急性心肌梗死患者血浆MEG3及UCA1表达水平与冠状动脉病变的相关性*

王琴， 江希， 王引利

(成都市第三人民医院 心内科， 四川 成都 610000)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是临床常见急危重症，好发于中老年人群，预后较差，我国AMI的死亡率为0.8%～1.4%[1]。准确评估冠状动脉(简称冠脉)病变，对AMI的诊疗非常重要，冠状动脉造影(coronary angiography,CAG)是诊断冠脉病变的金标准，但也是一种有创性的检查，其应用受到一定的限制。利用血浆学指标辅助评估冠脉病变情况已经成为近年学术界的研究热点，血浆学检测具有简单易行等优点，但目前常用的C-反应蛋白、同型半胱氨酸等血浆标记物易受炎症反应、脂代谢障碍等因素影响，在AMI诊疗中应用价值并不理想[2]。长链非编码核糖核酸(long-chain non-coding ribonucleic acid, lncRNA)是一种无编码蛋白质功能的长度>200 nt的RNA，可介导心血管疾病的发生发展，人类母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)、尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma antigen 1,UCA1)为目前研究较多的lncRNA，也被部分学者认为是AMI诊断的新型标记物[3-4]。目前，临床主要研究集中于lncRNA表达水平与AMI冠脉病变严重程度的关系，常常忽略AMI住院期间心血管事件发生情况与lncRNA表达水平的关系研究。本研究以208例AMI患者作为研究对象，并于入院2 h时检测血浆MEG3、UCA1表达水平及肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)的含量，采用Spearman秩相关及Pearson相关分析冠脉病变与AMI患者血浆MEG3、UCA1基因及CK-MB、cTnI表达水平的相关性，AMI患者住院期间心血管事件与血浆MEG3、UCA1的相关性，为AMI的诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1一般临床资料 选取2019年1—12月收治的208例AMI患者作为研究对象，男性131例、女性77例，年龄44～76岁、平均(59.87±9.31)岁。纳入标准：(1)符合中华医学会心血管病学分会制定的AMI诊断标准[5](缺血性胸痛病史、心电图动态演变、心肌坏死血浆心肌标记物肌红蛋白、肌钙蛋白等的动态改变，3条中2条具备即可确诊)；(2)发病至入院时间≤12 h；(3)年龄>18岁；(4)签署知情同意书。排除标准：(1)既往心肌梗死病史；(2)合并痛风、急性脑血管疾病、自身免疫性疾病；(3)伴严重肝肾疾病；(4)入院前6个月内肝炎病史；(5)入院前1周内使用他汀类药物治疗。本研究符合赫尔辛基宣言。

1.1.2分组 AMI患者在入院后，以右侧桡动脉或股动脉Judkins法行CAG，选择不同投照体位，记录冠状动脉狭窄情况，以冠脉管腔直径狭窄≥50%判断为狭窄；并利用Gensini评分[6]评估冠脉病变程度，Gensini评分根据病变血管部位及狭窄程度加权评分，<30分49例、纳入低分组，30～60分83例、纳入中分组，>60分76例、纳入高分组。

1.2 观察指标

比较低分组、中分组及高分组AMI患者入院2 h时的血浆MEG3、UCA1基因表达水平及CK-MB、cTnI含量，采用Pearson法分析血浆MEG3、UCA1基因表达与Gensini评分、CK-MB及cTnI水平的相关性，比较住院期间发生心血管事件(心律失常、心力衰竭、心绞痛及心血管事件)患者与未发生心血管事件患者的血浆MEG3及UCA1基因表达水平，采用Spearman秩相关分析AMI患者住院期间心血管事件与血浆MEG3、UCA1基因表达的相关性。3组患者入院2 h内抽取外周静脉血，分离血浆后加入Trizol试剂混匀，静置5 min，加入氯仿混匀，静置10 min；离心留取上清液，加入等体积异丙醇匀混，静置3 min，离心后倒出管内液体，加入乙醇，离心后倒出乙醇，吸走剩余液体，晾干；管中加入RNase-free ddH2O，溶解RNA，用分光光度计测定总RNA浓度及纯度。提取总RNA后，利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术行逆转录，取适量cDNA为模板，引物浓度0.4 μmol/L，15 μL体系扩增，根据目标基因设计合成相应上下游引物进行PCR扩增，以荧光定量PCR荧光信号达到设定阈值时的Ct值为样本表达量，各样本均重复循环3次，MEG3、UCA1相对表达量以2-ΔΔCt表示；采用免疫化学发光法(试剂盒由德国罗氏公司生产)检测血浆肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme, CK-MB)及肌钙蛋白I(troponin I, cTnI)水平。采用生化分析仪测定血浆CK-MB及cTnI水平。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般资料

3组AMI患者性别、年龄、左心室射血分数、脂代谢紊乱情况及高血压史、糖尿病史、吸烟史等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组AMI患者一般资料Tab.1 Comparison of baseline data among AMI patients with different Gensini scores

2.2 血浆MEG3、UCA1基因表达水平及CK-MB、cTnI含量

结果显示，3组AMI患者血浆MEG3基因表达水平及CK-MB、 cTnI含量比较，低分组<中分组<高分组，差异有统计学意义(P<0.001)；3组血浆UCA1基因表达水平比较，低分组>中分组>高分组，差异有统计学意义(P<0.001)。见表2。

表2 各组AMI患者血浆MEG3、UCA1基因表达水平及CK-MB、cTnI含量Tab.2 Comparison of levels of serum MEG3, UCA1,and CK-MB, cTnI in each group

