血清EB NA1-IgA,VCA-IgA,VEA-IgA对鼻咽癌诊断价值的研究

卢绍佳，吴锡辉，杨晓燕，郭仲辉

（广州市番禺区中心医院检验科，广东广州511400）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）发病具有明显的地域特征，是我国广东、广西、香港等南方地区常见恶性肿瘤,近年鼻咽癌位列广东省肿瘤发病的前几位[1]，尤其是男性患者需要重点防治的恶性肿瘤[2]。鼻咽癌病因尚不明确，且发病部位隐蔽，临床症状和体征无明显特异性，鼻咽癌的筛查、诊断一直是个难题。鼻咽癌的发生与EB病毒（Epstein-Barr Virus,EBV）感染密切相关[3]。患者血清中产生的多种EB抗体是用来筛查和辅助诊断鼻咽癌患者常用的工具[4]。本研究使用病毒核抗原（EBNA1-IgA）、EB病毒衣壳抗原（VCA-IgA）、EB病毒早期抗原（VEA-IgA）商品化ELISA试剂盒筛查和辅助诊断番禺地区鼻咽癌患者，旨在探讨其辅助诊断鼻咽癌的临床价值。

1 资料与方法

1.1 血清（浆）标本 收集2016年7月至2017年7月在广州市番禺区中心医院就诊并已确诊的初诊鼻咽癌54例。鼻咽癌的诊断标准符合：由医生进行临床检查对鼻咽部的可疑病灶取活体组织,以病理诊断的金标准为依据。其中男性37例,女性17例，患者平均年龄48.37±12.59岁。另选取100例来源于本院体检中心的健康成人作为对照组，女性50例，男性50例，平均年龄38.15±8.78岁。血清样本无溶血、脂血、黄疸等异常。

1.2 主要试剂及仪器 EBNA1-IgA和VCA-IgA ELISA检测试剂盒购自中山生物工程有限公司VCA-IgA试剂批号为201312050。EBNA1-IgA试剂批号为201404011-2。VEA-IgA检测试剂盒购自欧蒙医学实验诊断股份公司,试剂批号为E140 307BD。自动酶标仪ELX800，型号为XMTD-8222。全自动快速立式洗板机购自郑州基波新科技有限公司，型号为JB-1。恒温水浴箱购自上海精宏实验设备有限公司，型号为DK-600S。

1.3 检测方法与结果判读 抽取受试者外周静脉血3ml，3500r/min，离心5min。分离出血清，置于-20℃冰箱待测。操作步骤按照各个试剂盒的说明书进行操作。取包备好对应抗原抗体的酶标板加样，设空白、阴、阳性对照、质控各1孔,样本孔内EBN A1-IgA和VCA-IgA加样本稀释液100μl和待测样本5μl，混匀置37℃温箱温育30min；VEA-IgA用样本缓冲液1:101稀释后每孔加100μl,常温下反应30min。温浴完成洗板后每孔加各个试剂盒对应酶结合物100μl，温育30min（核抗原20分钟）,洗板。EBNA1-IgA和VCA-IgA加底物A、B各50μl每孔，37℃避光分别10min和15min显色,加终止液50μl。VEA-IgA加底物100μl每孔，37℃避光显色15min,加终止液100μl。酶标仪选择450nm波长,空白孔校零，终止后30min内测取各孔OD值。酶标仪OD值校正判断，阳性:标本S/CO值＞1.0；阴性:标本S/CO值≤1.0。

1.4 统计学方法 数据统计学方法使用SPSS20.0统计学软件对数据进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组受检者血清中EBNA1-IgA阳性率。2组阳性率分别为81.48%、6.00%。其χ2=91.16，P＜0.05，2组比较差异有统计学意义,见表1。

表1 不同人群感染EBNA1-IgA检测阳性率

2.2 2组受检者血清中EB病毒VCA-IgA检测阳性率。分别为74.07%、7.00%,其χ2=74.40，P＜0.05,2组比较差异有统计学意义,见表2。

表2 不同人群感染VCA-IgA检测阳性率

2.3 2组受检者血清中EB病毒VEA-IgA检测阳性率，分别为55.56%、3.00%，同时所得出的χ2=57.52，P＜0.05，2组比较差异有统计学意义,见表3。

表3 不同人群感染VEA-IgA检测阳性率

2.4 2组受检者血清中联合三项检测，敏感度和特异度分别是90.74%和98.00%,其χ2=124.67,P＜0.05，2组比较差异有统计学意义,见表4。

2.5 2组受检者血清中单项抗体检测与三项联合检测比较 从表5可见，单独应用一项指标检测鼻咽癌患者时，以NA1-IgA的敏感度最高，VEA-IgA的特异度最高。EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA联合检测在敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值比这三项抗体单独检测时有明显提高。

