巨细胞病毒性疾病患儿尿HCMV-DNA水平、并发症及更昔洛韦治疗后转归分析

赵代艳 苏爱芳 郭长根

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）是最大动物病毒之一，属于β 疱疹病毒亚科，因其进入细胞后会导致细胞增大而得名。HCMV在人群中感染广泛，且多呈隐性感染，潜伏部位多为唾液腺、乳腺、肾脏等［1］，能够随着唾液、乳汁、尿液等排出。多数免疫正常个体HCMV 感染无症状，但是对于免疫抑制个体及婴幼儿，一旦发生感染则可出现明显病症，尤其是新生儿，后期可出现智力低下、感觉神经性耳聋等后遗症［2-3］。因HCMV 感染对婴幼儿健康危害较大，可引起多种并发症，需及早诊治以改善患儿预后［4］。HCMV 为DNA 病毒临床可通过检测HCMV-DNA 以诊治HCMV 感染。基于以上所述，本研究拟观察HCMV 感染性疾病患儿尿HCMV-DNA 水平和并发症，并分析更昔洛韦治疗后转归情况，以期为HCMV 感染性疾病患儿的临床诊治提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2019年9月本院收治的70 例HCMV 感染性疾病患儿为研究对象，患儿均符合HCMV 感染诊断标准［5］，可见黄疸、发热、腹泻、肝脾肿大等症状，排除合并先天染色体疾病、合并非HCMV 感染性疾病、合并缺血性脑病、胆红素脑病等脑疾病。70 例患儿中男39 例，女31例；年龄为1～12 个月，平均年龄（4.87±1.59）个月；产期：早产儿4 例，足月儿66 例；生产方式：顺产34 例，剖宫产36 例；喂养方式：母乳喂养及混合喂养45 例，人工喂养25 例。另选择35 例健康幼儿作为对照，其中男20 例，女15 例；年龄为1～12 个月，平均年龄（4.95±1.61）个月；产期：早产儿1 例，足月儿34 例；生产方式：顺产19 例，剖宫产16 例；喂养方式：母乳喂养及混合喂养24 例，人工喂养11 例。两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获得本院医学伦理委员会批准，受检者家属均知情了解并签署了知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 HCMV-DNA 检测

采集两组儿童新鲜尿液2 mL，于-20℃环境中保存待用。以12 000 r/min 速率将尿液在TGL-16B 高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）上离心5 min，除去上清液后通过Ficoll 密度梯度离心法获取PBMC，加入DNA 裂解液混匀振荡10 min，在100℃环境中静置10 min，充分裂解后再次以12 000 r/min 速率离心5 min，取上清液5 μL 作为反应模板，进行PCR 扩增（Mastercycler PCR 扩增仪由德国Eppendorf 公司提供）。扩增引物序列：上游5′-TGGGCATCGACTGACGAGCA-3′，下游5′-TTTAGCAGTCTGCATAGCCT-3′。向HCMVPCR 反应管中加入经过处理的5 μL 反应模版，离心1 min；将反应管加入定量PCR 仪器孔样品反应槽内，按对应顺序设置阴性质控品、阳性定量质控参考品（梯度108～104copies/mL）及待检测标本，并设置样品名称、标记荧光基因种类及循环条件，扩增条件：93℃2 min；预变性：93℃50 s、55℃60 s，循环数10 个；93℃30 s、55℃45 s，循环数30 个，进行PCR 扩增，依据标准曲线分析HCMV-DNA拷贝数，HCMV-DNA 试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，HCMV-DNA＞2.0 log10copies/L为阳性。

1.2.2 治疗

HCMV 感染性疾病患儿均予以护肝利胆、降酶及氧疗等基础治疗，入院检查后予以更昔洛韦（山东凤凰制药股份有限公司，国药准字H20051937）静脉滴注，诱导期使用剂量：每次5 mg/kg 加入5%葡萄糖溶液中静滴，2 次/d，治疗2周；之后进行维持治疗，每次5 mg/kg 加入5%葡萄糖溶液中静滴，1 次/d，治疗2 周。

1.2.3 肝功能指标检测

分别于治疗前、治疗后抽取患儿股静脉血1～2 mL，离心后分离血清，检测肝功能指标，包括总胆红素（total bilirubin，TBIL）、直接胆红素（direct bilirubin，DBIL）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP），检测仪器为德国罗氏公司cobas 8000全自动生化分析仪。

1.3 统计学分析

运用SPSS 18.0 软件进行统计分析，计量资料以（±s）描述，LSD-t 检验行行两组间比较；计数资料用n（%）表示，χ2检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 阳性率比较

