银杏达莫注射液溶血试验方法研究及结果评价

葛丽萍，颜 皓，韩 峰

(内蒙古药品检验研究院，内蒙古 呼和浩特 010010)

中药注射剂是我国医药产业重要的组成部分，其药理药效以及安全性研究越来越受到药学研究人员的重视。银杏达莫注射液为心脑血管扩张药，用于预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病。考虑到中药制剂的成分复杂，尤其一些中药注射剂，由于含有溶血成分或是杂质等，易引起过敏、溶血等严重不良反应。因此，本实验通过两种不同检测方法对其安全性指标进行考察，为保证中药注射剂临床使用安全和制剂质量的可控性提供依据。

1 试验试剂、动物及仪器

1.1 受试检品：银杏达莫注射液

厂家：A制药股份有限公司，B药业股份有限公司，C制药有限公司

规格：5mL，10mL

1.2 试剂：氯化钠注射液，规格：100mL

厂家：青州尧王制药有限公司

1.3 实验动物：家兔

来源：北京市海淀区兴隆实验动物养殖场，合格证编号：SCXK(京)2011-0006。

饲料来源：北京科澳协力饲料有限公司，证号：SCXK(京)2005-0007。

1.4 仪器

UV-2550 紫外分光光度计(厂家：岛津)SKP-01型电热恒温培养箱(厂家：湖北黄石市医疗器械厂)DL-5000型离心机(厂家：菲恰尔)

1.5 实验环境：内蒙古药品检验药检院药理动物实验室

使用许可证号：SYXK(蒙)2011-001

2 实验方法

2.1 体外试管溶血法[1](试管观察法)

2.1.1供试品溶液配制：量取5mL银杏达莫注射液加入至100mL0.9%氯化钠注射液中，摇匀，作为供试品溶液。

2.1.2取兔血，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，离心15分钟，除去上清液，沉淀细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的混悬液，供试验用。

2.1.3取洁净试管7只， 1～5号管为供试品管，6、7号管分别为阴性、阳性对照管。各管依次加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液、纯化水、供试品溶液(见表1)，混匀后，置37℃恒温箱中温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，观察3小时。

表1 试剂加入量

2.1.4结果判断标准

若试验中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或少量红细胞残留，表明有溶血发生；如细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生[1]。

2.1.5试验结果

对94批次银杏达莫注射液进行溶血检验，结论均为合格。

2.2 改进的溶血性试验[2](分光光度法)

2.2.1供试品溶液配制：同1.1。

2.2.2同1.2。

2.2.3取洁净试管12只，进行编号，1～5号管为供试品管，6～10号管为供试品对照管，11、12号为阴性、阳性对照管。按下表所示依次加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液或纯化水、受试物，混匀后，置37℃恒温箱中进行温育3小时。

表2 试剂加入量

2.2.4将上述各管溶液，1100 转/分钟离心5分钟。

2.2.5结合指导原则，以纯化水为空白，选取545nm波长处检测上述各管的吸光度(OD)值。

2.2.6溶血率按照下式进行计算：溶血率=(A供试品试验管-A供试品对照管-A阴性对照管)/(A阳性对照管-A阴性对照管)×100%

2.2.7结果判断标准

溶血率>5%表明有溶血发生。

2.2.8实验结果：见表3。

表3 实验结果

3 结果分析总结

根据溶血率判定标准，上述检测的64批银杏达莫注射液的溶血率均小于5%，全部合格。其中，检测A药业股份有限公司样品28批，占检测总量43.75%；检测B制药股份有限公司样品33批，占检测总量51.56%；检测C制药有限公司样品3批，占检测总量4.69%。检测结果中溶血率≥1%的样品共有37批，其中A药业股份有限公司样品占29.73%；B制药股份有限公司样品占62.16%；C制药有限公司样品占8.57%。

在对94批银杏达莫注射液进行完常规体外试管溶血法(试管观察法)检测后，并得出全部合格的结论后，又从其中选取了64批样品(包括本次抽检的3个厂家及其不同规格的产品)并采取了改进的体外溶血性试验法(分光光度法)进行验证，使得本次银杏达莫注射液的溶血试验检测更为准确，数据更为详实。通过分光光度法检测结果的比较，可以看出，B、C企业产品的溶血偏高的占比较大，存在一定的安全风险，有必要加强产品质量控制。

分光光度法与常规方法比较，操作比较复杂，但可以作为常规方法有效补充，可以更直接准确地反映制剂对血细胞的影响。当采用常规法测定的结果有疑问时，可采用分光光度法作为辅助方法，帮助对结果进行更为精确的判断。