穴位埋线治疗非酒精性脂肪性肝病实验研究*

廖金玲，黄文兴，张丹璇，黎厶嘉，张海英，刘静

柳州市中医医院，广西柳州 545001

非酒精性脂肪性肝病（non－alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是以弥漫性肝细胞大泡性脂肪病变为主要特征，且除外酒精和其他明确肝损害因素所致的临床病理综合征，其疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相关肝硬变和肝细胞癌［1］。据相关调查显示，NAFLD的全球发病率约为24%，其中南美＞中东＞亚洲＞美国＞欧洲，且其发病率与肥胖2型糖尿病的发病率呈正相关［2］。该病严重影响人们的生活质量，目前该病的治疗方法仍然以单纯低热量饮食、运动疗法、减肥手术以及药物治疗，但实际上应用于临床NAFLD治疗的药物较少［3］。中医药对NAFLD的治疗有优势，穴位埋线治疗NAFLD疗效被肯定，但目前作用机制尚未明确，并未能促进推广应用。因此，本实验观察温脾化湿法穴位埋线治疗NAFLD大鼠，旨在阐明穴位埋线治疗NAFLD的作用机制，实验报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物雄性SD大鼠30只，SPF级，合格证号：SCXK桂（2014－0002），体质量180～200 g，由广西医科大学动物实验中心提供。

1.2 试剂及仪器ALT试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20180208）；AST试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20180306）；TG试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20180506）；TC试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号20180709）；RBP4酶联免疫试剂盒（南京建成生物有限公司，批号20170218）。普通饲料和高脂饲料（含87.7%普通饲料＋2%胆固醇＋0.3%胆酸钠＋10%猪油）均购自广西医科大学动物实验中心。7170S型全自动生化分析仪（日本日立公司）。

1.3 动物分组与造模大鼠适应性喂养1周后，随机分为对照组、模型组、埋线组3组，每组10只。模型组、埋线组给予高脂饲料喂养8周复制NAFLD大鼠模型，对照组给予普通饲料喂养，均自由饮水。

1.4 穴位埋线治疗方法根据温脾化湿治则，埋线组取肺俞、肝俞、脾俞、天枢、关元、中脘，按华兴邦等［4］研制的大鼠穴位图谱定位，埋线时间选择在上午9时至11时之间，将大鼠置于特制固定器中，取以上穴位，3-0号线穿进7号注射针头内，将针头刺入穴位，直刺约5 mm，提插得气后，用特制平头针芯抵住羊肠线，缓慢退出注射针头，将羊肠线留在穴内。每7日1次，治疗8周，每周三上午称体质量，根据体质量上升或下降调整所埋羊肠线的长短。模型组大鼠亦置入固定器中15 min，但不进行治疗。

1.5 观察指标一般情况：测体质量及肝湿质量，计算肝脏质量指数（每100 g体质量的肝脏湿质量）。三组大鼠均在治疗结束后隔夜禁食12 h，称体质量，以体积分数10%水合氯醛按1 mg·kg－1腹腔麻醉大鼠，迅速开腹，暴露肝脏，肉眼观察肝脏情况，取腹主动脉血，0.5 h内离心取血清待检。肝功能、血脂测定：使用日本7170S型全自动生化分析仪测定肝功能指标［谷丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransfease，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）］及血脂情况［三酰甘油（triglyceride，TG）、总胆固醇（triglyceride，TC）］。ELISA法检测大鼠血清视黄醇结合蛋白4（retinol binding protein，RBP4）水平。

1.6 统计学方法应用SPSS 17.0统计软件。计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析及LSD检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体质量、肝脏湿质量和肝脏质量指数比较与对照组比较，模型组大鼠体质量、肝脏湿质量和肝脏质量指数均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，埋线组大鼠体质量、肝脏湿质量显著下降（P＜0.01），肝脏质量指数明显下降（P＜0.05）。见表1。

2.2 各组大鼠血清学指标比较与对照组比较，模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，埋线组大鼠ALT、AST、TG、TC显著下降（P＜0.01）。见表2。

表1 各组大鼠体质量、肝脏湿质量和肝脏质量指数比较

表1 各组大鼠体质量、肝脏湿质量和肝脏质量指数比较

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 n 体质量（m／g） 肝脏湿质量（m／g） 肝脏质量指数／%对照组 10 469.00±6.96** 14.01±1.13** 2.79±0.09**模型组 10 515.70±8.50 18.94±1.27 3.62±0.21埋线组 10 491.97±11.94** 17.00±0.92** 3.39±0.40*

