瑶药杀松涯重金属及有机氯农药残留量分析

覃冬杰，陈荣珍，陆峥琳，卢 艺，黄瑞松*

（1.柳州市质量检验检测研究中心，广西 柳州 545006；2.广西国际壮医医院 壮瑶药研发中心，广西 南宁 530001）

瑶药杀松涯是鳞始蕨科植物乌蕨 Odontosoria chinensis （L.） J. Smith 的全草，也称大金花草，别名为野鸡尾、金花草、土黄连、中华金粉蕨。我国主要分布于浙江、福建、台湾、安徽、江西、广东、广西、海南、香港、湖南、湖北、四川、贵州及云南等省（区），广西各地区均有分布。本品为瑶族民间常用药，瑶医认为杀松涯具有清热解毒、利湿、活血止血的作用，主要用于治疗感冒、发热、咳嗽、扁桃体炎、腮腺炎、肠炎、痢疾、黄疸型肝炎、肝脓疡、跌打损伤、骨折、刀伤出血、狂犬咬伤、烧烫伤、伤口溃烂等症。其单方和复方均具有清热解毒、利湿、止血的功效[1]。研究表明，杀松涯化学成分主要为黄酮类和有机酚酸[2-4]，临床用于治疗肠炎、肝炎、咽喉炎等症，民间用于治疗胃癌、肠癌、食物中毒和农药中毒[5]。

近年来，随着我国经济的飞速发展，自然环境受到了不同程度的污染[6-7]，全国范围内的中药材受外源性污染问题依然严峻[8-11]。而杀松涯作为野生天然植物，在其自然生长过程中，有可能会受重金属及有机氯农药的污染。因此，对瑶药杀松涯的重金属及有机氯农药残留的测定十分有必要。本研究采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定铅、砷、镉、汞和铜，用气相色谱法测定总六六六、总滴滴涕和五氯硝基苯，为瑶药杀松涯的安全性使用提供试验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

7700x 型电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）（美国安捷伦科技公司）；MARS-6 型微波消解仪（美国CEM 公司）；BHW-09C 型赶酸仪（上海博通化学科技有限公司）；XS205 型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；明澈24UV 型超纯水器（德国默克密理博公司）；7890B 型气相色谱仪（美国安捷伦科技公司）； TTL-DC Ⅱ型氮吹仪（北京通泰联科技发展有限公司）；R-300 型旋转蒸发仪（瑞士步琦有限公司）；SK8200HP 型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）。

1.2 试剂及标准溶液

硝酸（优级纯，德国默克公司）；实验用水为自制一级实验用水；铅标准溶液（批号：16063，中国计量科学研究院，1 000 μg/mL）；砷标准溶液（批号：18083-18，中国计量科学研究院，1 000 μg/mL）；镉标准溶液（批号：16012，中国计量科学研究院，1 000 μg/mL）；汞标准溶液（批号：18B012-2-18，国家有色金属及电子材料分析中心，1 000 μg/mL）；铜标准溶液（批号：191039-3，国家有色金属及电子材料分析中心，1 000 μg/mL）；ICP-MS混合内标液（批号：50-025CRY2，美国安捷伦科技公司，100 μg/mL）。

石油醚（60 ～ 90 ℃）、二氯甲烷、丙酮、硫酸、无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯，总六六六（BHC）和总滴滴涕（DDT）混合标准溶液（含α-BHC：50.0 μg/mL，β-BHC ：50.0 μg/mL，γ-BHC ：50.1 μg/mL，δ-BHC：50.2 μg/mL，p,p’-DDT：50.0 μg/mL，o,p’-DDT：50.1 μg/mL，p,p’-DDE：50.0 μg/mL，p,p’-DDD：50.2 μg/mL，中国计量科学研究院，批号：19001），五氯硝基苯（PCNB）标准溶液（批号：201910，农业部环境保护科研监测所，100 μg/mL）。

1.3 杀松涯样品

在广西百色市右江区、靖西市、宾阳县、恭城瑶族自治县、西林县、金秀瑶族自治县、凤山县、上林县共采集了12 批杀松涯样品，经广西国际壮医医院黄瑞松主任中药师鉴定均为鳞始蕨科植物乌蕨 Odontosoria chinensis （L.） J. Smith。

2 方法与结果

2.1 重金属元素的测定

2.1.1 仪器条件 ICP-MS 射频功率：1 320 W；载气流速：1.15 L/min；采样深度：8 mm；蠕动泵转速：0.45 r/s；重复次数：3 次。

