CXCL12、CXCR4与IL-6在特发性膜性肾病中的表达及临床意义*

王思微，牛广华

辽宁中医药大学附属医院临床检验中心,辽宁沈阳 110032

膜性肾病是一种引起成人肾病综合征常见的病理分型，可分为病因不明的特发性膜性肾病(IMN)与由自身免疫性疾病、感染、肿瘤等原因引起的继发性膜性肾病(SMN)。现阶段研究证实IMN发病机制与抗磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体水平等有关，抗PLA2R抗体被认为是引发足细胞损伤最重要的自身抗体[1]。趋化因子是发挥免疫学作用的一群小分子蛋白，具有稳态与炎性双重的趋化作用。趋化因子CXC亚家族的成员CXCL12又名基质细胞衍生因子-1α，其结合到受体CXCR4上发挥独特的生物学效应[2]，CXCL12/CXCR4轴被认为广泛作用在肿瘤细胞的迁移与分化、促进干细胞归巢、并诱导炎性反应与免疫调节等方面。本研究旨在检测IMN患者血清CXCL12、CXCR4与白细胞介素(IL)-6水平，探究其在疾病的发生与发展中的重要作用，并研究其能否成为IMN新的诊断指标，为IMN疾病诊疗提供新的线索。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取辽宁中医药大学附属医院2018年9月至2019年11月经皮穿刺肾活检明确诊断为IMN的患者共105例(IMN组)，除外感染、肿瘤、自身免疫性疾病等原因引起的SMN，全部入选患者均为初次诊断，未经免疫抑制剂或激素治疗。IMN组男性53例、女性52例，年龄为19～83岁，平均(55.19±6.73)岁，根据患者的24 h尿蛋白定量(24 h UTP)将IMN患者分为高蛋白排泄组(24 h UTP≥1.5 g/24 h)54例与低蛋白排泄组(24 h UTP<1.5 g/24 h)51例，所有IMN患者按照Ehrenreich-Churg的病理分期标准分为Ⅰ期27例、Ⅱ期42例、Ⅲ期19例、Ⅳ期17例，并选取55例体检健康者作为对照组，无血清学及尿液的异常，其中男性30例、女性25例，年龄为22～78岁，平均(48.23±8.12)岁。本研究所有研究对象均签订知情同意书，经本院伦理委员会批准。

1.2仪器与试剂 仪器：美国SpectraMax iD3多功能酶标仪；日立7600-020全自动生化分析仪。试剂：CXCL12酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自南京森贝咖生物科技有限公司，CXCR4 ELISA试剂盒购自武汉博士德生物科技有限公司；IL-6和抗PLA2R抗体检测ELISA试剂盒购自德国欧蒙公司；24 h UTP专用试剂盒购自四川迈克公司(免疫比浊法)。

1.3方法 本研究所有对象在清晨空腹采血，在4 ℃条件下13 000 r/min离心10 min，收集血清用ELISA法对CXCL12、CXCR4、IL-6及抗PLA2R抗体水平进行检测，所有标本均无黄疸、脂血或溶血；患者均空腹留取晨尿，并标记24 h尿量。所有操作均严格按照说明书进行，ELISA试剂盒采用五点定标，两个浓度的质控品均在控，且具备符合检测要求的线性条件及其他性能要求。

2 结 果

2.1各组CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平比较 与对照组相比，IMN组CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平增高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。高蛋白排泄组CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；高蛋白排泄组CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平与低蛋白排泄组相比明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)；低蛋白排泄组CXCR4、抗PLA2R抗体水平与对照组相比明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表1 IMN组与对照组CXCL12、CXCR4、IL-6与抗PLA2R抗体水平比较

2.2不同病理分期CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平比较 4种病理分期CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步两两比较，Ⅱ期患者抗PLA2R抗体水平高于Ⅰ期患者；Ⅲ期、Ⅳ期患者CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平高于Ⅰ期患者；Ⅲ期患者CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平高于Ⅱ期患者；Ⅳ期患者CXCL12、CXCR4、抗PLA2R抗体水平高于Ⅱ期患者，Ⅳ期患者CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平高于Ⅲ期患者，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表2 3组CXCL12、CXCR4、IL-6与抗PLA2R抗体水平比较

