HPV E6/E7 mRNA结合HPV L1衣壳蛋白检测诊断子宫颈癌前病变的临床意义

高坤

子宫颈上皮不典型增生（CIN）属癌前病变，发病原因与人乳头瘤病毒（HPV）感染、性伴侣较多等因素相关，尽早诊断治疗，对阻断病情发展、改善预后具积极意义[1-2]。HPV E6/E7与细胞结合产物，可改变细胞周期循环，影响基因组稳定性，引发宫颈上皮细胞永生化，属HPV早期开放读码框架，因此在对子宫颈癌前病变诊断中，可通过HPV E6/E7 mRNA 检查诊断[3]。HPV L1 衣壳蛋白表达与HPV复制过程相关，属晚期读码框，与L2基因编码的次要衣壳蛋白共同组成HPV衣壳。相关研究表示，在对子宫颈癌前病变诊断中，HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白均具良好诊断价值，且两者联合后可进一步提升诊断质量[4]。为此，本次研究选泰安市妇幼保健院2019年1月-2020年12月HPV DNA阳性样本94例，探究以上两种诊断办法单独、联合诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选泰安市妇幼保健院2019年1月-2020年12月宫颈液基薄层细胞学检查（TCT）HPV DNA阳性患者94例为研究对象，根据组织细胞学检查结果将其设为观察组（宫颈上皮内瘤变，n=84）、对照组（正常宫颈，n=10）；其中观察组包括CIN1（n=31）、CIN2（n=29）、CIN3（n=24）。纳入标准：精神状态正常，可配合完成检查；取样理想，可有效完成检查。排除标准：输卵管癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤患者；近期妊娠史；宫颈手术史；免疫系统疾病、长期糖皮质激素治疗史。患者知情同意本研究，研究获得伦理委员会批准。

1.2 方法

HPV E6/E7 mRNA 检测：应用分支链 DNA 技术，将TCT样本进行定量检测；样本常规包埋切片，脱蜡后使用刀片刮下组织后放入离心管，加入裂解液，在65 ℃环境下反应1 h。依据试剂盒说明书进行杂交捕获mRNA，信号放大，标记荧光物质的发光底物，经计算机自动判定结果。

HPV L1衣壳蛋白检测：宫颈病理组织包埋切片、抗原修复，加3% H2O2消除内源性过氧化物酶活性，血清封闭，加HPV L1衣壳蛋白抗体，抗体浓度为1∶200；过夜，加二抗（山羊抗鼠），清洗，DAB、苏木素处理，梯度酒精脱水，二甲苯透明处理，最后使用中性树胶封片，镜下观察。镜下见1个细胞红染即为阳性。

1.3 观察指标及诊断标准

以组织细胞学结果为金标准，比较HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白对样本单独、联合诊断结果；联合诊断两者其中一方为阳性，即判断为联合阳性。

1.4 统计学处理

本研究数据采用SPSS 17.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，多组间比较采用方差分析，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组年龄、体质量指数（BMI）、分娩次数比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组一般资料比较（±s）

表1 两组一般资料比较（±s）

分娩次数（次）组别 年龄（岁）BMI（kg/m2）对照组（n=10） 38.10±6.24 24.70±2.96 0.96±0.24观察组 CIN1（n=31） 38.97±5.40 24.76±1.75 1.11±0.20 CIN2（n=29） 38.76±6.33 25.00±2.34 1.08±0.19 CIN3（n=24） 38.02±5.41 25.49±2.40 1.16±0.31 F值 0.154 0.554 1.801 P值 0.927 0.647 0.153

2.2 两组 HPV E6/E7 mRNA 阳性检出率

观 察 组 HPV E6/E7 mRNA 总 阳性 检出 率为67.86%（57/84），较对照组的20.00%（2/10）高，差异有统计学意义（P＜0.05）；其中CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率均较对照组高，且三组阳性检出率呈现逐渐上升趋势，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组HPV E6/E7 mRNA阳性检出率比较

2.3 两组HPV L1衣壳蛋白阳性检出率

观察组HPV L1衣壳蛋白阳性检出率为35.71%（30/84），较对照组的10.00%（1/10）高，差异有统计学意义（P＜0.05），CIN1中 HPV L1衣壳蛋白阳性检出率较对照组高，且CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率呈现逐渐下降趋势，差异有统计学意义（P＜0.05），见表 3。

