外周血Blimp1、IFN-γ、IL-10水平与重症肺结核的相关性分析

黄健 李明瑛 牛文一 孙冰 韩伟 崔秀琴★

肺结核（Pulmonary tuberculosis，PTB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起的一种临床常见呼吸系统疾病，占全身结核病的80%～90%［1］。研究表明PTB 的发生不仅会对患者肺部造成严重感染，若未及时治疗，发展为重症PTB，还会导致患者因多器官衰竭而死亡［2］。虽通过外科手术、药物治疗等可在一定程度上提高重症PTB 患者的生存率，但仍有部分患者因多重耐药结核菌、PTB 认知度不够等因素导致疾病的复发或者治疗失败［3］。因此，了解影响PTB 进展与预后的主要影响因素对于临床治疗方案的调整以及预后的改善十分关键。近年来发现细胞免疫作用的降低可使巨噬细胞的抗菌活性降低，减弱结核病的免疫应答，进而加速疾病的发展［4］。其中γ-干扰素（Interferon-gamma，IFN-γ）、白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）是抗结核免疫重要细胞因子，在PTB 感染的控制中具有重要作用［5-6］，而B 淋巴细胞诱导成熟蛋白1（B lymphocyte induced maturation protein-1，Blimp1）可通过调控T 细胞的增殖分化进而直接参与PTB 的发生发展［7］。但目前关于上述三种因子与重症PTB 预后相关性的研究在国内鲜少报道，基于此，本研究将对外周血单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与重症肺结核患者预后的相关性进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本院2018年1月至2019年3月结核内科收治的92 例重症肺结核患者的临床资料，作为研究组。纳入标准：①符合肺结核诊断标准［8］，且胸部影像学检查提示肺部病变面积超过2 个肺野，出现空洞或痰结核菌阳性，或合并严重并发症；②重症监护时间在24 h 以上；③病例及随访资料完整；④采血前1 个月内未应用免疫抑制剂或糖皮质激素治疗。排除标准：①收治后24 h 内死亡者；②合并恶性肿瘤以及传染性疾病者；③肺部伴有其他疾病者；④长期应用免疫抑制剂者；⑤合并严重精神疾病者。其中男48 例，女44 例；平均（51.98±5.36）岁；急性生理与慢性健康评分（Acute physiology andchronic health evaluation-Ⅱ，APACHE-Ⅱ）［9］为16～25 分，平均（21.83±3.34）分；多器官功能障碍评分（Multiple organ dysfunction score，MODS）［10］为2～5 分，平均（3.32±1.15）分。另选择同期来本院进行检查的42 例健康人作为对照组，其X 线胸片、结核菌素试验均未见异常情况，且排除传染性疾病和糖尿病等影响免疫功能的疾病。其中男22 例，女20 例；平均（50.94±5.72）岁。两组研究对象性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经本院伦理委员会审核通过，受试者知情并签署知情同意书。

1.2 方法

研究组患者于入院次日清晨采集空腹外周静脉血2 mL，对照组于体检当日采集空腹外周静脉血2 mL。经离心分离后，取上层清液。采用反转录聚合酶链式反应（Reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）法检测外周血Blimp1 水平，试剂盒由上海联迈生物工程有限公司提供。采用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测血清IFN-γ、IL-10水平，试剂盒由上海一研生物科技有限公司提供。收集所有研究组患者临床资料，包括性别、年龄、APACHE-Ⅱ、MODS 评分等资料，比较不同临床特点患者外周血Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平；研究组患者均进行1年电话、复诊、微信等随访调查，以肺结核复发或者患者死亡作为预后差，其余为预后良好，比较两组患者上述因子水平。

1.3 统计学分析

使用SPSS 20.0 软件进行统计分析。计量资料以（±s）表示，行t检验；采用Cox 风险回归模型筛选影响PTB 预后的危险因素，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 入院时两组Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平比较

研究组患者Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 研究组患者Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与临床各参数的关系

研究组不同性别、年龄患者Blimp1、IFN-γ、IL-10水平比较差异无统计学意义（P＞0.05），APACHE-Ⅱ评分≥21 分、MODS 评分≥5 分和预后差的患者Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平显著高于APACHE-Ⅱ评分＜21 分、MODS 评分＜5 分和预后良好患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 入院时研究组和对照组Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平比较（±s）Table 1 Comparison of blimp 1，IFN-γ and IL-10 levels between study group and control group at admission（±s）

表1 入院时研究组和对照组Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平比较（±s）Table 1 Comparison of blimp 1，IFN-γ and IL-10 levels between study group and control group at admission（±s）

分组研究组对照组t 值P 值Blimp1（相对比值）5.16±1.21 1.51±0.62 18.449 0.000 IFN-γ（pg/mL）113.53±15.38 68.41±6.15 18.325 0.000 IL-10（pg/mL）143.95±31.69 65.33±14.74 15.316 0.000

