橙皮苷对肉仔鸡生长性能、肌肉品质及肠道形态结构的影响

杨 季 王思博 鲁茗源 朱允慧 许 丽

(东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨150030)

鸡肉作为重要的动物蛋白质来源越来越引起人们的重视，其中肌肉的颜色、嫩度和口味等都会影响消费者的购物欲望，但在家禽养殖、运输及储存等各个环节均易致使其氧化应激，从而引起肉制品质量下降[1]。过去10年中人们发现，黄酮类化合物作为天然抗氧化剂可以通过清除氧自由基缓解氧化应激达到改善肉质并延长货架期的效果，且不会在产品或环境中残留[2-3]，黄酮类化合物还可以通过对小肠上皮细胞中Notch信号相关基因的表达及分泌细胞和吸收细胞之间动态平衡的调控来调节其增殖分化，进而促进肠道发育[4-5]。橙皮苷(HSD)也被称为生物类黄酮，广泛存在于柑橘类水果中，具有抗炎、抗氧化、诱导肿瘤细胞的凋亡、减少肿瘤细胞的物质代谢等多种生物活性[6]，还能够促进胃肠蠕动，加快食物消化，提高饲料利用率[7]。据统计，中国是世界上柑橘种植面积和产量最大的国家，而每年实际产生的柑橘皮渣约50万t，但大部分遭到废弃[8]，所以合理使用柑橘提取HSD可以解决柑橘皮渣的资源利用问题，并为开发利用新的饲料原料提供思路。Simitzis等[9]发现在肉鸡饲粮中添加1.5和3.0 g/kg的HSD对肉仔鸡的末重与平均日增重(ADG)有提高趋势，但差异不显著；王海良等[10]发现在1～21日龄肉鸡饲粮中添加50和150 g/t的HSD可显著提高饲料转化率，添加100 g/t HSD可显著提高22～42日龄的饲料转化率。目前关于HSD在畜牧生产上的研究相对较少，在家禽生产上的应用效果也不尽相同，以及HSD对家禽的肉品质和肠道形态是否存在影响也未见统一的报道，使HSD在畜牧生产上得不到足够的重视，但其具有良好的生物活性，是一种值得开发应用的饲料添加剂产品。因此，本试验在基础饲粮中采用梯度添加HSD的方法，通过探究HSD对肉仔鸡的生长性能、肉品质、肌肉抗氧化及肠道发育的影响，旨在为HSD在肉鸡生产中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计

采用单因子完全随机试验设计，选取健康的、体重相近的1日龄爱拔益加(AA)肉鸡公雏288只，随机分为4组，每组6个重复，每个重复12只。饲粮中HSD(购自陕西某高科实业有限公司，实测值78.19%)的添加水平分别为0(对照组)、50(HSD 50组)、100(HSD 100组)和150 mg/kg(HSD 150组)。试验期42 d。根据《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制不添加HSD的基础饲粮，并根据《中国饲料成分及营养价值表》(2018年第29版)计算营养水平，基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.2 饲养管理

试验鸡1～2日龄，温度控制在33～35 ℃，1周龄内，温度控制在30～32 ℃，之后每周降低2 ℃，但不得低于24 ℃。试验过程中自由采食和饮水，24 h光照，并按照《AA肉仔鸡饲养管理指南》防疫和消毒，于每天08:00和17:00清扫卫生，记录鸡舍温度、湿度和死淘鸡数。

1.3 测定指标与方法

1.3.1 生长性能

分别于1、21和42日龄时，以重复为单位，早上空腹称重，前1晚断粮不断水，每周以重复为单位回称饲粮，计算肉仔鸡平均体重、ADG、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。

1.3.2 肉品质

在42日龄时，每重复取1只接近平均体重的肉仔鸡，颈部放血屠宰，分离左侧胸肌和腿肌，用作肉质和营养成分测定。测定指标包括pH(Sartorius PB-10 pH酸度计，德国)、系水力(滴水损失和蒸煮损失)、剪切力(东北农业大学工程学院研制，传感器最大负荷250 N，剪切速度5 mm/s)、肌肉色泽(CR-400型色差仪，日本)及水分(DHG-9140A 型电热恒温鼓风干燥箱，上海)、粗脂肪(ANKOM XT15i全自动脂肪提取仪，美国)和粗蛋白质含量(FOSS 2300全自动定氮仪，瑞典)。

