HBV持续感染患者血清ANA、免疫球蛋白和补体水平及其临床意义*

余 卉,刘少平,宁立芬

1.泰康同济(武汉)医院检验科，湖北武汉 430000;2.天门市第一人民医院检验科，湖北天门 431700;3.武汉市汉阳医院检验科，湖北武汉 430000

乙型肝炎病毒(HBV)在世界范围内广泛传播，统计结果显示，全球HBV感染者数量可能高达20亿，其中约2.4亿患者为慢性持续感染，且每年死亡患者数约为60万[1-2]。我国为HBV感染主要高发地区，60岁以下人群HBV携带率为7.18%，感染者总数达9 300万，其中约2 000万可进展为慢性乙型肝炎(CHB)。由于现阶段抗病毒治疗尚无法彻底治愈乙型肝炎，CHB患者肝细胞因持续炎症和损伤而导致病情进展为肝硬化甚至肝癌。因此，准确判断HBV感染状态对病情评估、治疗方案选择和预后评估均具有重要的参考价值[3]。近年来有研究发现，HBV持续感染可能导致机体免疫功能紊乱和自身免疫现象发生，并在CHB患者病情进展和转归中占有重要地位。抗核抗体(ANA)是临床最常见的自身抗体之一，常用于自身免疫性疾病的诊断、治疗监测和病情评估[4-5]。本文主要探讨外周血ANA、免疫球蛋白和补体在HBV持续感染患者中的表达水平及临床意义，为促进CHB诊治水平提高而提供参考依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年8月至2019年8月本院收治的HBV感染患者92例为研究对象，其中男54例、女38例，年龄26～74岁、平均(51.83±9.27)岁。纳入标准：(1)符合CHB相关诊断标准[6]；(2)血清HBV DNA>1.0×103copy/mL；(3)年龄18～80岁。排除标准：(1)合并其他肝炎病毒感染或肝组织损伤；(2)伴其他免疫性疾病；(3)伴恶性肿瘤或心、肾功能不全；(4)妊娠或哺乳期女性；(5)前6个月内接受免疫调节治疗。根据肝组织活检结果将研究对象分为CHB组、肝硬化组。另外选取本院同期健康体检者60例为对照组，其中男34例、女26例，年龄18～76岁、平均(52.64±9.08)岁。各组研究对象年龄和性别差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会审核通过。患者及家属知晓本研究并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1实验室检查 抽取各组研究对象空腹外周静脉血5 mL，离心后取上清液-80 ℃保存待用，采用免疫比浊法(试剂盒为厂家配套检测试剂盒)检测血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)水平；采用美国Beckman Coulter Immage800免疫化学系统及配套试剂检测血清补体C3和C4水平；采用间接免疫荧光法(试剂盒由德国欧盟实验诊断有限公司生产)检测血清ANA滴度，以1∶100为起始滴度，滴度≥1∶100者为阳性，对结果为阳性者分别按1∶320和1∶1 000的比例进行稀释以测量最终滴度。所有操作均严格按照说明书要求完成，正常参考值范围：IgA 0.82～4.35 g/L、IgM 0.46～3.04 g/L、IgG 7.51～15.6 g/L、C3 0.79～1.52 g/L、C4 0.16～0.38 g/L。

1.2.2肝组织活检 采用16G一次性穿刺针(美国Bard公司)进行肝组织穿刺活检。合格标本标准为长度≥1.5 cm且镜下汇管区数量≥6个。经4%甲醛固定和石蜡包埋后4 μm连续切片，经苏木精-伊红(HE)染色、Gordon-Sweets银氨染色和Masson三色套染后参照Scheuer系统判断有无肝硬化。

2 结 果

2.1肝硬化组、CHB组和对照组免疫球蛋白和补体检测结果比较 经肝组织活检，将HBV持续感染患者分为CHB组(65例)和肝硬化组(27例)。肝硬化组血清IgG、IgA及IgM水平高于CHB组和对照组，C3和C4水平低于CHB组和对照组，CHB组血清IgG、IgA及IgM水平高于对照组，C3和C4水平低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 肝硬化组、CHB组和对照组免疫球蛋白和补体检测结果比较

2.2肝硬化组、CHB组和对照组ANA检测结果比较 肝硬化组、CHB组和对照组ANA阳性率分别为40.74%、21.54%和5.00%，其中肝硬化组各滴度的阳性率均高于对照组，1∶1 000滴度的阳性率高于CHB组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 肝硬化组、CHB组和对照组ANA检测结果比较[n(%)]

2.3HBV感染患者发生肝硬化的危险因素分析 多因素Logistic回归分析显示，血清ANA阳性、IgG和IgA为HBV感染患者发生肝硬化的独立危险因素(P<0.05)，C3和C4则为重要的保护因素(P<0.05)。见表3。

表3 HBV感染患者发生肝硬化的危险因素分析

2.4各项指标对肝硬化的诊断价值分析 ANA诊断HBV感染患者肝硬化的灵敏度和特异度分别为40.74%和80.00%，IgA的灵敏度和特异度分别为74.07%和84.62%，补体C3的灵敏度和特异度分别为70.37%和81.54%。将ANA、IgA、补体C3 3项指标联合检测可进一步提升诊断价值，灵敏度和特异度分别为66.67%和95.38%。见表4、图1。

