液相色谱-串联质谱法测定果蔬中的氟虫腈及其代谢物

赵海涛，王磊，刘会会，周彦成，曹慧慧，王帅

1. 唐山市食品药品综合检验检测中心（唐山 063000）；2. 河北省农产品质量安全检测技术创新中心（唐山 063000）；3. 唐山市功能性农产品产业技术研究院（唐山 063000）

氟虫腈杀虫谱广，具有触杀、胃毒和中度内吸作用，主要用于农作物害虫和动物寄生虫的消杀[1]。其既能防治地下害虫，又能防治地上害虫，被广泛应用于蔬菜、水果病虫害防治。氟虫腈及其代谢物会残留在农作物和土壤表面，通过渗虑、农业径流、雨水洪灾或动物接触，影响和危害环境、生态系统和人类的安全[2]。

GB 2763—2019中氟虫腈的残留量判定以本体计，但现有检测标准分散，本体与代谢物不在同一检测标准内，导致检测过程复杂，结果判定误差大。GB 23200.8—2016《食品安全国家标准水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法》中虽能准确地测出蔬菜、水果中氟虫腈的含量，但未提及其代谢物。且前处理操作步骤繁琐，使用有机试剂毒性强，安全性低[3-5]。

液相色谱-串联质谱法多用于禽蛋、动物肌肉、内脏和蛋制品中氟虫腈及其代谢物残留的检测[6]，但在植物源性食品中同时检测氟虫腈及其代谢物的方法少有提及[7-8]。试验利用液相色谱-串联质谱法对果蔬中氟虫腈及其代谢物残留量同时测定，达到用同一种方法检测本体和代谢物的目的。该方法提高检测工作效率，也使得检测结果更加准确。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

LCMS-8040液相色谱质谱联用仪（配有电喷雾离子源（ESI），日本岛津公司）；氨基固相萃取

1.2 试验方法

1.2.1 标准曲线测定方法

每个浓度的混合标准溶液均进样2 μL，获得相应质量浓度（x，mg/L）对应的色谱峰面积（y），将这些数据进行统计处理，可获得各供试农药的标准曲线及其线性响应情况和相关系数（R）。

1.2.2 精密度测定方法

取空白果蔬样品，添加农药混合标准溶液，加标量为0.01和0.02 mg/kg，每个浓度做6个平行，根据式（1）计算样品精密度。

式中：δRSD为相对标准偏差；S为标准偏差；x为算数平均数；xi为样品测定值；n为样品重复测定次数。

1.2.3 检出限测定方法

即为试验方法的最低检测含量。

1.2.4 回收率测定方法

式中：C0为回收质量浓度，μg/mL；C1为样品添加质量浓度，μg/mL。

1.2.5 样品前处理

样品取可食部分，经切割后采用四分法取样放入搅拌机内打碎，用天平准确称取25.0 g样品，加入乙腈50 mL，放于高速匀浆机内，匀浆提取2 min，转入柱（北京迪马科技有限公司）；T25均质器（IKA公司）；TTL-DC Ⅱ型氮吹仪（北京同泰联科技发展有限公司）；SZ13022-NY 0.2 μm有机滤膜（天津市领航实验设备股份有限公司）；GM-K06格明加热破壁料理机（格明电器实业有限公司）；T-200电子天平（常熟双杰仪器制造厂）；PDI超纯水器（上海和泰仪器有限公司）。

1.1.2 试剂与材料

标准品氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈（购于农业部环境保护科研监测所）；乙腈、二氯甲烷、甲醇（均为色谱纯）；氯化钠（分析纯，购于MREDA公司）；0.05%甲酸溶液；5 mmol/L甲酸铵溶液；蒸馏水（屈臣氏）；果蔬样品为番茄、黄瓜、韭菜、马铃薯、西瓜、苹果、橙子（唐山市批发市场）。

1.1.3 标准溶液的配制

混合标准储备液：分别吸取100 μ L质量浓度1 000μg/mL氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈标准品，用甲醇定容至10 mL，得到质量浓度10 μg/mL混合标准溶液，于4 ℃冰箱内保存。

