ApoE 基因多态性对瑞舒伐他汀疗效的影响*

杜海燕，缪 阳，张 婷，卞海林，王兴科

盐城市第一人民医院药学部，盐城 224000

心血管疾病是我国人群最主要的致死原因之一，其发病率和致死率正在逐年上升，血脂异常正是心血管病最重要的危险因素之一[1]。目前多项大规模临床试验结果一致显示，HMG-CoA 还原酶抑制剂瑞舒伐他汀钙在动脉粥样硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）一级和二级预防中均能显著降低心血管事件（包括心肌梗死、冠心病死亡和缺血性卒中等）危险[2]，其亲和力是其他他汀类药物的4 倍[3]。但也有不少报道[4]指出，瑞舒伐他汀无论是在降低血脂水平、减少临床事件、还是出现不良反应方面,不同个体之间还是存在着不容忽视的差异。影响疗效的因素有很多，目前认为参与药物代谢的酶、转运蛋白、受体和其他药物靶蛋白的遗传多态性，对药物的疗效和不良反应有着很重要的作用，载脂蛋白E（apolipo-protein E，ApoE）基因多态性是其中重要原因之一[5]。

ApoE 是一种由299 个氨基酸残基组成的富含精氨酸的碱性蛋白，主要存在于极低密度脂蛋白（VLDL）、中间密度脂蛋白（IDL）、乳糜微粒（CM）及CM 残粒中，其参与脂蛋白的构成、转化、代谢，是脂类代谢和心血管疾病的决定因子[6]。ApoE 基因具有3 种复等位基因（E2、E3、E4）分别编码产生6 种不同的表型：E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4 和E4/4。本文通过研究血脂异常人群中ApoE 基因多态性的分布及其对瑞舒伐他汀调脂效果的影响，为实现该药个体化用药提供理论依据，为临床合理用药提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2017 年1 月～2019 年6 月住院的血脂异常的患者127 例，其中男性93 名，女性34 名，平均年龄（60.12±9.72）岁。血脂异常诊断标准：根据2016 年制定的《中国成人血脂异常防治指南》[7]，①血清胆固醇（TC）≥6.2 mmol·L-1；②血清甘油三酯（TG）≥2.3 mmol·L-1；③血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）≤1.0 mmol·L-1；④低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）≥4.1 mmol·L-1。符合以上四项之一者，则为血脂异常。近期（一个月内）未服用降血脂药物。排除能引起血脂异常的疾病，如甲状腺功能异常、系统性红斑狼疮、肝癌、胆道疾病、肾脏疾病等。

1.2 仪器和试剂

Fascan 48E 多通道荧光定量分析仪（西安天隆科技有限公司）；AU5800 全自动生化分析仪（贝克曼库尔特公司，美国）。

ApoE 基因测序反应通用试剂盒（批号1906160V004，西安天隆科技有限公司）；总胆固醇测定试剂盒（批号AUZ5625）、甘油三酯测定试剂盒（批号AUZ5693）、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（批号AUZ5660）、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（批号AUZ5661）均为贝克曼库尔特公司产品。

1.3 血脂水平测定

所有患者测定TC、TG、HDL-C、LDL-C 等常规血脂指标，每晚服用瑞舒伐他汀钙片（10 mg/片）1片。服药前及服药12 周后，空腹12 h 后清晨抽取静脉血，检查常规血脂指标。患者用药期间避免合用其他调脂药物或经细胞色素P450 代谢的药物。

1.4 ApoE 基因型的测定

所有患者采集2 mL 静脉外周血，置于EDTA抗凝管中，采用PCR-荧光探针法对血样进行检测。将待测样本加入适量血液基因组试剂，充分混合后离心提取样本DNA。取2 μL 待测样本的基因组DNA、弱阳性对照、空白对照，分别加入装有3 种PCR 反应液的反应管中，将反应管转移到核酸扩增区进行上机检测。将准备好的PCR 反应管放置在仪器样品槽相应位置上，设置仪器扩增相关参数后进行PCR 扩增。反应结束后，根据扩增曲线，划定合适基线和荧光阈值，得到不同通道Ct 值并进行结果判定。

