血清Klotho蛋白水平与缺血性脑卒中致血管性痴呆的相关性

鹿滨麒，陈建明

（南阳市第二人民医院神经内科，河南南阳473000）

缺血性脑卒中（Ischemic stroke）是脑动脉狭窄或阻塞，导致脑供血不足，致脑组织坏死的脑缺血类型的总称,为临床常见的脑血管疾病之一[1]。血管性痴呆(Vascular dementia，VD)指由缺血性脑卒中、出血性脑卒中等脑血管疾病引起的智力及认知功能障碍的综合征[2,3]。Klotho蛋白包括αKlotho和β Klotho两种,为成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）受体复合物的主要成分[4,5]。有研究表明[6]，FGF及Klotho蛋白的高表达有助于延长寿命，且Klotho蛋白具有抗炎、抗血小板聚集、保持血管扩张的作用。孙俊[7]等人认为，Klotho基因通过体内基因表达,产生的膜结合型蛋白与分泌型蛋白均对心血管疾病有明显保护作用，且浓度越高，心血管疾病发病率越低。本研究旨在探讨血清Klotho蛋白水平与缺血性脑卒中致血管性痴呆的相关性，希望为临床提供更多的参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年2月至2018年1月我院收治的126例缺血性脑卒中患者作为研究对象。纳入标准：⑴年龄60～85岁；⑵确诊为缺血性脑卒中者；⑶自愿受试。排除标准：⑴出血性脑卒中者；⑵精神病患者；⑶除血管性痴呆的其他类型痴呆者；⑷依从性差。所有患者在发病后3个月复诊，分为血管性痴呆（痴呆组）和非痴呆组，痴呆组60例，男性36例，女性24例，年龄72～85岁，平均年龄为78.36±4.23岁；非痴呆组66例，男性38例，女性28例，年龄66～78岁，平均年龄为76.43±4.52 岁。两组患者一般资料无明显差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。患者及其家属均对本研究充分知情，且签署知情同意书，本研究经我院伦理委员会批准。

1.2 方法 所有患者入院后均进行血液检查、心电图检查及头颅电子计算机断层扫描（Computed Tomography，CT）和磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging，MRI）检查确定诊断；所有患者入院后均给予抗血栓形成、抗血小板凝集、降低脑水肿、降压、降血糖等对症治疗；所有患者均在发病后3个月采集清晨空腹状态下静脉血5ml，测定血清中超敏C反应蛋白 （hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP）、高半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）及Klotho蛋白水平,具体方法如下：⑴hs-CRP:采集的静脉血离心后取上清液,采用胶乳粒子增强比浊免疫测定法(Latex particle enhanced turbidimetric immunoassay,LETIA)，通过全自动生化分析仪（日本日立公司生产，型号7180）及hs-CRP试剂盒进行测定。⑵Hcy：将乙二胺四乙酸二钠（北京索莱宝生物科技有限公司，型号E8030）加入采集的静脉血标本中进行抗凝处理，加入磺基水杨酸（北京索莱宝生物科技有限公司，型号S8330）以沉淀蛋白质，离心后取上清液，加入三乙酰氧基硼氢化钠（美国SIGMA公司,编号316393）还原胺化,加入单溴二胺（美国艾美捷科技有限公司，型号AAT-633）反应3分钟,后加入无水乙酸以终止反应,将150mm×4.6mm的十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，ODS）插入样本，使用高效液相色谱荧光检测器（美国安捷伦科技有限公司生产，型号G1321A）激发波长365nm，发射波长475nm进行检测，保持10.5分钟。⑶Klotho蛋白：利用人Klotho蛋白检测试剂盒（上海康朗生物科技有限公司,货号KL-KL-Hu）及其说明书进行测定。

1.3 观察指标 一般情况；体内hs-CRP、Hcy及Klotho蛋白水平；缺血性脑卒中致VD的危险因素。

1.4 统计学处理 采用SPSS20.0软件对数据进行统计分析。计量资料采用配对t检验；计数资料采用χ2检验；有序分类变量资料采用秩和检验；危险因素采用Logistic回归分析；相关性分析采用Pearson检验；所有检验确定P值，做出推论。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般情况比较 两组患者年龄、饮酒、梗死范围上有显著差异，具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 两组患者体内hs-CRP、Hcy及Klotho蛋白水平比较 两组患者体内hs-CRP、Hcy水平有明显差异，且痴呆组水平明显高于非痴呆组，具有统计学意义（P＜0.05）；两组患者体内Klotho蛋白水平有明显差异，且痴呆组明显低于非痴呆组，具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 危险因素Logistic回归分析 年龄、hs-CRP、Hcy及Klotho蛋白水平为缺血性脑卒中致VD的密切相关因素，具有统计学意义（P＜0.05）；高血脂和大面积梗死为缺血性脑卒中致VD的可能相关因素。见表3。

表1 两组患者一般情况比较（例）

表2 两组患者血清中体内hs-CRP、Hcy及Klotho蛋白水平比较(±s)

表2 两组患者血清中体内hs-CRP、Hcy及Klotho蛋白水平比较(±s)

组别 例数痴呆组非痴呆组60 66 t P hs-CRP（mg/L）Hcy（μmol/L）4.98±0.86 4.57±0.92 2.577 0.011 18.36±10.42 13.52±11.36 2.484 0.014 Klotho蛋白（pg/ml）165.69±96.68 324.64±87.63 9.681 0.000

表3 危险因素Logistic回归分析

3 讨论

缺血性脑卒中为VD的主要发病原因。有研究表明[8]，年龄、高血压、LDL等为VD的危险因素。脑部缺血可导致体内胆碱能通路受损[9]。胆碱能神经(cholinergic nerve)指末梢可释放乙酰胆碱（Acetylcholine，Ach）的神经纤维，主要分布于大脑白质区域。脑白质损伤所致认知功能障碍的机制主要为额叶-皮质下联络纤维破坏，导致执行功能障碍[10]。

Klotho蛋白主要为成纤维细胞生长因子23（fibroblast growth factor23，FGF23）结合蛋白。FGF为垂体和下丘脑分泌的一种多肽,可促进干细胞生成，产生大量红细胞及白细胞，增加左心室厚度及心肌弹性，还可减少体内LDL含量，并防止脂质沉积于血管壁，减少血栓形成[11,12]。本研究结果显示，两组患者年龄、饮酒、梗死范围上有显著差异，说明以上因素可作为缺血性脑卒中致VD的高危因素。hs-CRP为血浆中的一种C反应蛋白，对心血管等疾病具有指导意义。有研究表明，hs-CRP水平与梗死面积及神经功能缺损程度相关。Hcy是一种含巯基的氨基酸,为蛋氨酸与半胱氨酸代谢的中间产物。Hcy可直接或间接导致血管内皮组织细胞的损伤，并能促进血管平滑肌增殖，减少LDL的氧化，使血小板聚集，促进血栓形成[13,14]。本研究结果显示,两组患者体内hs-CRP、Hcy水平有明显差异,且痴呆组水平明显高于非痴呆组；两组患者体内Klotho蛋白水平有明显差异，且痴呆组明显低于非痴呆组，说明VD患者体内hs-CRP、Hcy水平高于未发病者，Klotho蛋白水平低于未发病者。

综上所述，Klotho蛋白水平与缺血性脑卒中致VD密切相关,可作为缺血性脑卒中后预测VD的标志物，Klotho蛋白的低表达可导致血管内皮功能障碍，使脑白质灌注不足，脑神经细胞损伤。