虎尾轮根化学成分及其体外抗肾间质纤维化活性

李 南

（河南中医药大学，河南郑州 450046）

虎尾轮根为豆科兔尾草属植物猫尾射Uraria crinita（L.）Desv.ex DC 的根［1］。主要分布于河南、云南、湖北、广东等省。味甘性温，入肾、肺、胃三经，在民间广泛应用，具有益肾强腰，理气化痰的功效。主治腰背酸痛、遗精、气滞痰饮。《泉州本草》 载有“益肾滋肝，治肾虚遗精”。其主要化学成分为黄酮、香豆素、有机酸、三萜、多糖、甾体类［2-3］。王燕燕等［4］研究表明其具有拮抗肾阳虚小鼠生殖器官萎缩、抗疲劳、增强免疫力、提高小鼠应激能力的作用。为阐明虎尾轮根抗肾间质纤维化的物质基础，寻找抗肾间质纤维化活性天然化合物。本研究对虎尾轮根乙醇提取物的化学成分进行研究，从中分离得到16 个化合物，除化合物3 外，均为首次从虎尾轮根中分离得到。化合物2、4～5、7～8、11～12、14 对肾间质纤维化指标有不同程度的抑制作用。本研究丰富了虎尾轮根化学成分的资源库，以期为后续对其肾间质纤维化的研究提供参考。

1 材料

Bruker AV 400 型核磁共振波谱仪（瑞士Bruker 公司）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia 公司）；OHAUS CP214 型电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；柱色谱硅胶（100～200、300～400 目，青岛海洋化工厂）；GF254薄层硅胶板（青岛海洋化工厂）；UPLC-T5291 型高分辨质谱仪（美国Agilent 公司）；胶原纤维Ⅳ、Ⅲ型前胶原蛋白、层粘连蛋白（美国Gibco 公司）；ZK-31D 型暗箱式紫外分析仪（上海电光仪器厂）；RET1200 型暗箱式紫外分析仪（上海顾村电光仪器有限公司）；ADP440 型旋转蒸发器（英国Bellingham Stanley 公司）；RE-3506A 型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SephadeX LH-20（美国GE Pharmacia 公司）。噻唑蓝（MTT，美国Amresco 公司）；DMEM培养基（美国Gibco 公司）；二甲基亚砜（DMSO，上海阿达玛斯试剂有限公司）；顺铂（上海麦克林试剂公司，批号C18151213）。提取分离所用溶剂均为分析纯。

虎尾轮根采自河南省郑州市，经河南中医药大学赵献敏副教授鉴定为虎尾轮Uraria crinita（L.）Desv.ex DC 的根，标本收藏于河南中医药大学药学院标本室。