2.3 重症肺结核患者预后影响因素Cox 回归分析

单因素以及多因素Cox 回归分析均证实高Blimp1、高IFN-γ、高IL-10、APACHE-Ⅱ评分≥21分和MODS 评分≥5 分均是导致重症肺结核患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。见表3。

表2 研究组患者Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与临床各参数的关系（±s）Table 2 Relationship between blimp 1，IFN-γ，IL-10 levels and clinical parameters in Study Group（±s）

表2 研究组患者Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与临床各参数的关系（±s）Table 2 Relationship between blimp 1，IFN-γ，IL-10 levels and clinical parameters in Study Group（±s）

注：与APACHE-Ⅱ评分≥21 分组比较，aP＜0.05；与MODS 评分≥5 分组比较，bP＜0.05；与预后差组比较，cP＜0.05。

资料性别年龄APACHE-Ⅱ评分MODS 评分预后n男女＜50 岁≥50 岁＜21 分≥21 分＜5 分≥5 分良好差48 44 57 35 64 28 67 25 70 22 Blimp1（相对比值）5.24±1.28 5.08±1.17 4.98±1.53 5.35±1.02 4.78±1.14a 5.93±1.42 4.68±1.39b 6.24±1.07 4.63±1.32c 6.97±1.12 IFN-γ（pg/mL）114.28±16.49 112.67±14.28 111.89±20.62 115.38±10.58 108.48±19.27a 128.04±11.37 107.98±18.33b 130.28±12.40 104.39±17.71c 133.36±10.05 IL-10（pg/mL）146.26±35.28 140.78±28.47 141.74±34.08 145.29±27.49 139.18±36.33a 153.86±28.79 138.48±35.51b 152.69±29.43 135.64±34.42c 161.92±29.16

表3 重症肺结核患者预后影响因素Cox 回归分析Table 3 Cox regression analysis of prognostic factors in patients with severe pulmonary tuberculosis

3 讨论

人体对结核的免疫主要是细胞免疫，近年来体液免疫在结核免疫中的作用也受到进一步关注，现阶段临床已发现较多的调控机体免疫过程的转录因子。Blimp1 作为浆细胞的主要调控因子，国内有研究表明其高表达水平可加剧疾病的发生发展［11］。临床研究表明PTB 的发生、发展除与细菌数量和毒性大小有关外，还与机体细胞免疫强弱有关，患者肺部感染病原菌后，常伴有免疫功能紊乱现象，从而导致细胞因子水平异常［12］。其中IFN-γ 是一种巨噬细胞活化因子，主要来自于活化T 细胞、自然杀伤细胞和NK 细胞，既往研究表明该因子具有抗病毒、免疫调节与抗肿瘤特性［13］。而IL-10 是一种免疫调节性细胞因子，可对机体炎症反应产生抑制作用，同时可调控免疫细胞的增殖分化，有研究显示该因子水平的高表达可作为PTB 的辅助诊断指标［14］。现阶段国内研究多注重于研究上述因子对于PTB 的诊断意义，而对于其与重症PTB 患者预后相关性的研究较为少见。

本研究提示重症PTB患者外周血Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平呈明显高表达。国内袁春晖等人［15］研究表明PTB 患者Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平显著高于健康人，国外Abebe 等人［16］研究也表明IFN-γ、IL-10水平是临床TB 的标志物，均与本文研究结果相一致。Dorhoi 等人［14］研究表明结核病的发展与细胞免疫、体液免疫的共同作用有关，机体在感染MTB 后，全身炎症反应会迅速被激活，且重症PTB 患者体内炎症反应更为活跃，引起IL-10 水平的大量升高；Blimp1 作为调控体液免疫的重要因子，通过促进浆细胞的分化发挥以达到抗感染作用，故会引起Blimp1 水平的高表达。此外MTB 感染后，机体为防止结核杆菌的感染会分泌IFN-γ 来抑制MTB 的增殖，从而导致患者体内IFN-γ 呈高表达状态。

此外，本研究对重症PTB 患者上述因子水平与临床参数的关系进行比较分析，结果表明外周血Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平与患者疾病发生、发展以及预后存在一定的联系。进一步分析影响重症PTB 患者不良预后的因素，结果发现高Blimp1、高IFN-γ、高IL-10、APACHE-Ⅱ评分≥21 分 和MODS 评分≥5 分均是导致重症肺结核患者预后不良的独立危险因素，提示高Blimp1、高IFN-γ、高IL-10 与重症PTB 患者不良预后密切相关。章敏等人［17］研究也表明外周血IFN-γ 和IL-10 水平的异常表达对于重症PTB 患者的死亡预后具有一定的预测价值，与本研究结果相类似。此外，IFN-γ和Blimp1 的共同作用会破坏外周血T 细胞亚群的紊乱，从而破坏外周免疫耐受性，有利于MTB 的扩散，促进疾病进展，导致不良预后。但目前国内对于IFN-γ 和Blimp1 水平的高表达对重症PTB 预后影响的研究尚未见报道，其具体作用机制仍有待于进一步研究。

综上所述，重症PTB 患者外周血单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平呈高表达状态，且其高表达与预后密切相关。