表4 不同人群感染抗体3项检测阳性率

表5 抗体三项联合检测和单一抗体检测的比较（%）

3 讨论

鼻咽癌是发生于鼻咽粘膜的上皮性恶性肿瘤，目前的研究认为，环境与饮食、遗传因素、EB病毒感染都与鼻咽癌的发生密切相关。鼻咽癌具有明显的区域性和人种倾向性,中国南部发病率高[5]。鼻咽癌早期基本无症状，出现症状就医时基本已到晚期。因此，高发区人群中的例行临床筛查意义重大。EB病毒在鼻咽癌中是以潜伏期感染为主，恒定地表达潜伏期抗原。EBNA1是EB病毒的潜伏期的抗原，是病毒潜伏感染状态必需的蛋白，在细胞转化和维持状态中起重要作用。目前在国内外逐渐推广应用检测EB-NAl抗原抗体作为鼻咽癌的血清学指标[6]。VCA为晚期合成的结构蛋白，存在于细胞质和细胞核中，可在宿主体内终生存在，有助于早期诊断鼻咽癌，并提示凡抗体阳性者均应定期随访观察VCA，具有很高灵敏度和较好的特异性[7]。VEA提示EBV增殖活跃，是细胞进入溶解周期的信号，出现于EB感染的早期。VEAIgA由于灵敏度稍逊，限制了EA-IgA在鼻咽癌初筛中的应用，但是由于其具有极高的疾病特异性，仍然是VCA-IgA的很好的补充[8]。

与以往研究比较，程伟民[9]等测EBNA1在诊断NPC的敏感度和特异度均可达95%,而近5年内有研究显示NA1的灵敏度和特异度都有波动，如王春阳等[10]研究结果提示灵敏度和特异度分别为78.56%、77.98%，杜满兴[11]等研究结果显示为灵敏度88.34%、特异度96.37%。VCA-IgA和EA-IgA与NA1相似,灵敏度和特异度亦有波动，杨雪娟[12]等测其在诊断NPC的灵敏度和特异性度90.0%、89.5%。近5年有研究提示VCA-IgA诊断NPC的灵敏度和特异度分别为35.8%～81.67%、59.5%～86.67%[13,14]；罗耀凌等[15]检测EA-IgA诊断NPC的灵敏度和特异度达75.0%、94.7%，进5年内研究提示EA-IgA诊断NPC的灵敏度和特异度分别为48.33%～68.40%、47.6%～91.67%[13,14]。本研究中EBNAl诊断NPC的灵敏度和特异度分别为81.48%、94%。VCA-IgA为74.07%、93%,EA-IgA为55.56%、97%，与以往研究比较大致相符。此3项中EBNAl灵敏度最高，而EA-IgA最低，3项特异度都达到了90%以上，说明EB病毒VCA-IgA、NAI-IgA、VEA-IgA作为鼻咽癌的血清学指标，在诊断鼻咽癌方面有很好的临床应用价值。上诉结果中3个项目敏感度和特异度的差异,尤其是敏感度的差异可能是由于不同厂家商品化的试剂盒制作不同、受检人群限制或是检测人员之间的差异等多因素导致。如何提高此3项检测质量，因具体分析本实验室影响检测的各个因素和环节。

鉴于上诉3项单一的抗体检测对NPC灵敏度和特异度波动、偏低，抗体的联合检测是目前研究NPC诊断的主要发展方向。目前国内外有多种EB抗体联合检测研究多项抗体对NPC的诊断价值，而此3项在诊断鼻咽癌方面有比较广泛的应用，均提示联合检测可提高其诊断的灵敏度和特异度。以往研究少有研究VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA联合检测诊断鼻咽癌效能，本研究评价3项指标联合检测对鼻咽癌诊断的价值。结果显示3项指标联合检测时，灵敏度可达90.74%，准确度提高到84.42%，而特异性98%为最佳，说明联合检测有互补作用，能提高其诊断价值。本研究存在一定的局限性,尚未对其中两项联合检测鼻咽癌的灵敏度和特异度进行计算,也未对不同鼻咽癌分期患者血清抗体进行分析。

综上所述,EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA联合检测在灵敏度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值比这三项抗体单独检测时有提高。因此，可在临床工作中推荐使用EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA联合检测，以更有效的辅助诊断鼻咽癌。