耿祥飞 王 鹏 刘鹏杰 王树新
(1. 北京莱艾特科技发展有限公司,北京 100193)(2. 中国科学院微生物研究所,北京 100101)(3. 北京兰博泰斯生物科技有限公司,北京 100193)(4. 苏州猴皇动物实验设备科技有限公司,苏州 215143)
依据国家标准,SPF级小鼠应饲养于屏障设施中,而且对屏障设施中的温度、相对湿度、换气次数、空气洁净度、菌落数、压差、噪音等技术指标及饲养笼具均有要求。目前,常用的小鼠饲养笼具有两种,即:1 敞开式平板架(以房间为独立单元);2密闭式笼具(以独立笼盒为饲养单元)。其中,密闭式笼具有中央排气通风笼盒系统(Exhaust Ventilation central Cages,简称EVC)和独立通气笼盒系统(Individual Ventilated Cages,简称IVC)等[1]。
EVC主机顶端的风机将笼盒内的废气从排气口经过滤器排出,连接机架排风管道与屏障环境内的中央排气通风系统进行排风,并将清洁空气从饲养笼盒的进气口过滤后送入每个笼盒内。并且,饲养笼盒形成微负压,相互独立且无交叉污染,可适用于饲养SPF级实验动物[2]。IVC由送风机经过初级、高效过滤器向饲养笼盒内送入清洁空气,再由排风机将笼盒内的空气排放出去,形成一送一排的空气流通过程。通过调节送、排风量,可使饲养笼盒内形成微正压或微负压。笼盒相互独立、无交叉污染,适用于饲养SPF级实验动物[3]。综上所述,EVC和IVC属于同一类饲养笼具[4-5],但表现形式存在一定的差异[6]。本文将对EVC和IVC的相关参数进行对比,为饲养实验动物笼具选择提供相关的数据支持。
1.1.1实验动物:SPF级小鼠,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,实验动物生产许可证号:SCXK(京)2019-0010,温度20~25 ℃,相对湿度40%~70%,明暗交替12 h/12 h。
1.1.2受试笼具:EVC和IVC购自苏州猴皇动物实验设备科技有限公司。
1.1.3测试仪器设备:便携式氨气检测仪(ADKS-1-NH3)购自EDKORS,希玛照度计(AS803)和希玛风速风量测试仪(AS8556)购自东莞万创电子制品有限公司,温湿度计(TH604F)购自广东美德时仪器仪表有限公司,噪音测试仪(DSM D2),购自中国德力西控股集团等。
分别比较EVC和IVC以下5方面指标:
(1)饲养空间:如笼架占地面积和空间等;(2)使用操作流程:换笼流程、清洗流程、损坏率、整体消毒清洁流程等;(3)小鼠饲养环境:换气次数和风速、氨浓度、噪音及笼盒内噪音分贝;(4)断电或机械故障;(5)报警系统。
EVC和IVC的共同点:独立通气系统,具有良好的隔离防护功能,确保笼盒与笼盒、系统与环境之间的有效隔离,避免交叉污染。笼盒都采用PPSU(聚亚苯基砜树脂)材质,耐高温高压。
氨气检测结果见图1所示,其它指标具体检测结果见表1所列。
图1 IVC和EVC氨浓度对比
表1 EVC和IVC系统检测结果
饲养空间: EVC小鼠笼架的占地面积约1 000×1 000(mm),100笼;IVC小鼠笼架采用固定式长方形笼架,一般采用主机1拖N的形式,其中主机尺寸380 × 550(mm),笼架(7笼/层×8层=56笼)尺寸1 400×500(mm),因此,相同空间EVC的饲养量至少是IVC的两倍,即:饲养相同数量的小鼠,EVC可节省一半以上的空间,并节约建设屏障设施的巨大投资[8]。