表4 各项指标对HBV感染患者肝硬化的诊断价值分析

注：A为C4、IgG和IgM；B为ANA、IgA、C3及三者联合检测。

3 讨 论

CHB的发病机制现阶段尚未完全明确，HBV对肝细胞并无直接杀伤作用，但可通过免疫反应和炎症造成病理性损伤，具体机制可能包括淋巴细胞浸润、免疫复合物沉积以及免疫耐受破坏等[7]。梁志军等[8]报道显示，HBV可影响患者T淋巴细胞亚群和免疫球蛋白水平，进而引起细胞免疫和体液免疫异常，因此对免疫功能进行检测有利于评估患者病情和判断预后。LANG等[9]研究认为，HBV感染与机体适应性免疫反应关系密切，检测CD4+和CD8+T淋巴细胞等免疫学指标水平可为开展个体化免疫治疗提供参考信息。

免疫球蛋白主要由B淋巴细胞合成和释放，是机体受抗原刺激后产生的主要效应产物，补体是具有溶菌和溶细胞等免疫功能的活性蛋白，两者在HBV感染后的病原体清除过程中具有积极作用，同时也是导致肝功能损伤的重要原因。因此，检测一种或多种免疫球蛋白水平对肝脏疾病的诊断、病情监测和治疗指导均具有重要的参考价值[10-11]。林孟新等[12]研究认为IgG、IgM、IgA、C3和C4对肝脏疾病的诊断具有重要价值。祁冬冬[13]对200例CHB患者进行分析，结果表明，血清免疫球蛋白水平可直接反映CHB患者肝功能情况并为临床治疗提供可靠依据。本研究中肝硬化组、CHB组和对照组血清IgG、IgA及IgM呈降低趋势，C3和C4水平呈升高趋势，且各指标组间差异均有统计学意义(P<0.05)。这表明HBV持续感染可引起免疫球蛋白水平上升和补体水平降低，其中血清IgG、IgA和IgM水平升高一方面是由于病毒诱导而大量产生，另一方面还与患者肝功能损伤导致抗体清除能力减退有关。因此，检测血清IgG、IgA和IgM水平不仅可评估机体体液免疫水平，还可反映CHB病情和肝功能损伤程度。C3和C4是连接免疫反应中经典途径和旁路途径的关键补体，其水平降低不仅与免疫复合物形成造成补体大量消耗有关，还可能与肝细胞损伤导致补体合成减少关系密切，故观察血清C3和C4水平变化可监测机体免疫状态和肝功能损伤情况，与邱厚兵等[14]的研究结果相似。

自身免疫反应在肝脏疾病中较为常见，其发生可能与遗传、免疫系统过度激活等因素有关，且在CHB病情进展过程中发挥着重要作用[15]。练明建等[16]对270例肝硬化患者进行检测，发现其普遍存在自身免疫现象，且自身抗体阳性率与病因、性别及年龄等因素有关。本研究以滴度≥1∶100为ANA阳性进行研究，结果显示，肝硬化组、CHB组和对照组阳性率分别为40.74%、21.54%和5.00%，且肝硬化组各滴度的阳性率均高于对照组，1∶1 000滴度的阳性率高于CHB组，提示自身免疫反应在CHB发生和发展过程中占据重要地位，并且可能加重患者肝功能损伤。但有研究认为，CHB患者的ANA低滴度仅反映机体处于自身免疫反应状态，而并未对免疫功能造成明显影响，而高滴度又可能因自身免疫性疾病所致，因此ANA阳性在CHB患者中的应用价值还有待进一步探讨。

肝硬化是肝炎症损伤的不可逆转阶段，及时发现和合理干预对控制病情进展具有重要意义。本研究采用多因素Logistic回归进行分析，结果显示，血清ANA阳性、IgG和IgA均为HBV感染患者发生肝硬化的独立危险因素，C3和C4则为重要的保护因素，表明CHB病情进展和发生肝硬化是免疫系统多项因素共同作用的结果。因此，对免疫功能进行干预对改善CHB患者预后具有积极作用。目前，病毒抑制联合免疫调节已成为CHB治疗具有广阔应用前景的新策略[17]。此外，本研究采用ANA、免疫球蛋白和补体对肝硬化和CHB进行鉴别诊断，结果显示ANA的灵敏度和特异度分别为40.74%和80.00%，灵敏度较低的主要原因为ANA阳性率偏低所致，因此单独应用ANA时容易造成漏诊。3种免疫球蛋白中IgA的诊断价值相对较高，灵敏度和特异度分别为74.07%和84.62%，表明IgA类抗体在抗感染免疫中发挥主要作用，因而能更准确地反映患者病情变化。补体C3的灵敏度和特异度分别为70.37%和81.54%，C4虽然灵敏度高达96.30%，但特异度仅为49.23%，因此整体准确率相较于C3明显偏低。采用ANA、IgA和C3 3项指标进行联合检测，灵敏度和特异度分别为66.67%和95.38%，表明ANA、免疫球蛋白和补体联合检测可为判断CHB患者发生肝硬化提供准确的参考依据，进而指导临床治疗和预后评估，同时还可有效减少肝组织穿刺活检等有创操作次数，对促进患者身心健康具有重要意义。

综上所述，外周血ANA、免疫球蛋白和补体在HBV持续感染患者中水平较健康人群明显升高且与患者病情进展情况关系密切，是CHB患者发生肝硬化的主要危险因素，同时可为肝硬化早期诊断和治疗提供参考依据。