2.3 血浆MEG3、UCA1基因表达与Gensini评分、CK-MB及cTnI含量的相关性

Pearson相关分析结果显示，AMI患者血浆MEG3与Gensini评分、CK-MB及cTnI表达水平呈正相关(r=0.411、0.329、0.342，P<0.05)，血浆UCA1表达水平则与Gensini评分、CK-MB、cTnI表达水平均呈负相关(r=-0.389、0.307、0.318，P<0.05)。见表3。

表3 AMI患者血浆MEG3、UCA1基因表达与Gensini评分、CK-MB及cTnI含量的相关性Tab.3 Correlation between serum MEG3, UCA1, and Gensini scores, CK-MB, and cTnI among AMI patients

2.4 住院期间发生心血管事件与未发生患者血浆MEG3及UCA1基因表达水平

结果显示，AMI患者中发生心血管事件患者血浆MEG3基因表达水平高于未发生患者、血浆UCA1基因表达水平低于未发生患者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 住院期间发生心血管事件与未发生患者血浆MEG3及UCA1基因表达水平Tab.4 Comparison of serum MEG3 and UCA1 between AMI patients with and without cardiovascular events during hospitalization

2.5 住院期间心血管事件与血浆MEG3、UCA1基因表达的相关性

Spearman秩相关结果显示，AMI患者心律失常、心力衰竭、心绞痛心血管事件的发生与血浆MEG3基因表达呈正相关(r=0.315、0.339、0.378、0.422，P<0.05)，与血浆UCA1基因表达呈负相关(r=-0.419、0.428、-0.405、-0.483，P<0.05)。见表5。

3 讨论

本研究发现，患者入院2 h时检测血浆MEG3、UCA1基因表达水平对AMI诊断均具有较高的价值。也初步证实了MEG3、UCA1基因可能参与AMI的发生发展，其血浆含量能辅助诊断AMI。为更深入探讨MEG3、UCA1表达基因与AMI的关系，本研究亦就血浆MEG3、UCA1表达基因与AMI冠脉病变的相关性展开研究，以评估lncRNA在AMI诊疗中的应用价值。

心电图、心肌酶谱检查均为临床辅助诊断AMI的常用手段，传统心肌酶谱包括CK-MB、cTnI等[7]。但在AMI发病早期(发病3 h内)患者血浆含量无明显变化，在AMI发病3 h后逐渐升高，于发病6～8 h时呈明显升高，12h时达峰值。故心电图、心肌酶对早期AMI诊断价值不高[8]。因此，探寻早期AMI的敏感性血浆标记物十分必要。近年来，lncRNA已经成为学术的研究热点，在机体外周血中存在丰富且稳定表达的lncRNA，lncRNA在表观遗传调控、转录调控及转录后调控等过程中均能发挥重要作用，是一种理想的基于血液的疾病监测指标及治疗新靶点[9-10]。

MEG3为人正常组织中的肿瘤抑制因子，不仅能参与内皮细胞增殖、血管形成过程，还能刺激心肌细胞损伤、促进心脏纤维化，介导心脏重构及细胞凋亡过程[11-12]。3组血浆MEG3基因表达水平比较，低分组<中分组<高分组(P<0.05)。提示冠脉狭窄病变严重的患者，血浆MEG3表达水平越高，这可能与MEG3具有刺激心肌细胞损伤及促进心脏纤维化作用，在冠脉狭窄严重时，参与心脏重构过程而大量表达有关[13-14]。本研究发现，血浆MEG3基因表达水平不仅与CK-MB、cTnI水平呈正相关，也与Gensini评分呈正相关(P<0.05)。究其原因可能与MEG3能参与心肌损伤过程，在AMI发病早期即可大量表达，并随狭窄、缺血缺氧的严重程度的升高表达增加有关[15-16]。因此，MEG3在评估早期AMI冠脉狭窄情况中，具有重要作用。有文献报道，UCA1是最初在膀胱移行细胞癌中发现的lncRNA，也是膀胱癌潜在的生物标记物，具有心脏供能及心功能保护作用，可作为AMI新型标记物[17-18]。本研究也发现，血浆UCA1基因表达水平与CK-MB、cTnI水平呈负相关，且与Gensini评分呈负相关(P<0.05)。该结果与随着冠脉狭窄严重程度的增加，参与心脏供能过程的UCA1增多，使UCA1大量消耗，导致血浆表达量下降有关[19-20]。

此外，AMI发病后，心肌血供急剧减少，甚至中断，可导致大面积心肌坏死，而易引起心力衰竭、猝死等心血管事件，严重影响预后。因此，患者住院期间的心血管事件也是临床关注的重点之一[21-22]。本研究发现，AMI患者心律失常、心力衰竭、心绞痛等心血管事件的发生与血浆MEG3基因表达呈正相关，与血浆UCA1基因表达呈负相关(P<0.05)。提示，血浆MEG3、UCA1基因表达水平与AMI患者住院期间心血管事件的发生存在一定联系，对评估患者预后有积极意义[23-24]。还有学者提出，血浆MEG3基因等标记物与AMI患者短期预后也有一定相关性[25]。然而，本研究缺乏对AMI患者的随访观察，未对血浆MEG3、UCA1基因表达水平与患者近远期预后情况作进一步分析，也是本研究存在的缺陷。因此，为探析血浆MEG3、UCA1基因表达与AMI预后的关系，还需后续延长随访时间的深入研究。

综上所述，血浆MEG3、UCA1基因表达水平与AMI患者冠脉病变严重程度及住院期间心血管事件发生情况具有相关性，有望成为评估AMI病情进展的新指标。