萨福克羊血清中蛋白含量与超排效果相关性研究

赵冰茹 ，陈 童，董 红，毋状元，罗永明，阿依努尔·亚森，季 斐,4，郑新宝*

（1.中国农业大学动物科学技术学院，北京 100193；2.新疆畜牧科学院畜牧研究所，新疆乌鲁木齐 830011；3.新疆阿勒泰地区畜牧兽医站，新疆阿勒泰 836501；4.新疆农业大学动物科学学院，新疆乌鲁木齐 830052）

随着人们饮食结构的变化，羊肉因其肉质鲜美、丰富的营养价值以及独特的保健作用而受到越来越多人的喜爱[1-2]。为提高肉羊的繁殖效率、提供更多的肉用绵羊，胚胎移植技术广泛运用于肉用绵羊育种中，而超数排卵技术作为胚胎移植中的一项关键技术，是充分挖掘良种母羊的遗传潜力和为肉羊产业提供大量优质胚胎的重要手段[3-5]。

超数排卵通过注射外源性激素来提高血液中促性腺激素浓度，减少闭锁卵泡数量，从而使卵泡发育并排卵，能够为胚胎移植提供大量优质胚胎[6]。影响超数排卵效果的因素包括个体生理状态、遗传特性等内在因素，以及不同的外源性激素和超数排卵方法、不同季节等外在环境因素[7]。生物体自身的生理、健康状态对于排卵率也存在影响。病原体的侵入使机体快速发生高强度的特异性免疫应答，从而使机体的稳定状态发生偏移，为了抵抗病原体的入侵，机体免疫球蛋白的数量会相应增加[8]。而关于血清中蛋白含量等指标对超数排卵效果的影响尚未见报道，本研究旨在探讨供体绵羊血清中蛋白含量和超数排卵效果的相关性，为改善绵羊超数排卵效果提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 实验动物均来自新疆天山畜牧生物工程股份有限公司种羊场，分2 批随机选择2～4 岁，健康、无繁殖疾病的45 只和60 只萨福克羊作为供体母羊。

1.2 药品和试剂 本实验用于同期发情和超数排卵的主要药品和试剂包括注射用氯前列烯醇钠（PG）、垂体促卵泡素（FSH）、促黄体素释放激素A3（LHRH），均购自宁波市三生药业有限公司。采卵液为自配，胚胎保存液（Holding）为美国AB 公司生产。

1.3 实验方法 所有实验动物超排前1 个月根据供体母羊膘情进行补饲，每只母羊每天精料添至800 g、胡萝卜200 g、苜蓿草2 kg，青贮玉米2 kg。配备舔砖，精料中添加亚硒酸钠等微量元素。进行必要的防检疫和驱虫工作，观察供体母羊体况及繁殖周期，确定体况良好、无疾病和不良症状后，开始同期发情和超数排卵处理。超排前1 天采集外周血，经3 000 r/min 离心10 min 后分离出血清。使用FSH 减量法对供体母羊进行超排，在发情周期的第9～12 天以递减计量每天早晚各注射1次FSH，总剂量为10 mg/ 只；在超数排卵第3 天时注射1 支PG，在母羊发情后14 h 进行腹腔镜输精，并注射LHRH；在供体母羊发情配种的第6～7 天进行手术法冲胚，同时统计黄体数、回收总卵数、可用胚胎数等。在实验室测定血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白含量，分析与超排结果的相关性。

1.4 统计分析 对原始数据进行统计处理，按回收总卵数分为低回收总卵数组≤5 个、中回收总卵数组5～10 个、高回收总卵数组≥10 个。使用SPSS 24.0 软件对不同比较组数据进行描述性统计，单因素方差分析及Duncan's多重比较，并利用Curve Estimation 方法建立回收总卵数与血清生理指标间的最优回归模型。

2 结果

2.1 不同回收总卵数供体羊超排效果 由表1 可知，高回收总卵数组的回收总卵数、可用胚胎数、黄体数极显著高于其余2 组，中回收总卵数组的回收总卵数、可用胚胎数极显著高于低回收总卵数组，中回收总卵数组和低回收总卵数组的黄体数无显著差异。

2.2 不同组间供体羊血清蛋白浓度 由表2 可知，低回收总卵数组的总蛋白、球蛋白浓度极显著高于其余2 组，低回收总卵数组和中回收总卵数组的白蛋白浓度极显著高于高回收总卵数组；高回收总卵数组和中回收总卵数组间的总蛋白、球蛋白浓度差异不显著，低回收总卵数组和中回收总卵数组的白蛋白浓度差异不显著。

2.3 建立最优回归模型 利用血清中蛋白含量对回收总卵数进行逐步回归分析，总蛋白在回归模型中对回收总卵数影响极显著（P＜0.01），而白蛋白、球蛋白、白球比对回收总卵数影响不显著（P＞0.05），已从回归模型中剔除。根据回归分析原理，回归模型R2越接近1 时，该回归模型越接近实测值，如表3 所示，血清中蛋白含量对回收总卵数的最优回归模型为y=137.571－2.971x+0.016x2（R2=0.690，P＜0.01）。