表3 两组HPV L1衣壳蛋白阳性检出率比较

2.4 不同检测方式的诊断价值比较

HPV E6/E7 mRNA+HPV L1 衣 壳 蛋 白 联 合 诊断的准确度、灵敏度分别为82.98%、82.14%，较HPV E6/E7 mRNA（69.15%、67.86%）、HPV L1 衣壳蛋白（41.49%、35.71%）单独检验高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 不同检测方式的诊断价值比较（%）

3 讨论

HPV感染为子宫颈癌主要发病因素，可诱导宫颈上皮细胞非典型增生，并逐渐诱发子宫颈癌，威胁女性生命安全。HPV DNA检查为子宫颈癌前病变主要检查方式，有效提升诊断敏感性，多与TCT联合应用，可显著提升诊断准确性，但诊断费用较高[5]。HPV E6/E7编码的E6、E7蛋白为引起宫颈上皮细胞永生化主要基因，使宫颈癌前病变向子宫颈癌进展，因此在对子宫颈癌前病变诊断中，以HPV E6/E7 mRNA为标志物的检查在临床应用频率逐渐增高[6]。相关研究表示，在对早期子宫颈癌及癌前病变诊断中，应用HPV E6/E7诊断灵敏度较好，其水平增高提示肿瘤细胞增殖分裂速度增快，处于疾病进展期[7]；同时此种诊断方式也可用于低危HPV随访观察，对早期发现、治疗宫颈癌前病变具积极意义[8]。本次研究中，对所有患者均进行HPV E6/E7 mRNA检测，结果发现，与正常宫颈组织相比，子宫颈癌前病变患者HPV E6/E7 mRNA阳性检出率显著升高，且CIN1、CIN2、CIN3阳性检出率呈现逐渐上升趋势（P＜0.05），证实HPV E6/E7 mRNA对子宫颈癌变进展评估、诊断价值。

HPV L1衣壳蛋白能够反映病毒复制状态，为免疫反应攻击病毒感染细胞主要靶位，可与T细胞、主要组织相容性复合物形成免疫复合物，激活机体免疫反应，而加强子宫颈自愈倾向[9]。HPV DNA与宿主染色体整合后，病毒DNA基因在激活状态下不断表达，阻断上皮细胞成熟过程，病毒无法完成完整生活周期，HPV L1衣壳蛋白表达逐渐消失，机体无法有效刺激免疫反应，发生免疫逃逸，最终引发宫颈癌变进展[10]。本次研究结果发现，与对照组相比，观察组HPV L1阳性检出率显著较高，且CIN1组HPV L1衣壳蛋白阳性检出率较对照组高（P＜0.05），可说明，HPV L1衣壳蛋白水平升高，提示病毒DNA表达速度加快，HPV L1衣壳蛋白可用于子宫颈癌前病变诊断。

本次研究中，对94例患者进行HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白单独及联合诊断，结果发现，HPV E6/E7 mRNA+HPV L1 衣壳蛋白诊断准确度、灵敏度分别为82.98%、82.14%，较两者单独检验高（P＜0.05），考虑原因为，在单纯应用HPV E6/E7 mRNA诊断中，因早期疾病进展时，病毒增殖分裂速度相对较慢，可能会影响HPV E6/E7 mRNA阳性检出率，因此对早期子宫颈癌前病变诊断敏感性较低[11]；部分患者合并HPV感染，但未发生细胞组织病变时，会出现HPV E6/E7 mRNA阳性情况，可能会出现误诊情况[12-13]；单独使用HPV L1衣壳蛋白诊断时，在CIN2、CIN3级癌前病变诊断中阳性检出率偏低，难以满足临床诊断效率[14]；而两者联合诊断后，可满足子宫颈癌前病变各个阶段病变检出情况，实现两种诊断方式优势互补，因此两者联合后可提升诊断准确度及敏感度。叶建红等[15]在对127例HPV DNA阳性样本研究中发现，HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣壳蛋白联合诊断后，特异度显著提升（87.50% vs 75.00% vs 62.50%），说明联合诊断后可提升诊断效果，减少误诊率，但本次研究其单独诊断、联合诊断特异度无显著差异，与本次研究不一致，考虑原因可能与本次阴性样本数量较少、患者疾病特征差异性等因素有关。

综上，对子宫颈癌前病变诊断中，随病症进展，HPV E6/E7 mRNA 阳性检出率逐渐上升，HPV L1 衣壳蛋白阳性检出率逐渐下降；两种诊断办法联合可提升诊断准确度及灵敏度。