人乳腺珠蛋白基因表达和趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断中的应用

邓 君，郭中晓，洪 华，刘 蔚，梁 敏

(四川省医学科学院·四川省人民医院 a.检验科，b.图书馆，四川 成都 610072)

乳腺癌是乳腺腺上皮增殖失控的浸润性肿瘤，极大危害女性身心健康，居恶性肿瘤发病率首位，占全球女性癌症发病率24.2%[1]，对乳腺癌早期诊断的生物标志物的开发，一直是研究热点。单一的标志物对乳腺癌诊断具有局限性，人乳腺珠蛋白(HMAM)、趋化因子CXCL16及CA153是与乳腺癌细胞增殖、发生和发展关系密切的标志物[2]，目前尚未见联合检测的报道。本研究测定了50例体检女性、134例良性乳腺肿瘤、104例其他肿瘤和129例乳腺癌患者外周血HMAM、CA153和CXCL16水平，探讨对乳腺癌早期诊断的临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2017年1月至2018年12月我院有明确病理诊断的良性乳腺肿瘤患者134例，其中75例纤维瘤和59例脂肪瘤，年龄20～78岁；乳腺癌患者129例，年龄22～77岁；其他肿瘤患者104例，其中39例卵巢癌、18例肝癌、24例肺癌和23例结肠癌，年龄25～76岁。乳腺癌组纳入标准：病理学明确诊断为乳腺癌患者，术前未经治疗；排除标准：影响内分泌系统和代谢的疾病；合并其他恶性肿瘤；未明确诊断的患者。同期健康体检女性50例(对照组)，年龄20～79岁。所有研究对象均同意参加本研究并签署知情同意书。

1.2 研究方法所有研究对象均在手术前空腹采血，HMAM检测需1 mg/ml EDTA抗凝。

1.2.1总RNA提取及逆转录PCR 淋巴细胞分离液-Trizo提取试剂盒分离提取外周血总RNA，逆转录PCR法合成第一链cDNA，42 ℃反应55 min。-80 ℃冻存备用。

1.2.2实时荧光定量PCR PCR试剂盒由美国R&D生物公司提供，美国Applied Biosystems 7500 快速荧光定量分析仪。HMAM的引物和探针由达安基因生物公司合成。反应体系：模板2 μl，TaqTM(2x) 10 μl，PCR 上下游寡聚核苷酸引物(10 μmol/L)各2 μl，去RNA酶水4 μl，UNG 0.5U，dGTP，dATP和dCTP 各200 μmol/L，dUTP 400 μmol/L，反应条件：95 ℃预变性2 min；94 ℃变性30 s，60 ℃退火延伸30 s，40个循环。72 ℃时荧光检测，40 ℃ 10 s，1个循环。根据内参，用2-ΔΔCt表示目的基因HMAM mRNA，以 2-ΔΔCt>2 判断为阳性。

1.2.3CA153的检测 CA153试剂盒由中生生物公司提供，天津得普IMMELITE WANG化学发光仪测定。

1.2.4CXCL16的检测 CXCL16试剂盒由上海西唐生物公司提供，美国zenith 340RT酶标仪。

1.3 统计学方法采用SPSS 17.0软件分析数据。计量资料比较采用单因素方差分析及LSD-t检验；计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组CXCL16、CA153和HMAM水平比较乳腺癌组CXCL16、CA153和HMAM水平高于良性乳腺肿瘤组和对照组，HMAM和CA153高于其他肿瘤组(P<0.05)，见表1。

表1 各组CXCL16、CA153和HMAM水平比较

2.2 不同临床分期乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平比较Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平高于I+II期乳腺癌患者(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床分期乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平比较

2.3 乳腺癌患者手术前后HMAM、CA153和CXCL16水平比较乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平在手术后均下降(P<0.05)，见表3。

表3 乳腺癌患者手术前后HMAM、CA153和CXCL16水平比较

2.4 CXCL16、HMAM和CA153对乳腺癌的诊断价值比较单一指标诊断乳腺癌，HMAM特异性最高，CXCL16灵敏度最高，三种指标联合检测的灵敏度高于单一指标(P<0.05)，见表4。

表4 CXCL16、HMAM和CA153对乳腺癌的诊断价值比较

3 讨论

人乳腺珠蛋白的组织特异性极强，是定位于11q13乳腺癌相关基因，在乳腺癌患者的乳腺组织和外周血的表达显著升高[3，4]，据报道，20%～80%的乳腺癌有HMAM基因过度表达，与乳腺癌的发生发展密切相关，对于HMAM mRNA表达的监测，将有助于疾病的诊断、治疗和预后[5，6]。本研究也发现，HMAM在乳腺癌组的表达具有较高的特异性，其水平与临床分期有关，且在手术后明显下降，说明不仅可以辅助诊断乳腺癌，也是后期治疗和预后的重要参考指标。

趋化因子的理论和应用研究是目前生命研究的热门之一。CXCL16是发现的50多种趋化因子之一，在炎症、肿瘤和AIDS等疾病中发挥着重要作用，在免疫应答方面，CXCL16通过自身作用及与表达其受体的免疫细胞结合，促进粒细胞的迁移和浸润，对机体的防御功能和免疫损伤起着潜在作用[7～9]。在肿瘤方面，CXCL16及其受体相互作用可促进炎性细胞向病变细胞转变，与肿瘤转移和扩散密切相关，对不同类型肿瘤的增殖与浸润起着关键性作用[10，11]。目前，针对CXCL16在乳腺癌的表达和意义的相关报道较为少见，尚未见CXCL16与HMAM和CA153对乳腺癌辅助诊断的报道。本研究发现，乳腺癌组和其他肿瘤组的CXCL16蛋白表达显著高于对照组和良性乳腺疾病组，而乳腺癌组和其它肿瘤组之间无显著性差异，在乳腺癌组中，CXCL16蛋白表达与临床分期有关，且手术后明显下降。TANG等[12]报道，CXCL16在乳腺癌的表达与正常组织存在显著差异。汤红平等[13]报道，CXCL16 蛋白在浸润性乳腺癌的表达高于良性病变组织和原位癌，而且与肿瘤大小、不同临床分期和是否淋巴结转移相关。本研究发现，虽然CXCL16可能有助于乳腺癌早期诊断和预后监测，但却缺乏诊断特异性，若仅使用CXCL16检测，可能会对乳腺癌诊断造成假阳性，应结合特异性较高指标，比如HMAM等进行联合检测。

CA153是乳腺癌最为重要的特异性较强的标志物，有30%～50%乳腺癌患者血清中CA153会升高，转移性乳腺癌CA153的阳性率可高达80%，其含量与疗效密切相关，是国内外常用的乳腺癌辅助诊断、监测复发、微小转移的指标[14～16]。本研究同样发现，CA153在乳腺癌组活性最高，临床分期级别越高，CA153活性越大，手术后下降。在三种指标中，CA153对乳腺癌诊断特异性仅次于HMAM，但敏感度较低，如果与其他乳腺癌标志物联合检测，可提高CA153的临床诊断价值。

总之，在乳腺癌诊断中，单一的肿瘤标志物检测具有一定的局限性。将特异性较强的HMAM和灵敏度较高CXCL16和CA153联合检测，有助于乳腺癌早期诊断，对乳腺癌预后也有一定的预测作用。