表2 各组大鼠血清学指标比较

表2 各组大鼠血清学指标比较

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 n ALT／U·L－1 AST／U·L－1 TG（c／mmol·L－1） TC（c／mmol·L－1）对照组 10 72.65±4.08** 177.40±15.38** 0.41±0.43** 1.71±0.10**模型组 10 129.10±5.92 274.40±16.85 0.80±0.08 3.92±0.30埋线组 10 85.30±8.64** 224.90±14.15** 0.56±0.22** 2.86±0.45**

2.3 各组大鼠血清RBP4水平比较与对照组比较，模型组大鼠血清RBP4水平显著升高；与模型组比较，埋线组RBP4水平显著降低（P＜0.01）。见表3。

表3 各组大鼠血清RBP4水平比较

表3 各组大鼠血清RBP4水平比较

注：与模型组比较，**P＜0.01

组别 n RBP4对照组 10 35.52±0.34**模型组 10 74.35±1.03埋线组 10 50.72±0.48**

3 讨论

笔者从阴阳关系出发，认为NAFLD发病的主要病机是“阳化气不足，阴成形太过”导致阴阳失调、阳虚阴盛。脏腑之阳化气不足，则体内有形之痰、湿、瘀沉积，形成病理下的“阴成形”的状态，反过来又进一步困遏阳气，诸邪阻滞不通，堆积于肝，郁久化热、化毒，以致肝体受损，肝之疏泄、藏血功能失职，导致肝内血液循环紊乱，肝脏疏泄功能发生障碍，出现肝脏系统疾病。阴成形太过，则体内阴寒偏盛，脾阳不振，运化失职，气化不利，痰湿邪气停聚，郁滞于肝内，郁久亦可化热、化瘀、化毒，导致肝体受损，以致出现肝脏内脂肪变性，假小叶形成，肝内结构紊乱等情况。由以上理论，我们团队探索出“温脾化湿”法穴位埋线治疗NAFLD。穴位埋线是针对NAFLD的一种行之有效的中医治疗方法，取“久病则深纳久留之”的长效刺激之意，具有疏通经络、调和阴阳、扶正祛邪的作用。龚秀杭等［5］应用穴位埋线治疗后大鼠非酒精性脂肪肝，大鼠肝组织脂肪变和炎症程度明显减轻，肝组织TG、CHOL水平明显下降，血清ALT、AST及TNF－α水平明显降低。胡林等［6］通过治疗非酒精性脂肪肝后发现穴位埋线能升高脂联素含量而降低TNF－α水平，改善肝组织脂肪变性程度，降低血清TC、TG、ALT、AST水平。我们团队前期实验发现穴位埋线可抑制NAFLD大鼠SREBP－1的表达，对大鼠高脂饮食诱导的NAFLD有防治作用［7］。基于“温脾化湿”法，选取肺俞、肝俞、脾俞、天枢、关元、中脘等穴位进行埋线治疗。纵观全方，前后配穴，从阳引阴、从阴引阳，温阳健脾，化湿理气，通降腑气，通畅全身气机，调和气血阴阳，气血畅则湿邪无以化生，诸穴合用共奏温阳健脾、化湿理气之效。在埋线时间的选择上均以巳时（上午9至11时）为主，根据子午流注经气流动的规律，此时乃脾经当令，同时又是阳气旺盛的时期，通过借助大自然之力，以获得同气相求之目的，以此培补人体脾土之阳气，以达温阳化气之功，消除肝脏之痰、湿、热之瘀积。

Yang等［8］发现RBP4是视黄醇类结合蛋白之一，主要由肝细胞合成，其次为脂肪组织合成，并发现血清中RBP4升高与肥胖和胰岛素抵抗有关，且RBP4水平越高，血糖水平越高。有研究表明，NAFLD患者RBP4水平显著高于正常人［9］，也有研究发现，血清RBP4水平与NAFLD及肝脏转氨酶呈正相关［10］；徐慧等［11］研究发现，RBP4在肝脏脂肪变性中呈高表达趋势。由此，人们对于降低血清RBP4水平是否有利于NAFLD的转归做了大量的研究。有研究发现，对NAFLD者进行16周有氧运动干预后，RBP4水平降低，缓解胰岛素抵抗，可以改善脂代谢紊乱［12］；谭婷等［13］也发现，茵陈五苓散可通过调节大鼠RBP4的表达水平，改善脂代谢，减缓脂肪变性程度，从而抑制脂质过氧化反应和减少细胞变性，进而保护肝组织。本实验结果证明，温脾化湿法穴位埋线可以有效降低NAFLD大鼠血清异常升高的ALT、AST、TG、TC 及RBP4水平，对NAFLD有治疗作用，但埋线组与对照组仍有明显差异，这是否与疗程不足或其他因素有关，有待进一步研究。