胶体金免疫层析技术在动物疫病诊断中的应用

周孝明，张延涛

（1. 烟台市园林建设养护中心，山东 烟台 264009；2. 青岛市即墨区温泉街道办事处，山东 青岛 266200）

胶体金在抗原抗体反应中用作示踪剂，用于白磷，硼氢化钠，乙醇，过氧化氢，抗坏血酸，柠檬酸钠，单宁酸。胶体金可以直接制备，这种方法处理的玻璃器皿不需要硅化。还可以在玻璃器皿的表面上用相同粒径的金溶液涂覆玻璃，然后丢弃，然后清洗2 次。使用前应使用蒸馏水，这样效果更好，因为它减少了金颗粒的吸附。

1 层析技术

沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合使用直接免疫，细胞化学检测沙门氏菌的表面抗原，为胶体金标记技术在免疫分析中的应用指明了方向。在过去的30 年中，免疫胶体金快速诊断技术已广泛用于人类医学和其他领域的临床试验中，例如妊娠试验、感染等，鼠疫耶尔森氏菌的快速诊断技术也已广泛应用于人类医学领域。GICA 是一种简单而快速的检测方法。无需复杂的操作技术和专用设备，结果可由肉眼判断。灵敏度高，无污染，携带方便。与其他检测技术相比，胶体金快速检测技术的应用不需要对样品和试剂进行特殊处理。体积很小，样本量可低至1-2mL，可长期用于抗原检测、抗体检测和检测结果的保存。这项新兴技术已成为医学方面临床快速诊断领域的一个全新的方向，并在很多科技发达国家中广泛应用。

2 反应模式

以最常用的双抗体夹心试验AIV 为例，阐述了胶体金免疫层析法的反应原理。首先，将两种病原体抗体包被在NC膜上并用胶体金标记。导致质量控制线上的胶体金染色，并获得了阳性结果。当检测产物中无致病菌时，胶体金标记抗体不能通过病原体与检测线连接，不能与兔抗小鼠多克隆抗体连接。人体结合后，胶体金标记抗体中具有小鼠抗原性的单克隆抗体可以连接到质量控制材料，结果是负面的。如果测试线和质量控制线未着色，则说明测试条不合格。

3 在动物诊断中的应用

程安春等应用银加强胶体金探针检测减蛋下降综合症的应用研究。病毒抗原的最低可检测量为0.11719g/ mL，其实验结果表明，CPV 在卵巢、输卵管峡部、喉和软壳卵中的阳性率分别为100%和92%，对纯化的犬细小病毒单克隆抗体进行了标记和纯化。将犬细小病毒多克隆抗体喷涂在玻璃纤维膜上，用于犬细小病毒抗原的快速诊断。保存6 个月后，测试结果的可重复性为100%。用胶体金标记经典猪瘟病毒抗原，用双抗原夹心法建立经典猪瘟病毒对抗体检测免疫的特征，并分析试纸条。与兰州兽医学院的间接血凝试剂相比，通过间接血凝和IDEXX 实验室检测三种方法对不同养猪场收集的20 例可疑病例的符合率均在98%以上。该方法简单，灵敏。具体来说，它可以区分强感染和弱感染，适合于猪瘟的临床诊断。结果表明，试纸条与血凝抑制试验一致，与琼脂糖凝结一致。凝胶扩散是一致的，并且比测试具有更高的一致性和灵敏度。该方法适用于抗体检测和胶体金免疫层析分析。当试纸用于交叉测试时，其他无关疾病的阳性血清为阴性。唐景峰等使用胶体金标记的单克隆抗体治疗布鲁氏菌病，多克隆抗体用作检测线上的捕获抗体。 PCR 的符合率为100%。近年来，关于细菌性疾病（例如支原体和霍乱）的诊断性测试纸越来越多，其中一些已广泛用于基础兽医学。王艳华等利用胶体金标记弓形虫的分泌抗原，并制备了胶体金免疫检测条用于弓形体抗体的检测。 I 法和ha 法的重合率为82.5%，高于IHA 法。

4 结束语

本文介绍胶体金免疫层析技术在减蛋综合症、犬细小病毒、猪瘟等病诊断中的应用，提供了对应的预防技术，以及疾病诊断和动物疾病监测与预防支持，其中一些已在基层兽医站得到推广。