换笼流程:IVC笼盒由底盒、不锈钢网盖、笼盒盖及水瓶组成,笼盒盖后端设有塑料进、排气阀门,顶部设有生命窗口,前后设有外拨式搭扣用于固定底盒与盒盖以及外置式水瓶。换笼流程:取下水瓶→打开笼盒盖→移开不锈钢网盖→抓取小鼠→盖上不锈钢网盖加料→盖上笼盒盖→放入水瓶,共7个分解动作。EVC笼盒由底盒、不锈钢料槽、笼盒盖及水瓶组成,底盒前后设有进排气过滤器,笼盒盖左右两侧设有卡扣用于固定底盒和盒盖以及内置式水瓶。换笼流程:打开笼盒盖→抓取小鼠→更换水瓶→加料→盖上笼盒盖,共5个分解动作。
清洗:IVC底盒、网盖及水瓶直接清洗,而笼盒盖需要拆下生命窗口滤材清洗。EVC笼盒盖、料槽、水瓶直接清洗,底盒含滤膜也可以独立整体清洗[4, 9]。
损坏率:EVC笼盒取放时,接触点为排气口的过滤器(由不锈钢和过滤棉组成),结实耐用、不易损坏,周损坏率在6%左右,比IVC低一倍以上。IVC笼盒在取放时,须与笼架上的进、排气口阀门接触,但笼盒盖后端的塑料进、排气阀门在使用中易损坏,生命窗口滤材耗损相当严重(13%/周),更换频率高。
整体消毒与清洁:EVC笼架由底盘、旋转转盘、柱子及顶置主机组成,底盘、顶置主机及柱子表面平整,旋转转盘上下间距大及排风口也较大,清洗方便[9-10]。IVC笼架是由架框和若干根送排气管道焊接而成,与总送、排气管道汇总连接,结构复杂。尤其是笼架后侧,清洗费时费力,擦拭时还容易划破手套,进、排风口口径很小,清洗需使用很细的试管刷[9,11]。
空气洁净度:EVC和IVC的新风均是采用饲养间新风,洁净度标准为10 000级。EVC再次过滤空气的保障是笼盒上的亚高效过滤器,而IVC系统的再次过滤保障是主机内的初高效二级过滤。与EVC比较,IVC系统更加严格。针对于屏障设施的管理要求,进入屏障设施的所有人员、物品均需严格控制,因此洁净度问题还受到人员的管理与垫料、饲料、饮水等配套物品的是否灭菌的影响。
换气次数和风速:换气次数高,形成更大的气流(风速),会让动物迅速失水,并有吹冷风的感觉[12],不利于小鼠健康(国标规定风速小于0.2 m/s[7])。EVC和IVC均可根据笼架上实时饲养笼盒的数量,设定的换气次数,笼盒内风速控制在国标规定的风速内。
氨浓度:分别进行两次连续6 d笼盒内氨气浓度检测。EVC和IVC分别放置10笼小鼠,每笼5只,且房间检测面积均为12.75 m2。两次检测的前4 d,EVC饲养笼盒内的氨气浓度都处于较低水平,但在第5天开始出现较高氨气浓度,接近国标14 mg/m3;IVC在饲养到第三天时,笼盒内能闻到明显氨气,说明浓度已经很高,第4天就超过了国标要求的最低标准[13-14]。IVC在换气次数高的前提下,笼盒内的氨浓度反而比EVC高,说明笼盒内空气流动不均匀,换气不完全。因此,与IVC系统比较, EVC系统的房间内氨浓度会更低。
噪音:EVC笼盒内61.5~63.7 db,IVC笼盒51~59 db。噪音主要是屏障系统本身形成,且IVC笼盒内隔音效果比EVC好。
断电或机械故障:EVC排风口径较大且中央排风管整体向上,具有烟囱效应。即使在电力故障时,系统在烟囱效应下,仍可继续工作, 48 h内动物不会窒息死亡[15]。IVC风管口径较小且结构复杂,一经断电或机械故障,需要额外备用电源来维持风机正常运行以保证笼盒内正常换气,否则需要打开笼盒盖的生命窗口进行换气。因此,在遇到断电或机械故障时,EVC换气更优。
报警系统:EVC和IVC均装有独立的报警系统。报警系统主机上都有独立显示屏,显示小鼠笼盒内压差及温、湿度,一旦超过设定的标准值,系统就会发出报警信号到管理者手机上[2]。
综上,根据上述参数比较,可知在屏障设施中,使用EVC系统更加节能、环保且绿色的优化方案。