2 提取与分离

取干燥虎尾轮根36.4 kg，加入95%乙醇加热回流提取3 次（时间分别为2、2、1 h），提取液混合后，经减压浓缩回收溶剂，得虎尾轮根提取物8.6 kg。将提取物超声溶解与水中，依次用石油醚、二氯甲烷、丙酮、正丁醇萃取，取上述萃取物浓缩得到石油醚部分（Fr.A，273.5 g）、二氯甲烷部分（Fr.B，251.6 g）、丙酮部分（Fr.C，172.4 g）、正丁醇部分（Fr.D，273.5 g）。将Fr.B 用硅胶柱色谱进行分离，以石油醚-乙酸乙酯（100 ∶0～80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80～0 ∶100）梯度洗脱，通过薄层硅胶板分析，合并相同组分，得到Fr.B-1～Fr.B-9。Fr.B-2 过硅胶色谱柱，以石油醚-乙酸乙酯（100 ∶0～60 ∶40～40 ∶60～0 ∶100）梯度洗脱，得到11 个组分Fr.B-2-1～Fr.B-2-11。Fr.B-2-2 经硅胶柱色谱分离得化合物1（16 mg）。Fr.B-2-5 经Sephadex LH-20 分离得到化合物4（26 mg）、8（23 mg）；Fr.B-2-9 经重结晶得到化合物3（29 mg）。Fr.B-7 过硅胶色谱柱，以石油醚-乙酸乙酯（80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80）梯度洗脱，得到9 个组分 Fr.B-7-1～Fr.B-7-9。Fr.B-7-3 经Sephadex LH-20 分离得到化合物2（24 mg）、7（27 mg）；Fr.B-7-5 经重结晶得到化合物11（23 mg）。将Fr.C 用硅胶柱色谱进行分离，以石油醚-乙酸乙酯（80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80）梯度洗脱，通过薄层硅胶板分析，合并相同组分，得到Fr.C-1～Fr.C-11。Fr.C-3 经Sephadex LH-20 反复纯化得化合物5（19 mg）。Fr.C-4 经硅胶色谱柱分离，以二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～70 ∶30～30 ∶70～0 ∶100）梯度洗脱，得到8 个组分Fr.C-4-1～Fr.C-4-8，Fr.C-4-2经硅胶色谱柱分离，以二氯甲烷-甲醇（50 ∶50）洗脱，得化合物 15（22 mg）；Fr.C-4-5 经Sephadex LH-20 分离得化合物14（26 mg）、16（34 mg）。Fr.C-6 经硅胶色谱柱分离，以二氯甲烷甲醇（100 ∶0～70 ∶30～30 ∶70～0 ∶100）梯度洗脱，得到10 个组分Fr.C-6-1～Fr.C-6-10，Fr.C-6-2经硅胶色谱柱分离，以二氯甲烷-甲醇（10 ∶90～90 ∶10）梯度洗脱，得化合物6（22 mg）、10（25 mg）；Fr.C-6-4 经重结晶得化合物9（24 mg）、12（22 mg）；Fr.C-6-7 经Sephadex LH-20 分离得化合物13（32 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：223.4 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.79（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-5′），7.36（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-7′），6.58（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6′），5.06（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1′a），4.39（1H，m，H-5），4.35（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1′e），4.05（2H，q，J ＝8.4 Hz，H-2″），2.42（2H，m，H-3），2.09（2H，m，H-4），1.42（3H，t，J ＝7.5 Hz，H-3″）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：172.6（C-2），29.5（C-3），24.2（C-4），61.6（C-5），49.6（C-1′），179.3（C-2′），148.5（C-3′），151.7（C-5′），114.5（C-6′），122.4（C-7′），169.5（C-1″），63.7（C-2″），14.8（C-3″）。以上数据与文献［5］基本一致，故鉴定为divaricataester A

化合物2：黄色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：296.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：6.95（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2″，6″），6.85（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3），6.68（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-3″，5″），6.08（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-4），4.43（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-1′），4.17（2H，s，H-6），3.52（2H，q，J ＝8.4 Hz，H-7），3.15（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-2′），1.18（3H，t，J ＝8.4 Hz，H-8）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：133.1（C-1），1252.6（C-3），109.7（C-4），140.9（C-5），64.2（C-6），65.4（C-7），14.6（C-8），180.6（C-9），41.3（C-1′），36.8（C-2′），128.6（C-1″），129.7（C-2″），114.2（C-3″），153.1（C-4″），114.2（C-5″），129.7（C-6″）。以上数据与文献［6］基本一致，故鉴定为pyrrolezanthine-6-ethyl ether。

化合物3：无色针晶（甲醇），ESI-MS m／z：443.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.16（d，5-OH），11.17（d，7-OH），6.79（d，J ＝8.4 Hz，H-6′），6.73（d，J ＝8.4 Hz，H-5′），5.97（2H，d，J ＝2.4 Hz，H-6，H-8），5.91（2H，s，-OCH2O-），4.47（dd，J ＝10.2，8.4 Hz，H-2），4.41（dd，J ＝5.6，8.4 Hz，H-2），4.29（dd，J ＝ 10.2，8.4 Hz，H-3），3.39（s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：69.5（C-2），48.1（C-3），196.5（C-4），163.2（C-5），97.1（C-6），167.1（C-7），94.8（C-8），162.7（C-9），102.6（C-10），1119.5（C-1′），140.5（C-2′），138.2（C-3′），150.2（C-4′），100.8（C-5′），124.1（C-6′），101.7（-OCH2O-），60.2（-OCH3）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为5，7-二羟基-2′-甲氧基-3′，4′-亚甲基二氧异黄酮。

化合物4：无色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：235.9 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.24（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-6），8.06（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4），7.12（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3），6.58（1H，s，H-8），4.05（3H，s，2-OCH3），2.57（3H，s，H-2′），2.31（3H，s，H-10），1.95（3H，s，H-11）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：157.2（C-1），129.8（C-2），125.3（C-3），134.5（C-4），129.1（C-5），133.4（C-6），197.3（C-7），110.9（C-8），163.4（C-9），29.1（C-10），26.1（C-11），191.8（C-1′），19.7（C-2′），55.7（-OCH3）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为dehydroespeleton。