3 讨 论

超数排卵是胚胎移植过程的关键技术，而超数排卵后的胚胎收集对于快速繁殖优良种畜也十分重要[9]。本研究利用FSH 对萨福克供体母羊进行超数排卵处理，获得平均可用胚胎数为4.83 个，低于黑头萨福克羊超数排卵获得平均可用胚胎数（6.08 个）[10]、利用褪黑素处理供体母羊获得平均可用胚胎数7.40 个[11]，这可能与褪黑激素能够显著提高胚泡率[12]有关。本研究分析表明，总蛋白、白蛋白浓度与回收总卵数、可用胚胎数均存在极显著负相关关系，球蛋白浓度与回收总卵数存在极显著负相关关系，即随着总蛋白、球蛋白、白蛋白浓度的升高，回收总卵数和可用胚胎数均呈下降趋势；分组分析发现高回收总卵数组的总蛋白、白蛋白、球蛋白浓度极显著低于低回收总卵数组，即高回收总卵数组具有较低的蛋白浓度，与相关性分析结果一致。

表2 不同回收总卵数供体羊血清蛋白浓度 g/L

表3 最优回归分析结果

对于哺乳动物来讲，在饲养过程中都可能会产生应激，而应激对于雌性动物繁殖生理和行为存在着负面影响，主要为干扰排卵、干扰植入卵母细胞的成熟、抑制接受交配的行为。在应激反应中，下丘脑释放促肾上腺皮质激素释放激素（CRH），导致垂体促肾上腺皮质释放激素（ACTH）释放，ACTH 的目标器官是肾上腺皮质，其中ACTH 调节皮质醇释放，从而对各个器官产生一些下游的负面生理影响[13]。应激期间生殖性能受到抑制是由于皮质醇在下丘脑-垂体轴上的负反馈导致黄体生成激素脉冲频率降低，进而导致会抑制卵泡的生长，排卵率和受精[14]。Macedo 等[15]观察到受到应激刺激的动物相比于未受刺激的动物，其胚胎存活率降低19%。可见，应激会使雌性哺乳动物繁殖系统出现季节性排卵、反射性排卵等各种现象[16]。

营养水平对绵羊的排卵率和产羔率有重要作用，排卵率与母羊的体尺体重有关。季斐等[7]研究发现萨福克羊体重与冲胚获得的回收胚胎数呈显著正相关，同时采食量可能也是影响卵泡、胚胎生长速率的关键因素。营养不足会导致家畜生殖器官发育受阻和机能发生紊乱，延迟青年母畜的初情期，导致成年母畜发情抑制、发情不规律等情况发生，甚至会增加早期胚胎和初生仔畜的死亡率；而营养过剩会引起母畜卵巢、输卵管及子宫等脂肪沉积过厚，不利于卵泡发育、排卵、受精及受精卵的运行，也阻碍了妊娠子宫的扩张和胎儿发育[17]。减少应激反应对超数排卵操作十分重要，在实际中FSH 减量法应用较多，效果稳定，但由于注射操作繁琐且需要多次注射和多次保定都可能会引起应激反应产生，存在一定风险[18]。超数排卵在制定FSH 递减法时应根据激素产品选择使用浓度，并且需要根据不同品种对外源性激素敏感度的不同来进行药品和总剂量的选择。在母羊保定过程中，采用一些降低母羊应激反应的设施和措施，适当避开极端天气的干扰等，能有效降低母羊应激反应给超数排卵结果带来的影响。

本研究还建立了血清中蛋白含量对回收总卵数的最优回归方程，通过逐步回归发现入选的自变量仅有总蛋白，参考黄琳琳[19]研究中用到的Curve Estimation 方法，本研究构建出总蛋白对回收总卵数的不同回归模型，根据决策系数R2越接近1，模型越接近真实值的原则[20]，得到最优回归模型y=137.571－2.971x+0.016x2，为生产中利用血清生理指标评估回收总卵数奠定理论基础。

4 结 论

本研究结果表明，萨福克羊血清中总蛋白、白蛋白浓度与回收总卵数、可用胚胎数均存在极显著负相关关系，球蛋白浓度与回收总卵数存在极显著负相关关系，高回收总卵数组的总蛋白、白蛋白、球蛋白浓度极显著低于低回收总卵数组，说明高回收总卵数组具有较低的蛋白浓度。总蛋白、球蛋白等血清生理指标升高会导致超数排卵效果下降，故而要避免引起羊只产生炎症反应或过大的应激反应，以减少免疫球蛋白增加。同时本研究建立了最优回归模型y=137.571－2.971x+0.016x2，可利用血清中总蛋白评估回收总卵数。