日粮中添加参麦多糖对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

陈莎 ，张玉阁，陈佳，秦洪宇，殷中琼，2，李炀平，邹元锋，2*

（1.四川农业大学动物医学院天然药物研究中心，四川 成都 611130；2.四川省动物疾病与人类健康重点实验室，四川 成都 611130；3.四川农业大学农学院，四川 成都 611130）

参麦方见于《医学启源》的参麦饮，是一种传统的中药复方制剂，由红参和麦冬两味药材制备而成，具有抗氧化，抗心肌缺血，降低心肌耗氧量，增强心脏压力等药理作用[1]。药理研究发现，中药多糖具有增强免疫、调节肠道菌群、促进生长等多种生物活性[2-3]。本试验按一定比例在肉鸡饲料中添加参麦多糖（SMP），探索其对肉鸡生长性能、免疫应答、血液生化指标及42 日龄肠道菌群、黏膜免疫的积极影响。

1 材料与方法

1.1 试验药材 红参购自成都荷花池中药材市场，麦冬于2019 年3 月采自四川三台县，经四川农业大学兽医学院邹元锋博士鉴定。参麦多糖（SMP）的提取：红参与麦冬剪碎后按照1∶1 质量比混合，100 ℃下乙醇回流萃取，去除低分子量和亲脂化合物；30倍量蒸馏水100 ℃下提取2次，每次2 h；水提液浓缩后用乙醇沉淀，收集多糖沉淀，冷冻干燥后即得。

1.2 试验设计 所有动物试验均按四川农业大学动物伦理委员会批准的程序进行。从绵阳某家禽有限公司购买健康的1日龄三黄鸡60只，随机分为4组，每组15只，分笼饲养。4个组分别按照0、0.25%、0.5%、1.0%的比例添加SMP，基础日粮配方见表1。饮食符合中国三黄鸡喂养标准营养要求。前7 d 采用23 h 光照，温度保持在27 ℃左右，然后逐渐过渡到自然光和室温（22 ℃）。试验期42 d。在此期间，肉鸡自由采食与饮水。第14 d 接种新城疫疫苗。其余饲养管理按《家禽饲养管理手册》进行。

表1 基础日粮组成和营养水平

1.3 生长性能测定 在试验开始及每个生长阶段结束时对肉鸡称重，计算体重增加量。饲料消耗量＝饲料供给量－剩余量。通过计算肉鸡体重增加量与饲料消耗量的比值来确定饲料转换比（FCR）。

1.4 免疫力测定 试验第42 d，采集每只鸡的静脉血5 mL，4 000 r∕min 离心10 min，分离上清液，－20 ℃保存。采用血凝抑制（HI）试验，测定新城疫（ND）抗体效价。

为确定免疫应答水平，采用鸡酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒和微板阅读器（美国BIORAD iMark）测定血清免疫球蛋白G（Ig G）、免疫球蛋白M（Ig M）、白介素-2（IL-2）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平。试验步骤按试剂盒说明书进行。

将鸡安乐死之后，采集鸡胸腺、脾脏和法氏囊，去除表面筋膜和脂肪，吸干表面血迹后逐一称重，计算免疫器官指数。免疫器官相对重量表示为器官重量与体重之比（mg∕g），计算公式：

1.5 血液生化参数测定 采用全自动生化分析仪测定血清葡萄糖、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、胆固醇、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和碱性磷酸酶（ALP）的水平。

1.6 肠道菌群分析 无菌采集盲肠内容物0.5 g，置于无菌Eppendorf 管中，用0.9 mL 稀释剂在振荡器上振荡20 min，使盲肠内容物均匀化。称重适量盲肠内容物，用稀释剂稀释至合适的倍数，取0.1 mL稀释样品接种到琼脂培养基。采用MRS 琼脂培养乳杆菌，采用MacCon 琼脂培养大肠杆菌，采用SS 琼脂培养沙门氏菌，每个稀释度重复3 次。细菌计数以lgCFU（菌落形成单位）∕g表示。

