同一患者多次入院重复送检的标本只计入一次。所有标本均为EDTA抗凝全血3ml。

1.2 仪器与试剂 抗A抗B、抗AB、抗H、抗A1血型定型试剂和人ABO血型反定型用红细胞试剂盒、不规则抗体筛查用红细胞和普细胞均来自上海血液生物医药有限公司。ABO、RhD血型检测卡来自于美国伯乐。伯乐IH-1000全自动血型分析仪、BASO2005-1离心机等。

1.3 血型鉴定方法 伯乐IH-1000全自动血型分析仪采用微柱凝胶法对所有送检标本进行血型鉴定。ABO血型鉴定不一致者，重新抽取标本进行盐水介质试管法复检,并参考疑难血型三步分析法[3]进行处理。判断ABO血型正反定型不一致标准：⑴正反定型结果不一致；⑵正反定型结果一致，与符合国家质量要求的试剂反应后，正定型为++或更弱的凝集（含出现混合外观样凝集），或者反定型为+或更弱的凝集[4]。

ABO血型正反定型试管法、ABO血型亚型确认试验、不规则抗体筛查及鉴定试验、吸收放散试验均按照输血技术操作规程[5]和相应试剂说明书进行。如果仍有无法解释的的正反型不一致标本送周口市中心血站进一步检验。

2 结果

2.1 ABO血型正反定型不一致分类 去除标本乳糜，血液凝固等人为外在因素，采用盐水介质试管法复检患者ABO血型正反定型仍不一致标本78例。其中，正定型减弱或缺失4例，反定型减弱或缺失52例，反定型额外反应9例，正定型反定型同时额外反应13例。见表1。

2.2 ABO血型正反定型不一致原因分类及对策78例ABO正反定型不一致标本中，生理因素引起55例，疾病因素引起10例，不规则抗体引起7例，非特异性抗体引起6例。表2。

表1 ABO血型正反定型不一致分类

表2 ABO血型正反定型不一致原因分类及对策

3 讨论

全自动血型分析仪采用卡式法鉴定ABO血型，具有在灵敏度、自动化、工作效率等方面的优势,已经成为各大医院输血科血型鉴定的常规方法。但该方法也有一定的局限性。由于微柱凝胶卡的微孔分子筛作用,标本中的纤维蛋白、M蛋白、高效价冷凝集素、自身抗体等会引起抗原抗体反应的假阳性。ABO亚型，血型抗原减弱和血型抗体效价较低的标本，抗原抗体来不及“搭桥”就直接被离心到微柱底部，造成假阴性[6，7]。盐水介质试管法具有可增加离心时间，加大抗原抗体反应量，可选择抗原抗体反应温度等优点,是一种经典而不可替代的血型鉴定方法[8]。我们对ABO血型正反定型初筛不一致的标本采用盐水介质试管法复检。报告中由生理因素引起ABO正反定型不一致者55例，占70.5%。其中52例患者为1岁以下的婴儿或70岁以上的老人，这与张妍等报道[9]相符。3例患者为亚型。ABO血型抗原在5-6周的胚胎红细胞表面便可测得，至2-4岁可达成人水平。出生后3-6月开始合成抗A或（和）抗B，5-6岁达成人水平，随着年龄的增长会逐渐减弱[10]。因此婴儿和老人红细胞抗原或抗体的减弱或缺失是正常的生理现象。我们对6个月以下婴儿不做反定型,正定型用微柱凝胶卡和盐水介质试管法相互验证。70岁以上老年人反定型表现较弱时采用盐水介质试管法加大血清量、在4℃条件下反应和延长离心时间的方法。A和B亚型红细胞与A和B红细胞的主要区别表现在红细胞膜上抗原决定簇的数量上,亚型的红细胞膜上抗原决定簇数量比较少,血型鉴定时有时肉眼几乎看不到凝集[11]。报告中共发现亚型3例。1例是正定型为O型，反定型为B型，进一步血清学试验确定为B亚型。2例是正定型为A型,反定型为O型，进一步血清学试验确定为A亚型。在亚型鉴定试验中，可增加抗AB、抗H、抗A1抗体及A1、A2细胞和吸收放散试验。仍不能鉴定者，可送有条件的上级实验室进行鉴定。

报告中由疾病因素引起ABO正反定型不一致者10例，占12.8%。血浆蛋白异常7例，抗原减弱或缺失3例。多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金淋巴瘤等疾病患者血浆中会出现异常增生的单克隆免疫球蛋白或轻链、高浓度纤维蛋白原等使红细胞呈缗钱状凝集[12]。此类标本我们用生理盐水洗涤患者红细胞3次，用盐水介质试管法做正定型。用O细胞吸收后并加入等量生理盐水后的血浆做反定型。急性白血病、MDS及某些恶性肿瘤可影响红细胞膜上血型抗原的合成,导致红细胞膜上抗原量的不足，给血型鉴定带来一定的困难[13]。报告中2例为急性白血病，1例为MDS,初检ABO血型正反定型不一致。此类标本我们增加抗AB、吸收放散试验和血型物质检测并结合临床资料,进行血型鉴定。

高效价的特异性抗体可在盐水介质中凝集含相应抗原的红细胞而引起ABO血型正反定型不一致[15]。报告中由不规则抗体阳性引起ABO血型正反定型不一致者7例,占9.0%。经过筛查和谱细胞鉴定抗体的特异性，发现抗D 2例，抗E 1例，抗M 3例，抗P11例。在发现ABO正反定型不一致且患者血清与O型细胞发生凝集而自身对照试验阴性时,应该对患者进行不规则抗体的筛选及特异性鉴定。反定型试剂选用阳性不规则抗体相应抗原表达为阴性的红细胞,避免不规则抗体对ABO反定型的干扰。

非特异性抗体是指血浆中的冷抗体和自身抗体。报告中由非特异性抗体引起ABO血型正反定型不一致6例,占7.7%。其中冷抗体引起2例,自身抗体引起4例。正常人血清中存在少量冷凝集素，一般对ABO血型鉴定没有影响,但在某些病理情况下患者体内会存在高效价冷凝集素。此类抗体为IgM类，在室温条件下可与红细胞发生非特异性凝集。我们将患者红细胞用37℃生理盐水洗涤3次并在室温（20℃以上）条件下进行正定型，将患者血清用O型红细胞在4℃下充分吸收，待吸收完全后与反定型细胞在37℃水浴下反应，鉴定反定型。自身免疫性溶血病、系统性红斑狼疮、阵发性睡眠性血红蛋白尿等患者血清中会存在自身抗体并致敏红细胞，引起正定型和反定型的额外反应。我们将患者红细胞生理盐水洗涤后做热放散试验，放散后的红细胞用作正定型；将用生理盐水洗涤后的患者红细胞吸收血清，吸收后的血清用作反定型。

综上所述，ABO血型鉴定是一项看似简单，却又影响因素繁多，与临床联系密切的工作。在遇到ABO正反定型不一致时,要求技术人员加强与临床的沟通，结合病历资料选取有针对性的试验进行分析与验证，鉴定出准确的ABO血型,为临床安全、有效、及时地输血提供有力的保证。