1.5 统计学方法

实验数据采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（）表示，基因型分布是否符合遗传Hardy-Weinberg 平衡及多个样本率之间的比较采用χ2检验，两个样本均数间的比较用t检验，多个样本均数间的比较用单因素方差分析。P＜0.05 为有统计学意义。

2 结果

2.1 ApoE 基因型与等位基因频率分布

127 例血脂异常患者共检出ApoE 2/2 基因型1例（0.79%），E2/3 基因型16 例（12.60%），E3/3 基因型79 例（62.20%），E3/4 基因型29 例（22.83%），E4/4 基因型2 例（1.58%）；E2、E3、E4 3 种等位基因频率分别占比为7.09%、79.92%、12.99%。

χ2检验结果显示，ApoE 各基因型频率实际值与理论值之间差异无统计学意义（χ2=3.051，P=0.692），分布符合Hardy-Weinberg 平衡，说明样本具有群体代表性。

2.2 各基因型患者一般资料的比较

根据ApoE 不同基因型发生血脂异常的风险及服用他汀类药物的疗效将其分为3 组[8，9]，分别为E2组：E2/2+E2/3；E3 组：E3/3；E4 组：E4/4+E3/4。E4 组心血管并发症（高血压、糖尿病、冠心病）患病率最高；但3 组不同的基因型在年龄、体重指数（BMI）及患高血压、糖尿病、冠心病方面无统计学差异（P＞0.05）。见表1。

2.3 各基因型血脂水平的比较

比较3 组不同基因型患者的血脂水平，见表2。E4 组TC、TG 水平显著高于E3 组（P＜0.05）；各组间LDL-C、HDL-C 水平无显著性差异（P＞0.05）。

表1 各基因型血脂异常患者一般资料的比较

表2 各基因型血脂异常患者血脂水平的比较

2.4 瑞舒伐他汀治疗前后各基因型血脂水平的比较

服用瑞舒伐他汀12 周后血脂水平变化可见表3。各基因型TC、TG 及LDL-C 水平均有下降，HDLC 水平均有所提高。瑞舒伐他汀对E3 组的TG 水平降低作用最强（P＜0.05），但TC、LDL-C 及HDL-C水平各组间变化率相比无显著性差异（P＞0.05）。

表3 瑞舒伐他汀治疗前后各基因型血脂异常患者血脂水平的比较

3 讨论

有研究表明，我国人群中E3 等位基因为野生型，分布频率＞80%；E2 和E4 为突变型，分布相对较少，均＜10%[10]。本研究发现，在血脂异常患者中E3 等位基因分布频率达79.92%，与文献报道基本一致。

国内外大量研究表明[11]，ApoE 基因多态性决定了各型ApoE 结构和功能上的差异，其与相应受体的结合能力以及对血脂代谢的影响也存在差异。Shatwan IM 等[8]研究了ApoE 基因型与血脂水平的关系，发现TC、LDL-C 水平高低依次为E4＞E3＞E2。傅倩晰等[12]也认为，E4 等位基因携带者血脂水平显著高于E3 和E2。本研究比较了血脂异常患者各基因型血脂水平，表明E4/4+E3/4 基因型的TC 和TG水平显著高于E3/3（P＜0.05）；此外，血脂异常患者E4 等位基因分布频率（12.99%）略高于文献报道的正常人群（＜10%）[10]，提示这种频率分布的差异可能对血脂异常有一定的影响。

近年来，国内外关于阿托伐他汀钙、氟伐他汀、辛伐他汀等的降脂疗效与ApoE 基因多态性的相关性报道较多，多数研究证实中国人群ApoE 基因多态性与他汀类药物疗效相关，E4 等位基因携带者相对E2 和E3 降脂效果较差[3，13]。本研究表明，瑞舒伐他汀对E3/3 基因型的TG 降低作用最强（P＜0.05），提示瑞舒伐他汀的治疗效果与ApoE 基因多态性存在一定的相关性；但经统计分析发现，各基因型之间的TC、LDL-C 及HDL-C 等指标的变化差异无统计学意义。可能由于基因多态性对血脂水平的影响机制较为复杂，未来还需要大规模的研究加以验证。