超高效液相色谱串联质谱法测定盐酸米诺环素的含量

胡光华，徐 皓，陈 锐，李兰兰，彭秀丽（长春市食品药品检验中心，吉林 长春 130000）

盐酸米诺环素，又名盐酸去甲基四环素，是半合成的四环素类衍生物抗生素，通过抑制敏感微生物的蛋白合成而产生抗菌效果，抗菌谱与四环素类药物相似，但抗菌效果更强[1-2]。盐酸米诺环素具有吸收迅速、完全、脂溶性高、半衰期长等优点，临床上主要用于痤疮和牙周炎症治疗，能抑制大部分病原菌，具有抗菌和抗炎的双重作用。盐酸米诺环素缓释片是盐酸米诺环素与适当的辅料羟丙基甲基纤维素制成的亲水型骨架缓释片。目前中国药典采用高效液相色谱法测定盐酸米诺环素的含量，但是对盐酸米诺环素缓释片的检验方法未见收载，采用液质联用的方法检测盐酸米诺环素缓释片含量的文献未见报道。因此，本作者建立液质联用方法对盐酸米诺环素缓释片进行含量测定。经验证使用本法操作简便快速，灵敏度高，重现性好，可快速测定盐酸米诺环素缓释片的含量。

1 材料与检测条件

1.1 药品、试剂及仪器

盐酸米诺环素缓释片（丹东医创药业有限责任公司，批号：191011，每片45 mg）；米诺环素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：130514-200912，含量：88.05%）；乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为去离子水。

AB Sciex QTRAP® 4500液质联用仪（AB Sciex）；XA-205电子天平（Mettler Toledo）。

1.2 检测条件

色谱柱：Spherisorb C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：0.2 mol/L醋酸铵-乙腈（80：20），流速为0.4 mL/min，进样温度为室温，进样方式为自动进样。

质谱部分：离子源为ESI离子源，正离子扫描，3.0 kV的电离电压，电喷雾接口干燥气（N2）流速为300 L/h，离子源温度为150℃；锥孔电压为30V，脱溶剂气温为130℃，定量分析离子：m/z 458（M-1+1，C23H27N3O7），441[（M-1+1）-OH，C23H26N3O6]。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液和供试液的制备

对照品储备液：取米诺环素对照品约50 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加80 mL去离子水溶解后稀释至刻度，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，定容，备用。

对照品溶液：取对照品储备液1 mL，置于25 mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，即得。

供试品溶液：取盐酸米诺环素缓释片10片，研细，精密称取适量（约相当于米诺环素50 mg），加80 mL去离子水进行溶解，超声处理（功率：250 W，频率：60 kHz）30 min，定容至刻度；过滤，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，稀释至刻度；取1 mL，置于25 mL容量瓶中，定容，即得。

2.2 线性关系考察

精密吸取对照品储备液1、2、4、6、8、10 mL分别置100 mL容量瓶中，定容，加去离子水稀释至刻度，共制得6个浓度梯度的系列对照品溶液，在上述质谱条件下进行测定。以相应的对照品溶液浓度对峰面积进行线性回归，得回归方程Y=26968X+80552×C，r=0.9998，线性50～500 ng/mL。

2.3 精密度实验

取同一批次盐酸米诺环素缓释片20片，研细，取细粉适量，按照供试品溶液的配制方法配制低中高三个浓度（相当于米诺环素160 ng/mL、200 ng/mL、240 ng/mL），每个浓度平行配制5份溶液，按照上述色谱及质谱条件重复进样5次，记录峰面积，并计算峰面积的RSD为1.20%，符合方法学要求。

2.4 稳定性实验

精密量取同一份供试品溶液，在放置1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、24 h的不同时间点分别进样，记录峰面积并计算峰面积的RSD为1.07%，说明米诺环素在水溶液中保存的峰面积几乎没有变化，供试品溶液的稳定性较好。

2.5 加样回收实验

精密称定含米诺环素相同量的对照品和供试品，加水溶解制成200 ng/mL浓度的溶液，在供试品溶液中加入浓度含量为80%、100%、120%的对照品溶液，按上述色谱和质谱条件进行实验，各浓度含量分别测定3次，计算回收率，平均回收率为98.6%，RSD=0.65%。

2.6 含量测定

将2.1中对照品溶液和供试液按上述质谱条件进样（进样量5 μL），使用外标法计算样品的含量，结果见表1。

3 讨 论

本研究对盐酸米诺缓释片进行研究，根据精确相对分子质量、相关文献以及对照品色谱保留时间及二级谱图，得到对照品的质谱参数，建立盐酸米诺环素缓释片含量的快速检测方法，平均用时为5 min，与相关文献相比较可有效快速的检测药品含量，且还可用于药品中其他成分的测定，通过图谱分析可确定药品中其他成分的含量，为盐酸米诺环素缓释片的质量标准建立及评价提供研究依据。

表1 盐酸米诺环素缓释片含量测定结果（n=5）（%）

实验中对色谱条件和质谱条件都进行了优化，对不同批次、不同浓度及不同溶解方式进行对比检测，以实现色谱峰信息量稳定作为指标，最终确定超声处理（功率：250 W，频率：60 kHz）30 min，药液浓度为200 ng/mL为供试品的配制方法。因考虑到盐酸米诺环素可在空气及各种氧化剂中发生氧化还原反应，通过对各种溶剂进行对比考察，发现米诺环素在流动相中放置一定时间后药液颜色发生改变，最终确定采用去离子水作为溶剂溶解药品。对色谱条件进行考察，发现色谱柱Spherisorb C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）的分离效果较好，流动相0.2 mol/L醋酸铵-乙腈（80：20）的分离效果较好，柱温和流速的微小差异造成的影响可忽略不计。

本研究发现，采用HPLC-MS方法测定盐酸米诺环素缓释片含量，操作简便快速，灵敏度高，重现性好，结果准确可靠。