1.7 肠道黏膜上分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的测定 去除肠内容物后，用洁净液氮在无菌研钵中将回肠研磨成均匀粉末。冷冻条件下称取组织粉末0.1 g于无酶Eppendorf管中，加入PBS至10 mg∕mL，混匀。3 500 r∕min 冷冻离心20 min，取上清液，采用鸡分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶联免疫分析试剂盒检测组织中的sIgA含量。

1.8 统计分析 试验数据采用SPSS 统计软件进行单向方差分析（ANOVA），采用Duncan 法进行组间多重比较。当P＜0.05时，认为差异显著。

2 结果

2.1 生长性能 生长性能的测定结果汇总在表2 中，包括初始体重（IBW）、最终体重（FBW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和饲料转化率（FCR）。0.25%和1.0% SMP 添加组的FBW 明显高于对照组（P＜0.05）。添加SMP 对ADG、ADFI 和FCR 无影响，但相对于对照组，试验组的FCR在一定程度上有所降低。

2.2 免疫状况 各组肉鸡的免疫器官指数见表3。0.25%SMP 添加组的脾脏指数高于对照组（P＜0.05）。与对照组相比，0.25%和1.0%SMP添加组的脾脏指数和胸腺指数均较高（P＜0.05）。当饲喂0.25%SMP 时，胸腺指数得到明显改善（P＜0.05）。

免疫应答状态的测定结果见表4。所有SMP添加组的IgG 含量均显著高于对照组（P＜0.05）。添加0.25%SMP 可显著增加IgM 和IL-2 的含量（P＜0.05）。0.25%和1.0%SMP添加组中，鸡新城疫（ND）抗体效价水平（42 d）明显增高（P＜0.05）。0.5%和1.0%SMP添加组中，TNF-α浓度明显降低（P＜0.05）。

2.3 血液生化参数 日粮中补充SMP 对血液生化参数的影响见表5。SMP 添加组的血清葡萄糖、碱性磷酸酶（ALP）和甘油三酯浓度均低于对照组（P＜0.05）。尿酸在添加1.0%SMP 时显著降低（P＜0.05），胆固醇浓度在添加0.5%SMP 时显著降低（P＜0.05）。所有试验组的高密度脂蛋白(HDL)浓度均高于对照组，差异最显著的是0.25%SMP 添加组（P＜0.05）。添 加0.5% 和1.0%的SMP 后，低密度脂蛋白（LDL）浓度显著降低（P＜0.05）。

2.4 肠道菌群和黏膜免疫 肠道菌群及黏膜免疫测定结果见表6。肠道菌群计数显示，SMP 添加组的大肠杆菌和沙门氏菌数量显著减少（P＜0.05）。与对照组相比，添加0.25%SMP可显著增加乳酸杆菌的数量。在日粮中加入SMP 可促进肠道黏膜反应因子sIgA的分泌，增加其含量（P＜0.05）。

表2 参麦多糖（SMP）对肉鸡生长性能的影响g

表3 参麦多糖(SMP)对肉鸡脾脏、胸腺和法氏囊指数的影响mg∕g

表4 参麦多糖（SMP）对免疫应答的影响

表5 不同水平参麦多糖（SMP）对血液生化指标的影响

表6 不同水平参麦多糖（SMP）对肠道菌群和sIgA分泌量的影响

3 讨论

3.1 SMP 对生长性能的影响 BW、ADG、ADFI 和FCR 常作为评估家禽生长性能和经济价值的指标。本研究发现，在肉鸡日粮中添加0.25%SMP，其FBW明显高于对照组，表明SMP可以促进肉鸡生长，这与黄芪多糖对肉鸡生长性能的影响结果相似[4]。然而，与以前试验不同的是，本试验添加SMP 对ADG、ADFI 和FCR 值没有显著影响，推测可能是由于多糖剂量和来源不同所致。血清生化指标可以反映动物物质代谢的变化，到目前为止，大量文献报道了多糖对动物血液生化指标具有改善作用[5-6]。本研究表明，SMP可降低血糖、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白（LDL）水平，提高高密度脂蛋白（HDL）水平。