微波消解条件：室温经20 min 升至180 ℃，保持25 min，然后经15 min 降至室温。

2.1.2 测定方法 按照《中国药典》2020 年版（四部）0412 电感耦合等离子体质谱法进行测定。测定时采用在线引入内标校正定量法。其中，铜、砷以锗为内标，镉以铟为内标，汞、铅以铋为内标。

2.1.3 对照品溶液的配制 分别精密吸取铅、砷、镉和铜标准溶液适量，用10%硝酸溶液稀释并配制成含铅、砷和镉各为1 μg/mL、铜为10 μg/mL 的混合对照品贮备液。精密吸取混合对照品贮备液适量，用10%硝酸稀释并配制成含铅、砷和镉分别为0、1、2、5、10、20、50 ng/mL、含铜0、10、20、50、100、200、500 ng/mL 的混合标准系列溶液。精密吸取汞标准溶液适量，用10%硝酸溶液稀释并配制成含汞为0.1 μg/mL 的对照品贮备液，精密吸取汞对照品贮备液适量，用10%硝酸稀释并配制成含汞0、0.1、0.2、0.5、1、2、5 ng/mL 的标准系列溶液。

2.1.4 内标使用液的配制 精密吸取ICP-MS 混合内标液适量，用水稀释并配制成含量为1 μg/mL 的内标使用液。

2.1.5 样品溶液的制备 精密称取粉碎成粗粉的样品0.5 g 于消解罐中，加8 mL 硝酸，放置赶酸器中100 ℃预消解30 min，冷却后盖上罐盖，旋紧罐盖，按照微波消解仪的标准操作步骤进行消解，冷却后取出，缓慢打开罐盖排气，用少量的超纯水冲洗内盖，将消解罐放在赶酸仪上赶酸，100 ℃赶去棕色气体，取出消解罐，将消解液转移至50 mL 的容量瓶，用少量超纯水分3 次洗涤消解罐，洗涤液合并于容量瓶并用超纯水定容至刻度，混匀备用，同时做空白试验。

2.1.6 线性关系的考察 取混合标准系列溶液和汞标准系列溶液分别上机测定，以待测元素浓度为横坐标，待测元素和相应内标元素响应值的比值为纵坐标，进行线性回归，得出各元素线性回归方程，见表1。

表1 5 种重金属元素线性方程及线性范围Tab. 1 Linear equation and linear range of each element

2.1.7 检出限试验 以11 次空白溶液测定值计算仪器检出浓度，按照“2.1.5”项下方法计算出各元素的检出限。结果铅检出限为0.007 mg/kg、砷检出限为0.003 mg/kg、镉检出限为0.006 mg/kg、汞检出限为0.000 5 mg/kg、铜检出限为0.001 mg/kg。

2.1.8 重复性试验 精密称取编号为1 的样品各0.5 g 共6 份，按“2.1.5”项下方法平行操作，制备供试液，测定，计算各元素含量。结果各元素含量的RSD 分别为1.8%、2.2%、2.6%、3.0%和1.2%。表明方法重复性良好。

2.1.9 回收率试验 取编号为1 的样品各0.25 g 共18 份，按下表分别加入铅、砷、镉、汞、铜标准溶液适量，按“2.1.5”项下方法分别制备加样回收试验供试液，测定，计算回收率，见表2。

2.1.10 样品测定结果 分别取12 批样品，按“2.1.5”项下方法制备样品供试液,并按“2.1.2”项下方法测定样品中铅、砷、镉、汞、铜元素含量。结果见表3。

2.2 有机氯农药残留的测定

2.2.1 气相色谱条件 弹性石英毛细管柱DBCLP1（30 m×0.32 mm×0.25 μm），ECD 电子捕获检测器，进样口温度：230 ℃，检测器温度：340 ℃，不分流进样：1 μL，载气：N2，流速：2 mL/min。柱温：初始温度150 ℃，保持0.2 min；以10 ℃/min 的速度升至250 ℃，保持0 min；以15 ℃/min 的速度升至300 ℃，保持0 min；以30 ℃/min 的速度升至330 ℃，保持0.5 min。

2.2.2 对照品溶液的配制 精密量取总六六六（BHC）和总滴滴涕（DDT）混合标准溶液1 mL，五氯硝基苯（PCNB）标准溶液0.5 mL，置于同一10 mL容量瓶，用石油醚（60 ～90 ℃）定容至刻度，得含量约为5 μg/mL 的混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液1 mL 置于50 mL 容量瓶，用石油醚（60 ～90 ℃）定容至刻度，得含量约为100 ng/mL的混合对照品溶液。分别精密量取混合对照品溶液0、0.1、0.5、1、5、10 mL 置10 mL 容量瓶，用石油醚（60 ～90 ℃）定容至刻度，得含量约为0、1、5、10、50、100 ng/mL 的混合标准系列溶液。

