姜荷花组培快繁一次性成苗技术的试验研究

李晓亮 杨世先 董春富 张建康 王文智 杨光炤 钱遵姚 董 广 张军云

（1.玉溪市农业科学院 云南玉溪653100；2. 通海锦海农业科技发展有限公司 云南通海652700）

姜荷花（Curcuma alismatifolia），属于姜科姜黄属的多年生草本植物，是一种热带球根花卉，原产于泰国清迈一带，由于其粉红色的苞片酷似荷花，且为姜科，故称姜荷花。姜荷花的花型独特、花色美丽鲜艳、花期长，深受人们的喜爱，在花卉王国荷兰享有“热带郁金香”的美誉，是一种新型的鲜切花品种，观赏价值高，品质优良，具有很高的经济效益和广阔的开发利用前景[1-4]。

姜荷花的常规繁殖方法主要是通过分株或球根进行繁殖[3-4]，但其存在繁殖速度慢、周期长、系数低、易受自然环境变化影响等问题。利用植物组织培养技术，可以解决姜荷花常规繁殖所面临的问题，达到在短时间内生产出大量的优质种苗的目的。

姜荷花的组织培养在国内已有研究报道，这些报道的技术步骤主要包括：初代培养、增殖培养、生根培养[1-4]。为简化姜荷花的组培流程，降低姜荷花组培生产成本，提高姜荷花的组培效率和质量，对姜荷花组培快繁技术进行试验研究，旨在集成一套姜荷花的组培快繁一次性成苗技术，为姜荷花组培工厂化育苗提供科学技术依据。

1 材料与方法

1.1 试验地点

玉溪市农业科学院研和老基地组培室。

1.2 试验材料

盆栽的姜荷花（花色为白色），材料由玉溪紫玉花卉产业有限公司提供。

1.3 试验时间

2018 年 4月至 2019 年 5月。

1.4 试验方法

1.4.1 外植体选取和预处理 选取生长健壮、无病虫害的盆栽姜荷花植株作为外植体采集的对象；外植体采集前2 周对姜荷花植株停止浇水施药施肥；从花盆中整株取出姜荷花，清除各株球茎部位的基质，在流水下洗净；用小刀削去球茎的外周层约0.5 cm，从球茎顶部1.5～2.0 cm 处截断分离植株，剥离顶部的外苞叶2～3 层。

1.4.2 外植体灭菌 先用洗洁精水浸泡球茎2～3 min，流水冲洗净，放入 2%的高锰酸钾（KMnO4）溶液浸泡5～6 min，将球茎于70%的酒精溶液中消毒30 s，取出球茎后于超净工作台中用升汞（HgCl2）溶液进行灭菌。设置6 个处理：处理1（0.5% HgCl2灭菌20 min）、处理 2 （0.5% HgCl2灭菌 25 min）、处理 3（0.5% HgCl2灭菌 30 min）、处理 4（1.0% HgCl2灭菌20 min）、处理 5 （1.0% HgCl2灭菌 25 min）、处理 6（1.0% HgCl2灭菌 30 min）。

1.4.3 初代培养 将灭菌过的外植体接种入4 种处理的初代培养基，分别为处理1（MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L）、处理 2 （MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L）、处理 3（MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L）、处理 4（MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L），培养时间 35～50 d。

1.4.4 增殖培养 采用1.4.3 初代培养中的4 种培养基进行新生芽的增殖培养。

1.4.5 成苗培养 将培养获得的小芽从其基部上1.5 cm 处切掉顶部，剥离外苞叶 1～2 层后，从顶部中间纵切小芽成两个半芽（若小芽较大，可以进行纵四半切），接种入2 种处理的成苗培养基MS+6-BA 0.4 mg/L+NAA 0.01 mg/L、MS+6-BA0.8 mg/L+NAA 0.01 mg/L，培养时间 30～40 d。

1.4.6 培养条件 培养室温度为（25±2）℃，相对湿度为35%～40%，光强度为2 500～3 000 lx，光照时间为12 h/d。

2 结果与分析

2.1 外植体灭菌

姜荷花的球茎经不同的灭菌处理后，细菌污染率为95.43%～98.25%，死亡率为0，各处理间的差异不显著 （P＞0.05），说明了姜荷花的球茎灭菌比较困难，这可能与球茎长期埋在湿润基质里面有关（表1）。

2.2 初代培养

从表2 可以看出，4 种处理的培养基均能100%诱导姜荷花的球茎进行分化，新生芽的个体形态较好、健壮，每个球茎能诱导出新生芽1.67～3.00 个，各处理间的差异不显著（P＞0.05），说明适合姜荷花初代培养的培养基是MS+6-BA 1.0～2.0 mg/L+NAA 0.2～0.5 mg/L。

表1 姜荷花外植体灭菌效果

表2 不同处理对姜荷花初代培养的影响

2.3 增殖培养

从表3 可以看出，姜荷花的芽经过4 种处理的培养基培养后，新增芽的分化、生长势效果较好、芽较健壮，增殖系数为3.21～4.12，各处理间差异不显著（P＞0.05），说明适合姜荷花增殖培养的培养基是MS+6-BA1.0～2.0 mg/L+NAA0.2～0.5 mg/L。

表3 不同处理对姜荷花增殖培养的影响

2.4 成苗培养

从表4 可以看出，每个半芽经过2 种成苗培养基培养后，能分化长成4.27～4.85 棵高为5.46～5.82 cm、生根率为100%且根系发育较好（生根量3.89～4.01 条、根长 3.52～3.86 cm、根粗 0.59～0.64 mm）的植株，2 种培养基的培养效果差异不显著（P＞0.05），说明适合姜荷花成苗培养的培养基是MS+6-BA0.4～0.8 mg/L+NAA 0.01 mg/L。

表4 不同处理对姜荷花成苗培养的影响

3 结论与讨论

本试验获得了一套姜荷花组培快繁一次性成苗技术体系，具有以下特点：初代培养和增殖培养共用一套培养基，诱导和增殖效果较好；在成苗培养中，将小芽纵二半切或四半切的处理，增殖系数提高了2 倍或4 倍，提高了培养效率；成苗培养实现了一套培养基获得姜荷花的增殖和生根同步进行，省去了单独进行生根阶段的培养，较大地降低了生产成本，缩短了培养周期，提高了姜荷花的组培快繁效率。此套技术体系唯一的缺点是姜荷花的外植体灭菌效果不理想，以后需加强这方面的研究。