化合物5：无色结晶（丙酮），ESI-MS m／z：435.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：5.36（1H，t，J ＝8.4 Hz，H-6），5.08（1H，m，H-11），4.93（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-12），3.48（1H，m，H-3），0.98（3H，d，J ＝8.4 Hz，H-21），0.87（3H，s，H-19），0.79（3H，d，J ＝8.4 Hz，H-26），0.75（3H，d，J ＝2.4 Hz，H-27），0.73（3H，t，J ＝8.4 Hz，H-29），0.72（3H，s，H-18）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：38.2（C-1），32.5（C-2），72.3（C-3），41.7（C-4），141.3（C-5），122.5（C-6），24.9（C-7），51.7（C-8），50.9（C-9），36.2（C-10），130.2（C-11），137.2（C-12），41.6（C-13），57.2（C-14），23.6（C-15），29.1（C-16），55.4（C-17），11.9（C-18），20.3（C-19），35.8（C-20），18.5（C-21），40.6（C-22），26.1（C-23），45.6（C-24），28.7（C-25），20.3（C-26），18.6（C-27），23.1（C-28），11.7（C-29）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为pleuchiol。

化合物6：白色形粉末（甲醇），ESI-MS m／z：373.2 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.13（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2″，6″），8.09（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2′，6′），7.58（2H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4′，4″），7.41（4H，m，H-3′，5′，3″，5″），6.08（2H，m，H-5，6），6.05（1H，ddd，J ＝8.4，2.4，2.4 Hz，H-4），5.73（1H，ddd，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-3），5.08（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7α），5.04（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7β），4.72（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-2）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：134.8（C-1），69.5（C-2），75.3（C-3），123.7（C-4），1249.3（C-5），125.2（C-6），65.1（C-7），130.2（C-1′），130.1（C-2′），129.5（C-3′），132.6（C-4′），129.5（C-5′），130.1（C-6′），167.2（C-7′），129.3（C-1″），130.2（C-2″），129.7（C-3″），132.1（C-4″），129.7（C-5″），130.2（C-6″），167.2（C-7″）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为1，6-desoxypipoxide。

化合物7：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：290.2 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：9.31（1H，s，4′-OH），7.48（2H，d，J ＝8.4 Hz，H-2，6），7.41（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4），7.39（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7′），7.36（2H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-3，5），6.92（2H，d，J ＝2.4 Hz，H-2′，6′），6.72（2H，d，J ＝2.4 Hz，H-3′，5′），6.57（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8′），5.68（1H，s，NH），3.29（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-8），2.72（2H，t，J ＝8.4 Hz，H-7）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：134.3（C-1），128.7（C-2），130.1（C-3），131.6（C-4），130.1（C-5），128.7（C-6），33.6（C-7），39.7（C-8），130.4（C-1′），130.2（C-2′），114.6（C-3′），156.2（C-4′），114.6（C-5′），130.2（C-6′），139.4（C-7′），121.7（C-8′），164.7（C-9′）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为p-coumaroyl-β-phenethylamine。

化合物8：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：483.7 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.51（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7‴），7.12（1H，brs，H-2‴），6.91（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-6‴），6.73（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5‴），6.57（2H，brs，H-2，5），6.49（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6），6.27（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8‴），4.32（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1′），4.18（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-1″），2.72（2H，m，H-7）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：131.2（C-1），117.3（C-2），146.2（C-3），144.5（C-4），115.7（C-5），119.6（C-6），34.8（C-7），69.4（C-8），102.6（C-1′），72.3（C-2′），77.6（C-3′），68.2（C-4′），76.2（C-5′），68.3（C-6′），104.6（C-1″），73.5（C-2″），76.9（C-3″），69.2（C-4″），76.5（C-5″），60.8（C-6″），125.8（C-1‴），115.6（C-2‴），146.1（C-3‴），149.2（C-4‴），117.2（C-5‴），122.3（C-6‴），145.3（C-7‴），114.1（C-8‴），167.3（C-9‴）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为isolugrandoside。

化合物9：黄色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：462.7 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：9.26（1H，brs，7-OH），6.93（1H，d，J ＝10.2 Hz，H-6′），6.72（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），6.61（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3′），6.51（1H，dd，J ＝10.2，2.4 Hz，H-5′），6.31（1H，dd，J ＝8.4，2.5 Hz，H-6），6.20（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-8），4.08（1H，dq，J ＝8.4，2.4 Hz，H-2β），4.02（1H，t，J ＝8.4 Hz，H-2α），3.27（1H，m，H-3α），3.76（3H，s，2′-OCH3），2.75（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4β），3.72（3H，s，-OCH3），2.68（1H，ddd，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-4α）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：70.2（C-2），30.6（C-3），29.8（C-4），128.4（C-5），107.6（C-6），160.2（C-7），103.6（C-8），157.1（C-9），113.7（C-10），119.5（C-1′），155.2（C-2′），99.2（C-3′），158.3（C-4′），105.3（C-5′），128.2（C-6′），55.6（-OCH3），55.1（-OCH3）。以上数据与文献 ［12］基本一致，故鉴定为紫苜蓿烷。