1.3.3 肌肉抗氧化

在42日龄时，每重复取1只接近平均体重的肉仔鸡，颈部放血屠宰，分离右侧胸肌和腿肌，用来测定肌肉中的总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)含量，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3.4 肠道形态结构

分别于21和42日龄时，每重复随机挑选1只鸡，宰杀后取空肠1 cm，用10%的甲醛溶液固定后，经过石蜡包埋，常规苏木精-伊红(HE)染色后，在光学显微镜(moticam3 000显微摄影成像系统，美国)100倍下成片，采用Motic images advanced 3.2病理图像分析系统测定绒毛高度和隐窝深度，并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)，每个视野中取3个数据的平均值。

1.4 数据处理

分别采用SPSS 25.0统计软件中的单因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法对数据进行方差分析和多重比较，用曲线估计(curve estimation)来检验HSD的添加水平与相应指标的线性和二次回归效应，P<0.05为差异显著或者回归关系显著，0.05≤P<0.10为差异或回归关系趋于显著。

2 结 果

2.1 HSD对肉仔鸡生长性能的影响

由表2可知，在1～21日龄时，HSD添加组与对照组的BW、ADFI、ADG和F/G均无显著差异(P>0.05)。在22～42日龄时，各HSD添加组的BW和ADG均显著高于对照组(P<0.05)，F/G显著低于对照组(P<0.05)，且随着HSD添加水平的提高均呈线性和二次曲线变化(P<0.05)。在1～42日龄，各HSD添加组与对照组的ADFI无显著差异(P>0.05)，ADG显著高于对照组(P<0.05)，F/G显著低于对照组(P<0.05)，且ADG和F/G均与HSD的添加水平存在线性和二次曲线关系(P<0.05)。

2.2 HSD对肉仔鸡肌肉品质的影响

由表3可知，饲粮添加不同水平HSD对肌肉的系水力及胸肌的剪切力无显著影响(P>0.05)。腿肌的剪切力随HSD添加水平的提高呈线性和二次曲线变化(P<0.05)，其中HSD 50组及HSD 100组剪切力显著低于对照组(P<0.05)。饲粮中添加HSD对屠宰45 min后肉鸡肌肉中亮度(L*)、红度(a*)和黄度(b*)值和屠宰24 h后胸肌的a*和b*值无显著影响(P>0.05)；与对照组相比，屠宰24 h后胸肌的各HSD添加组L*值显著降低(P<0.05)，且与HSD的添加水平存在线性和二次曲线关系(P<0.05)；腿肌的L*值对照组显著高于HSD添加组(P<0.05)，且随HSD添加水平的提高呈线性和二次曲线变化(P<0.05)；a*值与HSD添加水平存在线性和二次曲线关系(P<0.05)，其中HSD 50组的a*值显著高于对照组(P<0.05)。各组间胸肌和腿肌的宰后45 min和24 h pH均无显著差异(P>0.05)。各HSD添加组胸肌吸附水含量显著高于对照组(P<0.05)，粗脂肪含量显著低于对照组(P<0.05)，且均与HSD的添加水平呈线性和二次曲线变化(P<0.05)；腿肌吸附水含量与HSD的添加水平存在线性和二次曲线关系，其中HSD 150组的含量高于显著高于对照组(P<0.05)；饲粮添加不同水平的HSD对胸肌和腿肌的初水分含量、胸肌的粗蛋白质、腿肌的粗蛋白质和粗脂肪含量均无显著影响(P>0.05)。