表3 不同病理分期CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体水平比较

2.3各指标间相关性分析 应用Pearson相关分析显示，CXCL12、CXCR4与抗PLA2R抗体呈正相关(r=0.85、0.82，P<0.05)，而IL-6与抗PLA2R抗体无相关性(r=0.02，P>0.05)；CXCL12、CXCR4、抗PLA2R抗体与24 h UTP呈正相关(r=0.85、0.83、0.85，P<0.05)，而IL-6与24 h UTP无相关性(r=0.24，P>0.05)，见表4。

2.4各指标单项或联合检测诊断IMN的诊断效能 CXCL12、CXCR4、IL-6联合抗PLA2R抗体诊断IMN的灵敏度为90.27%，特异度为95.19%，阳性预测值为91.26%，阴性预测值为94.73%，AUC为0.937，多指标联合检测AUC优于单项指标检测(P<0.05)或两项指标联合检测(P<0.05)，见表5。

表4 各指标间相关性分析

表5 CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体单项或联合检测诊断IMN的诊断效能

续表5 CXCL12、CXCR4、IL-6、抗PLA2R抗体单项或联合检测诊断IMN的诊断效能

3 讨 论

IMN是一种足细胞被破坏的自身免疫性肾病，其基本的病理变化是免疫复合物在肾小球上皮下沉积，激活补体、促进攻膜复合物的形成，进一步诱导终末分化的足细胞的凋亡，其中免疫因素可能与其密切相关[3-4]。在IMN的发生和发展过程中炎症因素为其重要的致病因素之一，慢性炎症是IMN的主要病理特征之一[5]。ZHANG等[6]构建了膜性肾病、免疫、炎症相关的三联体网络。在一系列炎症物质的研究中，趋化因子被认为是具有较强活性的炎性细胞因子，其与肾脏疾病的关系日益被关注，在IMN患者的肾脏组织采用免疫组化的方法检测到一系列趋化因子的高表达，可能加剧疾病发展[7]。

CXCL12与其特异性的受体CXCR4结合通过激活通路发挥其特定的生物学功效[8]。CXCL12/CXCR4趋化轴因其对肿瘤细胞存活、转移和免疫细胞迁移的影响而备受关注[9]。在自身免疫性疾病相关的研究中，CXCL12与非典型趋化因子受体ACKR3结合，ACKR3是调节CXCR4功能的非典型趋化因子受体，在多种癌症类型中过表达。CXCL12/CXCR4/ACKR3轴不仅通过干扰细胞迁移，而且通过调节免疫反应，在众多的自身免疫疾病中调控炎性反应及免疫状态。CXCL12与CXCR4特异性结合后通过激活FAK及ERK1/2通路介导IL-6的高表达[10]，可能与炎性反应增强有关。一些关于肾脏疾病尤其是膜性肾病的研究中，CXCL12/CXCR4轴对足细胞的损伤也日益被关注。在肾病方面，阻断CXCL12可以防止小鼠肾小球足细胞的损坏，可能参与糖尿病肾病的发病机制[11]。在狼疮性肾炎小鼠中拮抗CXC4R也可改善肾病的严重程度与炎症状态[12]。SHA等[13]在体外c5b-9诱导的足细胞损伤模型中，足细胞增殖受到抑制，而CXCL12/CXCR4和磷酸化的STAT3 (p-STAT3)升高。膜性肾病作为一种自身免疫肾病，仍旧依赖于肾组织穿刺活检的诊断方法[14]，抗PLA2R抗体是IMN致病重要的靶抗原，具有较高的灵敏度与特异度[15]，但仍存在一定的假阳性，多种检测指标的应用辅助IMN诊断显得尤为重要。

所以，本研究选取CXCL12、CXCR4与IL-6，探讨其成为IMN诊断评估足细胞损伤的新指标，同时探究联合检测能否替代对患者有创性的肾穿刺活检病理检测手段，并联合特异性的抗PLA2R抗体，探讨新型诊断模式。本研究结果显示，CXCL12、CXCR4、抗PLA2R抗体与24 h UTP呈正相关，可能与足细胞损伤肾小球机械屏障受损有关，符合IMN部分患者存在肾病综合征的临床表现。本研究还发现，4种指标联合检测具有更高的诊断效能。但是本研究仍存在样本量少、入选病例存在偏倚、机制研究不足、统计学方法单一等问题，在后续研究中应进一步完善。