化合物10：无色结晶（丙酮），ESI-MS m／z：295.2 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.41（1H，brs，5-OH），9.83（1H，br s，4′-OH），6.79（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-6′），6.40（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-3′），6.28（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-5′），5.68（2H，brs，H-6，8），4.46（1H，t，J ＝8.4 Hz，H-2α），4.30（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-2β），4.09（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-3β），3.72（3H，s，7-OCH3）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：69.4（C-2），45.2（C-3），196.2（C-4），163.2（C-5），96.5（C-6），163.8（C-7），96.2（C-8），163.4（C-9），100.2（C-10），113.6（C-1′），159.1（C-2′），99.5（C-3′），157.6（C-4′），106.3（C-5′），129.2（C-6′），55.2（-OCH3）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定二氢木豆异黄酮。

化合物11：黄色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：409.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.51（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7），7.40（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-2），7.31（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-2′），7.18（1H，s，H-7′），6.95（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6′），6.92（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6），6.68（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5′），6.62（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），6.51（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：127.6（C-1），108.6（C-2），149.2（C-3），144.2（C-4），112.8（C-5），121.8（C-6），148.3（C-7），117.2（C-8），167.6（C-9），55.4（3-OCH3），123.7（C-1′），113.2（C-2′），147.1（C-3′），139.4（C-4′），115.1（C-5′），124.2（C-6′），148.2（C-7′），139.6（C-8′），165.2（C-9′），55.4（3′-OCH3）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为8-O-4-dehydrodiferulic acid。

化合物12：白色晶体（丙酮），ESI-MS m／z：244.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.22（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-3），6.08（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-4），5.93（1H，dt，J ＝8.4，2.4 Hz，H-5），5.62（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-2），5.51（1H，dqt，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-9），5.41（1H，dtq，J ＝10.2，8.4，2.4 Hz，H-8），3.22（2H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-2′），2.23（4H，m，H-6，7），1.79（1H，seqt，J ＝8.4 Hz，H-3′），1.57（3H，brd，J ＝8.4 Hz，H-10），0.87（6H，d，J ＝8.4 Hz，H-4′，5′）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：165.8（C-1），119.5（C-2），139.7（C-3），129.3（C-4），144.7（C-5），33.4（C-6），29.1（C-7），130.6（C-8），127.3（C-9），13.8（C-10），47.2（C-2′），28.3（C-3′），19.6（C-4′，5′），19.6（C-5′）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为8，9-dehydropellitorine。

化合物13：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：332.1 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.68（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-7），7.57（2H，m，H-2，6），7.35（3H，m，H-3，4，5），6.47（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-8），5.08（d，J ＝8.4 Hz，2.4H，H-α），4.51（d，J ＝8.4 Hz，2.4H，Hβ）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：136.4（C-1），130.8（C-2），132.4（C-3），32.9（C-4），132.4（C-5），130.8（C-6），1147.3（C-7），119.2（C-8），169.1（C-9），99.1（C-1′），75.2（C-2′），78.2（C-3′），71.6（C-4′），75.1（C-5′），64.6（C-6′），93.6（C-1″），75.7（C-2″），74.1（C-3″），69.5（C-4″），72.1（C-5″），64.6（C-6″）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为6-O-（E）-肉桂酰基-α／β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物14：白色粉末（丙酮），ESI-MS m／z：369.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：8.06（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-4），7.60（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），6.79（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-6），6.31（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-4′），6.30（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-3），4.40（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-3′），1.92（6H，s，-COCH3×2），1.38（3H，s，2′-CH3），1.29（3H，s，2′-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：1160.2（C-2），111.5（C-3），145.1（C-4），130.2（C-5），114.2（C-6），157.1（C-7），106.8（C-8），154.2（C-9），111.6（C-10），9.7（-COCH3× 2，-CH3），78.4（C-2′），71.8（C-3′），60.3（C-4′），23.6（-CH3），25.1（-CH3），170.1（-COCH3×2，-C ＝O）。以上数据与文献［16］基本一致，故鉴定为trans-3′，4′-diacetylkhellacton。

