规模化猪场采样检测流程

迂斌，曾荣，张运强，颜运秋

（1.浙江惠嘉生物科技股份有限公司，浙江 湖州 313000；2.四川省成都市高新区动物防疫检疫监督所，四川 成都 610041；3.湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128）

1 送检样品分类与采样要求

1.1 唾液检测 适用于大栏饲养检测，选择吸水储水能力强的全麻粗绳，准备一次性手套、自封袋若干。将麻绳一端固定在围栏上，另一端与猪头等高即可，在栏外唤醒猪只，略微晃动棉绳吸引猪只咬食，过段时间后戴上一次性手套将麻绳取下，拧压，将挤出的唾液存放于自封袋内，密封送检。每次可检测一个大栏，需要对多个大栏检测时，每个大栏应至少使用一根麻绳。宜在进食前2 h或进食后2 h采样。

1.2 猪鼻拭子或口腔液样品检测 保定猪只，先将猪鼻孔周围擦干净，再使用新棉签与猪鼻中隔呈45°角轻轻插入，与鼻中隔平行方向插入约2 cm，轻轻转动棉签一周，停2～3 s，再轻轻转动棉签一周，拔出棉签，置于加有无菌生理盐水的离心管中（确保生理盐水能浸没棉头），密封冷藏送检。

1.3 组织检测 要求在病猪死后即行采样，最好不超过2h。剖开胸腹后取脾、淋巴结、肺等，取病变严重组织100g左右即可。如非必要，对于异常猪只不推荐解剖取组织样，以免造成不必要的污染。

1.4 血液检测 血样采集后及时分离血清，每份血清样品不低于500 μL。

1.5 棉拭子检测 以棉拭子涂抹采样表面为主，取样面积以5 cm×5 cm为准。取样时用无菌生理盐水湿润过的干净棉拭子边旋转边涂抹采样面，随后掰断棉签将前端棉花部分浸泡在含有无菌生理盐水的离心管内，盖紧后用自封袋封存，尽快送检。

所有采样必须戴手套操作，不可直接接触采样对象。麻绳采样时，采一栏换一副手套；鼻腔、肛门或全血采样时，采一头猪换一副手套。

2 不同检测需求的样品采集

2.1 正常猪群检测 对种猪场及肥猪场整个猪群的抗体情况进行普查时，可采集血样检测。对于大栏饲养生猪，可以采集唾液检测。

2.2 异常猪只检测 可采集血样进行检测。采集异常猪只的血样时，应戴上一次性手套，采样后迅速用棉球按压止血。采集中使用的手套、棉球或纸巾都需要统一收集后做无害化处理。也可采集口腔液或鼻腔液样本进行检测。异常猪只的血样检测需经生物安全总监同意方可进行。

2.3 猪场检测 采样区域包含猪场内外路面、门卫脏区和净区表面、进场物料、人员外露皮肤和衣物表面、料塔表面、猪舍栏位（产床、定位栏或大栏地面等）、转猪台栏位和地面、病死猪冷库内表面、中转平台、场内运输车辆、洗澡间、食堂、住宿区、卫生间。正常场区每周采样一次，异常场区或清栏待进猪场区在空舍后3个月开始每14 d取样一次。每个位置表面至少取2个样本，大单元或高风险区（如转猪台、中转平台）应取更多样本。

2.4 环境检测 主要检测饲料、水样、泥土等。正常场区每周采样一次，异常场区或清栏待进猪场区在空舍后3 个月开始每14 d 取样一次。其中，饲料应覆盖各种料号，从料塔下直接采集，每次采集100 g，装于自封袋内；水样应从猪场的水泵房或供水主管道采集，选用干净灭菌处理过的塑料瓶等收集100 mL，密封送检；对场区内生物坑外围泥土检测时，应采集地表10 g左右泥沙，装于自封袋内送检。此外，对饲料厂原料的采样应每月一次。

2.5 车辆检测 车辆检测以棉拭子采样为主，洗消中心可配合3M的ATP荧光检测仪对洗消效果进行检验。车辆采样重点采集转猪车、饲料车、配送车辆，重点采集部位为车轮（与地面接触的车轮面），转猪车还应重点采集车厢内表面。每辆车洗消烘干或晾干后，需要采集车轮样品2份，驾驶室地垫1 份，转猪车还需要增加车厢内表面棉拭子2 份。所有车辆都需要采样，每周抽检其中各类车辆的1份代表检测，如1份饲料车和1份转猪车等。

3 采样保存及运输注意事项

物品准备：精液运输箱、生理盐水、一次性注射器、采样棉签、一次性手套、记号笔、采样管、储物盒、冰块、自封袋。以上物品要分区摆放整齐。

采样保存：采完样的采样管要做好标记，统一放到自封袋里边，且应与没有用过的采样物品分区摆放，防止污染。

注意事项：每周二、周五定期对采样箱内外壁清洗与消毒；箱子内不要放置太多的物品；精液运输箱内要放置冰块，如果长途运输的话需要放置2～3 块冰块，保证箱子中的温度保持在2～8 ℃。冰块用完后及时消毒，并放冰箱中保持冷冻状态，方便下次使用。

4 采样后实验室及器材的消毒

器材消毒：操作台、移液器、离心机每次使用后用75%酒精擦拭或者用1%次氯酸钠擦拭消毒或浸泡。

废弃物消毒：使用后的所有废弃物（样本和枪头）全部使用5%火碱溶液浸泡30 min。

实验室消毒：每天确保实验室通风，房间地面使用1∶200 过硫酸氢钾或戊二醛擦拭消毒，每次实验结束后使用紫外线灯消毒30 min，存放样品的冰箱应每周用75%酒精擦拭消毒2次。