混合标准工作溶液：用甲醇逐级稀释成质量浓度分别为0.01，0.02，0.04，0.08，0.12，0.16和0.32 μg/mL的混合标准溶液，于4 ℃冰箱内保存。到100 mL装有6.0 g氯化钠的具塞量筒中（氯化钠量以足量饱和即可），剧烈振荡约30 s，在室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。

净化：从乙腈层中吸取10.0 mL溶液放入10 mL刻度试管中，在80 ℃氮吹仪上缓慢吹至近干，加2 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）定容，在漩涡振荡仪上振荡30 s，取氨基固相萃取柱，用3 mL淋洗液淋洗柱子，加2 mL样品于柱内，用12 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）分3次洗脱试管，收集洗液，在50 ℃氮吹仪上缓慢吹到近干，用2 mL甲醇定容，定容后液体过0.22 μm有机滤膜，装入进样小瓶待测。

1.2.6 加标回收试验

在样品中分别添加氟虫腈及其代谢物，添加浓度分别为0.01和0.02 mg/kg，每个添加水平重复6次。

1.3 色谱条件

色谱柱Phenomenex H18（50 mm×3.00 mm，2.60 μm）；柱温40 ℃；流速0.40 mL/min；进样量2 μL；流动相采用A相5 mmol/L甲酸铵+0.05%甲酸水溶液、B相纯甲醇；洗脱程序梯度洗脱见表1。

表1 梯度洗脱程序

1.4 质谱条件

电喷雾离子源（ESI）；雾化气流量3.00 L/min；干燥气流量15.00 L/min；DL管温度250 ℃；氟虫腈采用负电离模式，其他质谱条件见表2。

表2 方法的质谱参数

2 结果与讨论

2.1 液相色谱条件的优化

比对流动相为甲醇和乙腈，以及介质为甲醇和乙腈的情况。由图1和图2可知，当流动相为甲醇时，氟虫腈及其代谢物峰形较好，基线稳定。

由表3可知，当流动相为甲醇、介质为甲醇时，除氟虫腈硫醚外，其余氟虫腈及其代谢物响应值均较高。因此，综合考虑选用甲醇作为流动相和介质。

图1 氟虫腈和氟虫腈砜谱图

图2 氟虫腈硫醚和氟甲腈谱图

表3 不同流动相、不同介质氟虫腈及其代谢物响应值

2.2 方法的线性关系、回收率、精密度及检出限

2.2.1 方法的线性关系

根据1.2.1中标准曲线测定公式可得出4种农药的线性方程，见图3～图6。

图3 氟虫腈标准曲线图

图4 氟虫腈砜标准曲线图

图5 氟虫腈硫醚标准曲线图

图6 氟甲腈标准曲线图

2.2.2 样品回收率、精密度和检出限

取空白果蔬样品，添加农药混合标准溶液，加标量为0.01和0.02 mg/kg，每个浓度重复6次。结果见表4和表5。氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚和氟甲腈在水果（西瓜、苹果和橙子）中平均回收率为81.67%～117.67%，相对标准偏差（δRSD）为0.31%～8.78%；在蔬菜（番茄、黄瓜、马铃薯和韭菜）中平均回收率为81.00%～97.33%，相对标准偏差（δRSD）为0.30%～8.43%。结果表明重现性均较好，方法准确可靠。

表4 水果样品的回收率、精密度和检出限

表5 蔬菜样品的回收率、精密度和检出限

2.3 方法应用

2017—2019年从市场采集283份果蔬样品进行氟虫腈及其代谢物添加回收试验，δRSD值均小于10%，回收率均在70%～120%之间，符合检测要求。

3 结论

试验建立液相色谱串联质谱法测定果蔬中氟虫腈及其代谢物的方法。样品前处理操作简便、快速，提高检测工作的效率，保证定性及定量结果的准确性。为本体和代谢物检测方法分散、判定结果以本体计的农药检测提供技术支撑。结果经多次验证，方法精密度、准确度高，线性关系好，定量下限低于国家农药残留限量标准，能够满足国家对蔬菜、水果中氟虫腈及其代谢物大规模的筛查和定量分析。