表2 饲粮中添加HSD对肉仔鸡生长性能的影响

表3 饲粮中添加HSD对肉仔鸡肌肉品质的影响

续表3项目ItemsHSD添加水平 HSD supplemental levels/(mg/kg)050100150SEMP值 P-value处理Treatment线性Linear二次Quadratic腿肌 Leg muscle24 h滴水损失 24 h drip loss/%3.283.894.143.730.390.9110.5560.77024 h蒸煮损失 24 h cook loss/%29.5826.7121.9828.351.570.3560.2970.379剪切力 Shear force/kgf3.85a2.83b2.41b3.00ab0.180.0220.0170.008亮度 L*45 min50.15 51.61 51.26 49.97 0.47 0.652 0.5350.586红度 a*45 min3.46 4.66 3.25 3.57 0.46 0.347 0.1980.257黄度 b*45 min13.63 12.78 13.18 13.01 0.45 0.928 0.5510.833pH45 min5.515.775.645.740.050.3440.1670.349亮度 L*24 h56.62a51.62b51.71b51.84b0.72 0.020 0.0150.010红度 a*24 h3.04b5.62a3.25b2.66b0.40 0.026 0.0170.009黄度 b*24 h13.13 10.26 11.23 9.84 0.62 0.248 0.1980.287pH24 h5.585.845.895.910.070.2570.2070.150初水分 Primary moisture/%67.9669.6567.1768.550.670.6420.5510.668吸附水 Absorbed water/%11.35b15.45ab15.93ab18.88a0.920.0290.2640.045粗蛋白质 Crude protein/%60.6762.8960.1860.610.100.7690.4980.638粗脂肪 Crude fat/%27.0425.3524.3827.280.780.5300.2650.531

2.3 HSD对肉仔鸡肌肉抗氧化指标的影响

由表4可知，胸肌中T-AOC随HSD添加水平的提高呈线性和二次曲线变化(P<0.05)，其中HSD 50组的T-AOC显著高于对照组(P<0.05)；HSD 100组和HSD 150组的MDA含量显著低于对照组(P<0.05)，且随着HSD添加水平的提高有降低趋势(P=0.098)。腿肌中HSD 50组和HSD 150组的MDA含量显著低于对照组(P<0.05)，且随着HSD添加水平的提高有降低趋势(P=0.087)；胸肌和腿肌各组中GSH-Px和SOD活性无显著差异(P>0.05)。

表4 饲粮中添加HSD对肉仔鸡肌肉抗氧化指标的影响

2.4 HSD对肉仔鸡肠道形态结构的影响

由表5可知，在21日龄时，各HSD添加组空肠的隐窝深度显著降低(P<0.05)，且随HSD添加水平的提高呈线性和二次曲线变化(P<0.05)；与对照组相比，各HSD添加组空肠的绒毛高度和V/C无显著差异(P>0.05)。在42日龄时，空肠绒毛高度随HSD添加水平的提高呈二次曲线变化(P<0.05)，其中HSD 150组的绒毛高度显著高于对照组(P<0.05)，各HSD添加组的隐窝深度和V/C差异不显著(P>0.05)。

表5 饲粮中添加HSD对肉仔鸡空肠绒毛高度、隐窝深度和V/C的影响

3 讨 论

3.1 HSD对肉仔鸡生长性能的影响

生长性能是反映肉仔鸡生长的最直接指标，提高动物的生长性能是增加经济效益的关键。关于HSD在动物饲粮中的研究，目前多集中在反刍动物及猪生产中，Inserra等[11]发现在饲粮中添加柑橘皮可以提高动物的采食量、日增重及养分消化率；赖星[12]和刘英[13]发现，在仔猪饲粮中添加HSD可以提高仔猪ADG，降低F/G。而HSD对家禽的生长性能的报道结果不尽一致，Nazok等[14]发现在饲粮中添加12%的HSD对肉仔鸡的生长性能无显著影响，而当添加量为16%时反而降低了采食量，提高了F/G；敖·德古里那等[15]发现不同水平的柑橘皮渣对断奶羔羊的ADG、干物质摄入量(DMI)及F/G均无显著影响。本试验表明，饲粮中添加HSD可以显著提高肉仔鸡的ADG，降低F/G，且随着HSD添加水平提高有上升趋势。这可能是由于HSD能抑制试验鸡肠道病原微生物区系，有效降低细菌与宿主间对营养物质的竞争，提高肉仔鸡对营养物质的转化率，最终表现在提高ADG和降低F/G上[16]。由本试验可以发现，当HSD添加水平为50 mg/kg时可以更有效地提高肉仔鸡的生长性能。

