甘草油食用安全性评价

豆康宁 董 彬

(1. 漯河医学高等专科学校河南省休闲食品工程技术研究中心，河南 漯河 462002；2. 河南科凝生物科技有限公司，河南 郑州 450000)

甘草为多年生草本植物，属豆科，是一种药食两用的食品资源[1]。在GB 2760—2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用卫生标准》中，甘草提取物(粉)、甘草酸铵、甘草酸一钾及三钾均为功能甜味剂，能在饼干、蜜饯凉果、调味品、糖果、肉罐头类等食品中，按生产需要使用。

甘草富含粗脂肪、粗蛋白、氨基酸和矿物质，甘草的根茎和籽粒中均含有油脂。甘草油具有很高的营养价值，据报道[2]，甘草油脂肪酸组成中主要含有4种脂肪酸，分别是棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸，其中必需脂肪亚油酸含量约60%、亚麻酸含量约12%。甘草油具有医疗保健作用，对湿疹、皮炎、溃疡等皮肤病具有一定的保健和治疗作用[3-4]。白雪[5]研究表明，甘草油对失禁相关性皮炎具有良好的疗效。解昱等[6]研究表明，甘草油对糜烂型扁平苔藓具有良好的疗效。张小桐[7]研究表明，甘草油可有效维护患者口腔健康，降低口腔感染、异味发生率，改善患者牙周健康状况。因此，甘草油不仅含有丰富的必需脂肪酸，营养价值较高，而且具有很高的保健价值。

目前，甘草油的成分已有较多研究，但其毒理学研究鲜有报道，这为甘草油在食品中的应用带来一定不确定性。试验拟依照GB 15193.1—2014《食品安全国家标准食品安全性毒理学评价程序》，研究甘草油的毒理学作用，探讨甘草油的食用安全性，为甘草油在食品工业中的应用提供安全性参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甘草：乌拉尔甘草，水分含量7.3%，产地宁夏盐池；

正己烷：分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；

小白鼠(BALB/C)、大白鼠(SD)：SPF级，在25 ℃的恒温动物房中饲养，湖南斯莱克景达实验动物有限公司；

环磷酰胺：分析纯，苏瑞医药化工有限公司；

食用油：大豆色拉油，益海嘉里集团。

1.2 仪器与设备

全自动生化分析仪：BT3000-plus型，意大利Biotecnlca Instruments公司；

全自动血液分析仪：KX-21型，日本Sysmex东亚公司；

旋转蒸发仪：RE-52 A型，上海亚荣生化仪器厂。

1.3 试验方法

1.3.1 甘草油提取 根据文献[2]修改如下：将甘草粉碎成30目的粉末，称量10.0 g甘草粉放入索氏抽提器中，加入200 mL正己烷，恒温水浴锅加热温度为70 ℃，提取时间为5 h。将提取液冷却后转移到旋转蒸发仪中，负压蒸馏回收正己烷溶剂，加热温度为60 ℃，压强为0.08 MPa，蒸发浓缩提取液后得到甘草油脂。

按式(1)计算甘草油脂提取率。

(1)

式中：

Y——甘草油脂提取率，%；

M1——甘草油脂质量，g；

M0——甘草粉质量，g；

W——水分质量分数，%。

1.3.2 小白鼠急性毒性试验 根据文献[8]修改如下：选体重18～20 g健康小白鼠40只，雌雄各半，其中雌雄各分为2组，共4组。小白鼠禁食16 h后，按15.0 g/kg·BW的剂量经口1次给甘草油，以食用油为对照组。观察2周，记录小白鼠中毒、死亡等情况。

1.3.3 小白鼠的精子畸形试验 根据文献[9]修改如下：选雄性性成熟小白鼠30只，体重18～20 g，按体重随机分为5组，设低、中、高3个甘草油剂量组，剂量值顺次为1.25，2.50，5.00 g/kg·BW，阴性对照组食用油为5.00 g/kg·BW，阳性对照组环磷酰胺为0.04 g/kg·BW。每天经口灌胃甘草油2次，连续灌胃5 d，再继续喂养2周，然后处死动物。取小白鼠两侧附睾制备精子标本。再用伊红染色小白鼠的精子标本，最后在高倍镜下检查小白鼠的精子标本。检查小白鼠精子标本数量为1 000个，同时记录小白鼠精子突变数量及类型。

1.3.4 大白鼠30 d喂养试验 根据文献[10]修改如下：选体重180～200 g健康大白鼠40只，雌雄各半，分为8组，即雌雄各4组。设低、中、高3个甘草油剂量组，剂量值顺次为1.25，2.50，5.00 g/(kg·BW·d)，阴性对照组食用油为5.00 g/(kg·BW·d)。大白鼠经连续30 d口灌胃甘草油，再测定血液学指标、血清生化学指标、脏器质量和脏体比。