表2 5 种重金属元素加样回收试验结果Tab. 2 Recovery test results of each element

表3 12 批样品5 种重金属元素测定结果（mg/kg）Tab. 3 Detection results of each elements in samples（mg/kg）

2.2.3 样品溶液的制备 精密称取粉碎后过三号筛的样品约2 g，精密称定，置150 mL 具塞锥形瓶中，加水20 mL 混匀浸泡过夜，精密加入丙酮40 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用丙酮补足失重，再加入氯化钠约6 g，精密加二氯甲烷30 mL，称定重量，超声15 min，再称定重量，用二氯甲烷补足失重，静置使分层，将有机相迅速移入装有4 g 无水硫酸钠的100 mL 具塞锥形容量瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于40 ℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60 ～90 ℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60 ～90 ℃）少量多次溶解转移至10 mL 具塞刻度离心管中，加石油醚（60 ～90 ℃）精密稀释至5 mL，小心加入浓硫酸1 mL，振摇1 min，离心（3 000 r/min），精密量取上清液2 mL，置刻度氮吹管中，于40 ℃下将溶液浓缩至适量，精密稀释至1 mL，即得。

2.2.4 线性关系及检出限试验 取混合标准系列溶液上机测定，以待测物浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得出各成分线性回归方程。检出限以3 倍信噪比（S/N）所对应的浓度计，按照“2.2.3”项下方法计算各成分检出限，见表4。

2.2.5 精密度试验 取浓度为50 ng/mL 混合对照品溶液，重复进样5 次。结果各成分峰面积的RSD为3.7%～6.5%，表明精密度良好。

2.2.6 回收率试验 取编号为2 的样品各2 g 共18份，按下表分别加入含量约为100 ng/mL 的六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）和五氯硝基苯（PCNB）混合对照品溶液适量，按“2.2.3”项下方法分别制备加样回收试验供试液，测定，计算回收率，见表5。

2.2.7 样品测定结果 分别取12 批样品，按“2.2.3”项下方法制备样品溶液，并按“2.2.1”项下条件测定样品中各有机氯农药残留量。结果见表6。

表4 各成分线性方程及检出限Tab. 4 Linear equation and detection limit of each composition

表5 各成分加样回收试验结果Tab. 5 Recovery test results of each composition

表6 样品中9 种有机氯农药残留量测定结果（mg/kg）Tab. 6 Detection results of 9 kinds of organochlorine pesticide residues in samples（mg/kg）

3 讨论

杀松涯为广西瑶族民间常用药，但未有标准规定其重金属及农药残留量限度。故以《药用植物及制剂出口绿色行业标准》[12]中规定的铅≤5.0 mg/kg、砷≤2.0 mg/kg、镉≤0.3 mg/kg、汞≤0.2 mg/kg、铜≤20 mg/kg；总六六六≤0.2 mg/kg、总滴滴涕≤0.2 mg/kg、五氯硝基苯≤0.1 mg/kg 限度作为参考。测定结果表明，样品中铅、砷、镉、汞、铜含量范围分别为1.53 ～6.33 mg/kg、0.21 ～3.35 mg/kg、0.11 ～0.30 mg/kg、0 ～0.05 mg/kg、1.52 ～14.28 mg/kg；总六六六、总滴滴涕和五氯硝基苯的含量范围分别为0 ～1.159 8 mg/kg、0.002 1 ～0.047 1 mg/kg、0.002 8 ～0.090 0 mg/kg。大部分样品的重金属及有机氯农药残留量均在安全范围内，但4 号样品的砷和5 号样品的铅超标，1 号和10 号样品的总六六六超标。说明杀松涯在重金属和农药残留方面尚存在一定的安全隐患，提示这类外源性污染物应当受到重视并加以防范。由于在同一地点采集的样品量较少，样品受生长地的环境影响较大，因此测试结果只能体现采集地点样品的情况。本次检测的样品全部为野生品，其所受外源性污染物可能与生长地点的土壤、水质以及附近人为使用农药有关。控制污染应从源头抓起，建议当地应从保护生态坏境入手，并加强对药材的重金属及有机氯农药残留进行持续监测，以保证用药的安全性。

4 结论

本研究采用的电感耦合等离子体质谱法和气相色谱法精密度高、重复性好、结果准确可靠，适用于瑶药杀松涯重金属和有机氯农药残留量的检测。本次测定结果可为瑶药杀松涯的用药安全性提供一定的试验依据。