3.2 HSD对肉仔鸡肌肉品质的影响

由于人们对肉品质安全问题和经济原因，肉制品和肉制品加工行业对鸡肉的品质和需求一直在稳步增长，而评定肉的品质包括系水力、剪切力、pH、肉色等物理性指标和水分、粗蛋白质和粗脂肪等营养成分[17]。系水力和剪切力与肌肉的颜色、风味、嫩度和营养价值密切相关[18-19]。Simitzis等[9]和Goliomytis等[20]发现在肉鸡饲粮中添加0.75～3.00 g/kg的HSD对胸肌的系水力和剪切力无显著影响，与本试验中胸肌的结果一致，但在本试验中HSD 50组和HSD 100组腿肌的剪切力显著低于对照组，说明添加适宜水平的HSD可以提高肉的嫩度，原因可能是黄酮类化合物提高了氧化性肌纤维类型比例或降低了肌肉中胶原含量[21-22]，但具体机制还需进一步研究。肉色是肌肉外观评定的重要指标，常用L*、a*和b*值作为测定肉色的指标[23]。有研究发现，在肉鸡饲粮中分别添加5 mg/kg的染料木黄酮和20 mg/kg的HSD对胸肌肉色无显著影响[24]。本试验发现，试验组屠宰24 h胸肌和腿肌的L*值显著低于对照组，HSD 50组的腿肌a*值显著高于其他各组，说明饲粮中添加一定水平的HSD可以改善肉鸡肌肉的感官品质，与前人的研究结果不尽一致，可能与HSD来源及试验动物不同有关。肌肉pH可以反映屠宰后肌糖原酵解速度和强度[25]。本试验中，肌肉pH对照组与试验组无显著差异，这与李贞明等[26]在肉鸡饲粮中添加柑橘提取物后对肌肉pH的影响结果一致。水分、粗蛋白质和粗脂肪是肉中的营养物质代表性指标[27]。郭照宙[28]发现，在饲粮中添加不同浓度的抗氧化剂对21日龄的肉仔鸡肌肉中养分含量无显著影响，但可以显著提高42日龄肌肉中粗蛋白质和粗脂肪的含量。本试验中，各HSD添加组的胸肌吸附水含量显著高于对照组，HSD 150组的腿肌吸附水含量显著高于对照组，这可能是由于黄酮类化合物可以降低毛细血管通透性和脆性，维持细胞渗透压[29]；各HSD添加组胸肌中粗脂肪含量显著低于对照组，这可能是由于黄酮类化合物能够调控动物脂代谢，改变了瘦素和胰岛素的水平，从而影响了脂肪合成与分解的速率，减少了机体脂肪沉积[30]。

3.3 HSD对肉仔鸡肌肉抗氧化能力的影响

肉品质与肌肉的抗氧化功能密切相关，一般用SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性及MDA含量反映氧化程度[31]。Kamboh等[32]发现，饲粮中添加植物类黄酮可以增加T-AOC，提高SOD活性并减少MDA含量。Guo等[33]也发现HSD可以通过降低MDA含量，增强SOD和GSH活性来提高机体抗氧化能力进而改善肠道炎症。在本试验中，添加一定水平的HSD可以提高胸肌中的T-AOC，降低肌肉中的MDA含量，这说明添加HSD可以在一定程度上提高肉仔鸡肌肉的抗氧化能力，可能是与黄酮类化合物的亲脂性和分子化学结构有关，其中HSD的酚羟基可作为氢的供体，在脂质氧化的第1步产生过氧自由基，从而阻止过氧化羟基的形成，清除氧自由基并增强肌肉的抗氧化防御系统[34]。

3.4 HSD对肉仔鸡肠道形态结构的影响

肠道是机体最大的消化器官，而小肠的黏膜结构与功能完整性是保证机体能够充分吸收营养物质的前提，而衡量肠黏膜功能的重要指标包括绒毛高度、隐窝深度和V/C[35]。研究发现，饲粮中添加HSD可以显著降低仔猪空肠的隐窝深度，提高绒毛高度和V/C[36]，这可能是由于黄酮类化合物通过增加细胞内碱性磷酸酶活性及肠道上皮细胞DNA的合成进而促进肠道发育[27]。本试验发现，添加不同水平的HSD均可以显著降低21日龄空肠的隐窝深度，但42日龄仅HSD 150组的绒毛高度显著高于对照组，所以HSD在前期的作用效果相对更明显，这可能与雏鸡肠道发育尚未完善、消化能力弱有关。有研究指出，隐窝深度与细胞成熟率呈负相关，而只有成熟细胞才具有吸收养分的功能[37]。

4 结 论

饲粮中添加HSD可以提高肉仔鸡的ADG，降低F/G，改善肌肉品质，增强肌肉抗氧化能力，促进肠道形态发育；综合肉仔鸡的生长性能考虑，HSD添加水平为50 mg/kg时效果最好。