缝隙连接蛋白CX43表达下降导致EPCs功能减退

徐颖佳，朱振华，吴春城，任国庆，孙文文

（1.吴江区第五人民医院心血管内科，江苏 苏州 215200；2.吴江区第五人民医院消化内科，江苏 苏州 215200；3.江苏大学附属医院急诊科，江苏 镇江 212001）

当前，经动脉粥样硬化疾病已经严重影响到人们的身体健康，对于该疾病需要进一步研究分析，从而能在身体出现不适的时候能够及时去医院接受治疗，利于疾病能早发现和有效治疗，患者预后效果好；在患者诊断分析病情期间，临床医生需要充分的掌握缝隙连接通道，这样才能有效的把握患者神经系统传递信号情况，有效掌握患者的病情情况，因此，该文的研究将着重讨论缝隙连接蛋白CX43表达水平的变化情况与EPCs功能减退的相关性，研究内容具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

挑选了我院从2016年—2017年诊断治疗经动脉粥样硬化的50名患者作为研究对象，根据研究对象的缝隙连接蛋白CX43的表达水平将患者划分为A、B两组。A组患者为缝隙连接蛋白CX43高表达，B组患者为缝隙连接蛋白CX43低表达。A组病例共计25例，其中男性患者13例，女性患者12例，年龄中位数为（78.29±2.56）岁；B组病例总计为25例，男性患者14名、女性患者11名，年龄中位数为（76.90±2.25）岁，这对两组患者的疾病资料进行研究总结分析并进行比较，差异较小，可以比较两组的数据，且文中的研究已与患者及家属沟通，并签署了知情同意书，医院的伦理委员会审核了该试验，可以实施。

1.2 方法

予以患者肘部静脉采血处理，通过密度梯度离心法获取单核细胞，培养采集贴壁细胞，予以激光共聚焦显微镜鉴定，评估两组的增殖能力、迁移能力、粘附能力。①增殖能力实验：收集贴壁细胞并进行消化，96孔细胞培养板使用纤维来与蛋白连接，接种内皮细胞，每个标本会将3个复孔设置为对照，采用CO2培养箱来运转培养板，然后在37℃、5%CO2且湿度适宜的环境下培养24小时，再在每一个孔中添加20μL二苯基四氮唑溴盐液体，继续培养4小时，然后清除上清液，滴加150μL二甲基亚砜到每个孔中，使用振荡器充分震荡10 min后，下490 nm波长的酶标仪下进行检测吸光度。②迁移能力试验：收集贴壁细胞并进行消化，将50μg/L血管内皮生长因子、200μL培养液添加到Boyden小室的下室，数量一致的内皮细胞注入上室，然后在37℃、5%CO2且湿度适宜的环境下培养24小时；刮去滤膜上没有移动的细胞，在使用甲醇3～5 min来固定，DAPI染色10分钟，清洗蒸馏水，晾干后放在200倍显微镜下观察迁徙到低层的细胞。③粘附能力实验：收集贴壁细胞并进行消化，96孔细胞培养板使用纤维来与蛋白连接，接种数量一致的内皮细胞，然后在37℃、5%CO2且湿度适宜的环境下培养半小时，随机挑选9个贴壁细胞，然后放在200倍荧光显微镜下进行计数。

1.3 统计学处理

本文中获得的所有研究数据信息均使用SPSS 20.0统计学软件来分析，计量资料是t检验，采用±s表示；计数资料x2检验，如果结果为P＜0.05，则说明研究数据之间的差异较大，有统计学意义。

2 结 果

依据患者缝隙连接蛋白CX43的表达水平将入选患者划分为A、B两组。A组患者为缝隙连接蛋白CX43高表达，B组患者为缝隙连接蛋白CX43低表达。对两组患者的增殖细胞数目、迁移细胞数目、黏附细胞数目进行对比分析，数据结果差别较大，具有统计学意义（P＜0.05），A、B两组的数据结果进行比较后，可以清楚看到B组增殖细胞数目、迁移细胞数目、黏附细胞数目明显下降（P＜0.05）。如表1所示。

表1 两组患者的EPCs功能对比

3 讨 论

针对动脉粥样硬化发展存在的危险因素实施归纳，包含的主要有：血流动力学紊乱，高血脂、炎症因子等，患者的机体在这些因素的作用下，就会出现动脉粥样硬化，可能还会出现其他疾病，因此，临床医生在对患者实施诊断治疗的时候，还要重点分析研究这些影响因素，看能否找到一种或多种造成动脉粥样硬化的因素，以便制定更加科学有效的治疗方案，让患者的病情可以获得有效的干预和控制。正常的血管内皮细胞表达的主要方式为CX37和CX40，CX43一般位于血管中特殊的位置，比如血管连接处，伴随AS的发展，内皮细胞的表现形式会慢慢失去CX37和CX40，而CX43表达却不断增加。CX43有间接造成动脉粥样硬化的作用；CX43表达降低50%能够明显的将有LDL受体缺陷小鼠粥样斑块处的巨噬细胞和T细胞数目减少，阻止斑块形成，内皮细胞GJIC不仅能选择性的抑制CX43，还能抑制白细胞的粘附。选择性的将CX43基因的内皮细胞进行剔除，就会表现出VCAM-1、ICAM-1低表达的情况，从而降低单核与内皮细胞的迁移和黏附。这次研究发现，对两组患者的增殖细胞数目、迁移细胞数目、黏附细胞数目进行组间对比，差异存在统计学意义，与A组相比较，B组增殖细胞数目、迁移细胞数目、黏附细胞数目明显下降。

综上所述，缝隙连接蛋白CX43表达下降导致EPCs功能减退。