化合物15：白色粉末（甲醇），ESI-MS m／z：366.8 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.61（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-6），7.50（1H，d，J ＝2.4 Hz，H-2），7.20（1H，d，J ＝8.4 Hz，H-5），5.02（1H，d，J ＝8.4 Hz，glc-1），3.92（3H，s，3-OCH3），3.79（3H，s，-OCH3），3.61（1H，dd，J ＝8.4，2.4 Hz，H-glc-6a），3.51-3.34（5H，m，H-glc-2，3，4，5，6b）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：126.1（C-1），117.2（C-2），153.1（C-3），149.6（C-4），113.1（C-5），125.0（C-6），169.1（C-7），101.7（Cglc-1），74.8（C-glc-2），79.2（C-glc-3），70.8（C-glc-4），77.5（C-glc-5），61.8（C-glc-6），56.5（3-OCH3），53.2（-OCH3）。以上数据与文献［17］基本一致，故鉴定为3-甲氧基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基苯甲酸甲酯。

化合物16：黄色粉末（甲醇），ESI-MS m／z：476.3 ［M+Na］+。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.62（1H，s，6-OH），8.09（1H，s，H-4），7.43（1H，s，H-3），6.93（1H，s，H-7），2.75（3H，s，H-11），2.62（3H，s，H-13）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6） δ：154.1（C-2），107.4（C-3），126.9（C-4），120.6（C-5），159.6（C-6），99.7（C-7），162.4（C-8），121.6（C-9），203.6（C-10），26.8（C-11），187.5（C-12），25.8（C-13）。以上数据与文献［18］基本一致，故鉴定为euparone。

4 体外抗肾间质纤维化活性筛选

采用MTT 法［19］测试化合物1～16 体外抗肾间质纤维化指标（胶原纤维Ⅳ、Ⅲ型前胶原蛋白，层粘连蛋白）的活性，阳性对照物为顺铂。取胶原纤维Ⅳ、Ⅲ型前胶原蛋白，层粘连蛋白稀释（均分别稀释为20、60、180 μg／mL 3 个质量浓度），每个质量浓度设置3 个复孔，放置于96 孔板中，在37 ℃恒温箱中培养12 h，分别加入化合物 1～ 16（质量浓度分别为 50、150、450 μg／mL），顺铂。在DMEM 培养基中培养48 h后，每孔加入15 μL MTT 溶液染色，继续孵育3.0 h，然后加入500 μL DMSO，混合均匀后，在360 nm 波长处测定吸光度，计算细胞抑制率。采用SPSS 20.0 统计软件，计算目标化合物的IC50值。结果表明化合物5、8 对胶原纤维Ⅳ、Ⅲ型前胶原蛋白，层粘连蛋白具有一定的体外抑制作用。化合物11、14 对胶原纤维Ⅳ、Ⅲ型前胶原蛋白，具有一定的体外抑制作用。化合物2、7 对Ⅲ型前胶原蛋白具有一定的体外抑制作用。化合物4、12对胶原纤维Ⅳ，层粘连蛋白具有一定的体外抑制作用。其他化合物没有明显的体外抗肾间质纤维化活性。见表1。

表1 各化合物体外抗肾间质纤维化IC50值（，μg／mL，n＝3）Tab.1 IC50values of anti-renal interstitial fibrosis for various compounds in vitro（，μg／mL，n＝3）

表1 各化合物体外抗肾间质纤维化IC50值（，μg／mL，n＝3）Tab.1 IC50values of anti-renal interstitial fibrosis for various compounds in vitro（，μg／mL，n＝3）

5 讨论

虎尾轮根为民间常用药，具有广阔的应用前景。本研究从虎尾轮根中分离得到16 个化合物，除化合物3 外，均为首次从虎尾轮根中分离得到，其中化合物1、4、6、7、9、11、15 为首次从兔尾草属植物中分离得到。通过对虎尾轮根体外抗肾间质纤维化活性进行筛选，化合物5、8 对胶原纤维Ⅳ、Ⅲ型前胶原蛋白，层粘连蛋白具有一定的体外抑制作用，化合物2、4、7、11、12、14 对部分肾间质纤维化指标有不同程度的抑制作用。本研究结果丰富了虎尾轮根化学成分的物质基础，表明虎尾轮根具有较大的抗肾间质纤维化开发潜力，以期对抗肾间质纤维化新药的研发提供一定的帮助。