3.2 SMP 对免疫功能的调节作用 多糖对免疫系统有调节作用，主要表现为免疫增强或免疫刺激[7]。鸡免疫细胞的发育、分化和抗体产生主要发生在免疫器官，包括法氏囊、胸腺和脾脏。本试验发现，在日粮中加入SMP可以改善肉鸡的脾脏、胸腺和法氏囊指数，提高机体的整体免疫功能，这与现有的研究成果相似[8]。此外，本试验分别检测了肉鸡IgM、IgG、TNF-α、IL-2的含量及ND效价,作为评价机体免疫水平的指标，以综合判断肉鸡的免疫性能及一般抗性。

一般来说，血清免疫球蛋白水平的高低是判断动物体液免疫功能好坏的重要指标之一。IgG可介导体液免疫反应，IgM 主要由淋巴组织和脾脏中的B细胞产生。本研究发现，日粮中添加SMP 可增加血清中的IgG 和IgM 含量，说明SMP可以提高动物体内抗体水平，更好地帮助机体抵抗外界物质的侵袭。肿瘤坏死因子α（TNF-α）主要由单核-巨噬细胞分泌，TNF-α含量过高会激活一氧化氮（NO）等细胞毒性炎症介质的产生，增加疾病的发生率。目前，大多数试验都集中于研究多糖对病理模型动物TNF-α含量变化的影响[9]。而在本试验中，添加SMP 可以降低血清中TNF-α的含量，表明在正常条件下SMP对机体TNF-α的产生具有调节作用，能有效预防疾病的发生。白细胞介素-2（IL-2）是由活化的T 或NK细胞产生的，能刺激T淋巴细胞增殖，调节淋巴细胞和单核-巨噬细胞的功能，增强NK细胞的杀伤活性，促进抗体和细胞因子的产生[10]。本试验添加0.25%和0.5%SMP 组的IL-2 含量增加。推测SMP可能通过促进IL-2分泌来刺激T细胞增殖，增强NK 细胞活性，从而提高免疫水平。此外，1.0%SMP 添加组的IL-2 含量降低，表明SMP 对IL-2的影响不会随着浓度的增加而增加，推测存在某一最佳作用剂量，这与其他文献[11]报道的一致。本试验以0.25%添加剂量的效果最好。新城疫抗体滴度反映了雏鸡对新城疫病毒的特异性反应，抗体水平越高，体液免疫功能越强。本试验发现，SMP 提高了免疫抗体水平，增强了鸡对疫病的抗性。

3.3 肠道菌群与黏膜免疫的关系 研究表明，中药多糖可作为优势碳源调节机体微生态机制，改善肠道健康[12]。多糖进入肠道后，被乳酸菌和双歧杆菌利用发生降解，产生乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸等短链脂肪酸，降低肠道pH值，抑制不耐酸致病菌（如大肠杆菌和沙门氏菌等)的生长[13]。本试验结果表明，在日粮中添加SMP可促进肠道有益菌群乳酸菌的增殖，减少大肠杆菌和沙门氏菌等有害细菌的数量。回肠组织中的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）作为肠道免疫屏障的第一道防线，是肠黏膜先天免疫的主要效应物，在肠黏膜免疫中起着重要的保护作用[14]。sIgA水平的高低反映了机体黏膜免疫状态的好坏。本研究中，添加SMP 可以显著增加肠道sIgA 的含量。对其他多糖的研究也获得了相似的结果。可见SMP 有利于促进肉鸡肠道黏膜免疫球蛋白的合成与分泌，增强肠黏膜的局部免疫功能。

4 结论

综上，在肉鸡基础日粮中添加SMP可以改善肉鸡的生长性能，促进肉鸡免疫器官的发育，提高血清IgG、IgM、IL-2 和ND 抗体水平，增加回肠中sIgA 的合成和分泌，降低TNF-α含量，还可以通过培养肠道有益菌、抑制有害菌含量来调节肠道菌群。