1.3.5 统计学分析 数据分析采用SPSS软件统计分析处理。采用t检验分析试验组与对照组的差异显著性。

2 结果与分析

2.1 甘草油提取率

用正己烷溶剂提取甘草油脂，在提取条件为温度70 ℃、液料比(V正已烷∶m甘草)20∶1 (mL/g)、提取时间5 h 下，甘草油脂提取率达4.49%。而甘草中粗脂肪含量为5.38%[2]，以甘草中粗脂肪含量作为参照，则甘草油脂有效提取率达到83.5%。

2.2 小白鼠急性毒性试验

试验按照一次最大限量法经灌胃15.0 g/kg·BW的甘草油，其结果见表1。

表1 甘草油对小白鼠的经口急性毒性试验结果

由表1可知，在2周观察期内，对照组和试验组全部活动正常，包括活动、进食、行为等未见异常，小白鼠死亡率为0%。说明甘草油对小白鼠没有造成毒性影响。按急性毒性分级标准，判定该受试物甘草油为实际无毒物，甘草油的半数致死剂量LD50>15.0 g/kg·BW[11]。

2.3 小白鼠精子畸形试验

由表2可知，甘草油各剂量组的小白鼠精子畸形率随剂量的升高略微上升，而且高于阴性对照组(食用油)。但统计分析结果显示，阴性对照组(食用油)与各甘草油剂量组之间均无显著差异(P>0.1)。经各剂量甘草油灌胃处理后，小白鼠的精子畸形率数值均在正常范围(0.8%～3.4%)[12]内，即小白鼠精子的畸形率与甘草油的剂量无相关性，说明甘草油在所设剂量范围内不引起小白鼠精子畸形率增高。

2.4 大白鼠30 d喂养试验

2.4.1 大白鼠体重变化 在30 d喂养期间，大白鼠毛色保持正常，无异常行为且未发生死亡。由表3可知，与阴性对照组大白鼠的体重增加量相比，甘草油各剂量组雌、雄大白鼠体重的增加量有一定大小变化，但与甘草油剂量变化相关性不显著(P>0.05)，与阴性对照组差异也不显著(P>0.05)。甘草油各剂量组雌、雄大白鼠体重的增加量随剂量递增而增加。说明甘草油营养丰富，能够满足大白鼠机体正常的生长需要。

2.4.2 血液学检查 由表4可知，甘草油各剂量组雌雄大白鼠的血红蛋白、红细胞、白细胞的指标含量，与食用油阴性对照组差异均不显著(P>0.05)，而且，甘草油各剂量组大白鼠的常规血液学指标，与甘草油的剂量变化无显著相关性(P>0.05)。说明大白鼠经30 d口服甘草油，对其常规血液学指标无显著影响。

表2 甘草油对小白鼠精子的畸形率影响†

表3 甘草油对大白鼠体重的影响

2.4.3 血液生化学检查 由表5可知，不同剂量甘草油喂养雌雄大白鼠30 d后，甘草油各组雌雄大白鼠的血清白蛋白、总蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、血清尿素氮、总胆固醇、甘油三酯、血糖的生化指标含量，与食用油阴性对照组差异均不显著(P>0.05)，而且，甘草油各剂量组血液生化指标与甘草油的剂量变化无显著相关性(P>0.05)。说明大白鼠经30 d口服甘草油，对其血液生化学指标无显著的影响。

表4 甘草油对大白鼠血液学指标的影响

2.4.4 对脏器质量以及脏体比的影响 由表6可知，各甘草油剂量组的心质量、肾质量、肝质量、肺质量、脾质量、心体质量比、肾体质量比、肝体质量比、肺体质量比、脾体质量比，与食用油阴性对照组比较差异均不显著(P>0.05)，且甘草油各剂量组间的脏器质量及脏体比差异不显著(P>0.05)。说明大白鼠经30 d口服甘草油，对脏器质量和脏体比无显著的影响。

在大白鼠30 d喂养试验中未见动物健康状况、生化、血液学指标和器官组织形态的异常变化，据此可以初步估计该产品的最大无作用剂量>5.0 g/kg·BW。

3 结论

经过甘草油毒理学试验研究表明，甘草油的半数致死剂量LD50>15.0 g/kg·BW，判属甘草油为无毒类物质。甘草油的最大无作用剂量>5.0 g/kg·BW，为人体推荐摄入量的150倍，因此，甘草油无急性毒性、亚急性毒性和遗传毒性，具有较高的食用安全性。

表5 甘草油对大白鼠血液生化学指标的影响

表6 甘草油对大白鼠脏器质量和脏体比的影响

甘草油中的脂肪酸主要是棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸，其中必需脂肪亚油酸含量高居首位[2]，因此，对甘草油与低油酸油脂进行合理调配，开发高营养价值的调和油，具有广阔的应用前景。