2018—2019年汨罗市猪群猪繁殖与呼吸综合征血清抗体及病原学检测与分析

戴正强

（湖南省汨罗市畜牧水产局，湖南 汨罗 414400）

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病，该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染所引起的一种高度接触性传染病，其中繁殖母猪感染该病主要表现为流产、早产或死胎等繁殖障碍疾病，仔猪则出现呼吸困难、高热甚至神经症状等，并伴随高死亡率，给我国养猪业造成巨大的经济损失[1-2]。

PRRSV可通过空气、水源和饲料等感染健康猪群，也可以通过胎盘垂直传播给仔猪。目前我国已经将PRRS纳入强制免疫计划，虽然在一定程度上抑制了PRRS的流行与传播，但近年来湖南省仍然有猪场发生PRRS疫情，给当地养殖场（户）造成较大的经济损失[3-4]。本研究于2018—2019年对汨罗市猪群PRRS血清学和病原学进行检测与数据归纳，旨在为该地区PRRS的防控提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 样品来源

本研究于2018年1月至2019年12月从汨罗市部分地区随机采集猪血清样品1 200份，其中2018年和2019年分别收集样品640份和560份。采用颈静脉（成年猪）或前腔静脉（仔猪和保育猪）方式进行采血，将血液样品于室温静置6～8 h，吸取上清液后置于新的离心管内，分别标记后保存于-20 ℃，待检。

对部分猪场的发病猪群进行剖检，取病变组织（如肺脏、肾脏、淋巴结等）样品共107份，将样品分别标记后低温送至汨罗市畜牧水产局，保存于-20 ℃，待检。

1.2 检测方法

采用间接ELISA法（酶联免疫吸附试验）检测被调查血清样品中PRRSV抗体，其中试剂盒购自于美国IDEXX公司，操作步骤及判定标准均按照试剂盒提供说明书进行；采用Trizol法提取组织RNA，对RNA进行反转录后生成cDNA，采用Real time-PCR法对组织样品中PRRSV核酸进行检测，并对阳性样品PRRSV毒株的Nsp2基因部分序列进行扩增与分析，其引物序列、扩增体系及条件均如文献[5]所示。

2 调查结果

2.1 2018—2019年汨罗市部分地区PRRSV血清抗体检测结果

本研究采用间接ELISA法对汨罗市部分猪场共1 200份血清样品检测PRRS抗体水平，所有猪场均已经免疫接种PRRSV灭活或弱毒疫苗。由表1可知，共有1 108份样品为PRRS抗体阳性，平均阳性率为92.33%，其中2018年和2019年调查样品PRRS阳性率分别为89.53%和95.54%。此外，本试验在2018年调查的640份样品中来源于小型养殖场和大型养殖场，样品数量分别为224份和416份，调查结果如表2所示，小型养殖场和大型养殖场血清样品PRRS抗体平均阳性率分别为80.80%和94.23%。

表1 不同年份汨罗市部分地区 PRRS 血清抗体检测结果

表2 2018 年不同养殖规模猪场 PRRS 血清抗体检测结果

2.2 2018—2019年汨罗市发病猪群PRRSV感染情况调查结果

为初步调查汨罗市发病猪群PRRSV感染情况，本试验于2018和2019年从汨罗市被调查猪场收集发病或病死猪组织样品数量分别为59份和48份，合计107份，采用Real time-PCR法对样品中PRRSV核酸进行检测。结果发现，107份样品中共有9份检测为PRRSV阳性，平均阳性率为8.41%，其中2018年收集发病猪群组织样品PRRSV阳性率（10.17%）高于2019年（6.25%），见表3。

表3 2018—2019 年汨罗市发病猪群 PRRSV 感染情况调查结果

2.3 汨罗市PRRSV流行毒株Nsp2基因部分序列分析结果

为分析本次试验获得的9个汨罗市PRRSV流行毒株的基因型与变异情况，采用RT-PCR法对毒株的Nsp2基因部分序列进行扩增、测序，并将测序获得的序列在GenBank上进行Blast序列比对与分析。结果发现，9个PRRSV毒株Nsp2基因部分序列扩增片段大小基本一致，为422～437 bp，通过在GenBank中数据库进行比对，发现其中7个PRRSV毒株与近年来国内流行的变异株（如JXA-1株）Nsp2基因核苷酸部分序列同源性最高，为98.7%～99.5%，序列比对发现部分毒株存在碱基插入或缺失现象；而其它2个PRRSV毒株与国内2006年以前流行的传统毒株（如CH-1a株）同源性最高，为99.2%～99.7%。

3 讨论

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在我国猪场流行广泛，一度给我国养殖业造成巨大的经济损失。但由于PRRSV属于RNA病毒，其基因组具有易突变和重组的特点，导致PRRSV在我国基因型较为复杂，基于不同基因型毒株研发的疫苗交叉保护力有限，这为该病的防控带来了很大的挑战。近年来，我省猪场暴发PRRS的案例很多，且在笔者多年疫病诊断与防控过程中也发现部分猪场即使免疫接种PRRSV疫苗后仍然暴发PRRS，并导致严重的经济损失。

为了对汨罗市PRRS进行有效防控，并初步分析流行毒株基因变异情况，笔者于2018年1月至2019年12月对汨罗市部分猪场进行PRRSV血清抗体和病原检测。结果发现，2018年和2019年被调查的血清样品PRRSV抗体阳性率分别为89.53%和95.54%，符合农业部制定的标准（≥70%），说明疫苗的免疫接种使猪群获得较高的免疫抗体水平；受非洲猪瘟的影响，我们仅比较2018年小型养殖场和大型养猪场猪群PRRS血清抗体水平，发现其阳性率存在一定差异，由于小型养殖场可能存在疫苗接种方式不规范或漏打的可能性，导致其阳性率稍低于大型养殖场。

大量研究结果表明，PRRSV基因组中Nsp2基因存在高变异的特点，通过知晓Nsp2基因序列变异情况可以初步分析PRRSV毒株遗传变异情况和具体基因型特点，为该病的防控选择更加有效的疫苗[5-6]。为此，本试验首先从汨罗市以上被调查猪场采集病（死）猪组织样品107份，采用RT-PCR法检测组织基因组中是否存在PRRSV核酸，结果发现共9份样品检测为PRRSV阳性，其平均阳性率为8.41%。值得注意的是，这些被调查猪场均已经免疫接种过相应疫苗，且已经产生了较好的保护率，为了进一步确定此类猪场出现PRRS疫情的原因，我们对以上9株PRRSV毒株的Nsp2基因部分序列进行扩增与分析，发现大部分毒株属于变异株，其它则为传统株。我们对以上猪场回访发现，部分猪场免疫接种的是基于变异株研发的疫苗，而有少数猪场仍然免疫接种基于传统株研发的疫苗，这可能是导致部分猪场虽然免疫接种PRRSV疫苗，但仍然暴发疫情的原因。因此，应该定期对猪场PRRS进行病原学监测，分析其基因型，以便选择更加有效的疫苗进行防控。