观察组尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 阳性率均显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 观察组与对照组尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 阳性率比较（±s）Table 1 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate between the observation group and control group（±s）

表1 观察组与对照组尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 阳性率比较（±s）Table 1 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate between the observation group and control group（±s）

组别观察组对照组t/χ2值P 值n 70 35尿HCMV-DNA 水平（log10 copies/L）2.45±0.38 1.01±0.27 20.013＜0.001尿HCMV-DNA阳性率（%）43（61.43）0（0.00）33.915＜0.001

2.2 HCMV 感染性疾病患儿并发症发生情况

HCMV 感染性疾病患儿并发症可见贫血、肺炎、畸形、视网膜炎、脑炎，见表2。

表2 HCMV 感染性疾病患儿并发症发生情况Table 2 Complications in children with HCMV infection

2.3 HCMV 感染性疾病患儿治疗前后尿HCMVDNA 水平及HCMV-DNA 阳性率比较

治疗后，HCMV 感染性疾病患儿尿HCMVDNA 水平及HCMV-DNA 阳性率均较治疗前显著降低，差异具有统计学意义（P均＜0.05），见表3。

表3 HCMV 感染性疾病患儿治疗前后尿HCMV-DNA水平及HCMV-DNA 阳性率比较Table 3 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate of children with HCMV infectious diseases before and after treatment

2.4 HCMV 感染性疾病患儿治疗前后肝功能指标比较

治疗后，HCMV 感染性疾病患儿TBIL、DBIL、ALT 和ALP 水平均较治疗前显著降低，差异具有统计学意义（P均＜0.05），见表4。

表4 HCMV 感染性疾病患儿治疗前后肝功能指标比较（±s）Table 4 Comparison of liver function indexes of children with HCMV infection before and after treatment（±s）

表4 HCMV 感染性疾病患儿治疗前后肝功能指标比较（±s）Table 4 Comparison of liver function indexes of children with HCMV infection before and after treatment（±s）

组别治疗前治疗后t 值P 值n 70 70 TBIL（μmol/L）200.75±41.23 67.80±15.76 25.201＜0.001 DBIL（μmol/L）51.42±10.09 12.37±2.95 31.079＜0.001 ALT（U/L）318.65±52.76 68.43±17.14 37.738＜0.001 ALP（U/L）513.29±81.45 385.46±57.30 10.739＜0.001

3 讨论

HCMV 存在明显种属特异性，在人类中传播较广。我国为HCMV 感染高发区，相关资料显示，国内HCMV 平均感染率可高达90%［6］。HCMV 能够通过飞沫、尿液等体液传播，其进入人体造成原发性感染后会潜伏于组织内，形成终身感染，多数情况下不会出现明显症状，但当隐性感染者免疫功能下降时，体内HCMV 也随之活跃而导致出现症状表现，成为显性感染［7-8］。对于胎儿和婴幼儿而言，母体感染HCMV 后会经胎盘、产道、乳汁等途径将病毒传至其体内而导致其感染病毒，而HCMV 感染会累及多个脏器，如心、肝、肺、肾等，引起多种并发症，危害大。因此，及早发现和早期治疗，对降低疾病造成的损害、改善患儿预后具有重要意义。

荧光定量PCR 扩增技术对HCMV-DNA 的定量检测在HCMV 感染早期诊断中有重要价值，可降低肝、肺、肾等器官并发症发生率，提高临床诊断准确率，减少误诊和漏诊［9］。本次研究对HCMV 感染性疾病患儿进行尿HCMV-DNA 检测，并以健康婴幼儿为对照，结果显示，观察组尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 阳性率均显著高于对照组，表明HCMV 感染性疾病患儿尿HCMV-DNA 表达水平较高，在诊断婴幼儿HCMV感染中具有一定价值。吴德等［10］进行动物实验研究，结果显示HCMV 先天性感染仔鼠可见明显空间学习记忆功能障碍。王泽民［11］研究指出，小儿HCMV 感染是其血液系统受累的中医病因学基础之一，能够导致患儿骨髓造血功能异常，可引发相关性血液系统疾病。本次研究对HCMV 感染性疾病患儿并发症进行观察统计，显示其并发症可见贫血、肺炎、畸形、视网膜炎、脑炎，所占比例依次为34.29%、24.29%、8.57%、7.14%、7.14%，可见HCMV 感染能够引起血液系统、肺、脑等组织器官病变，且并发症发生率较高。

目前临床治疗HCMV 感染性疾病包括基础对症治疗和抗感染治疗，更昔洛韦是抗病毒药物，能够抑制疱疹病毒DNA 合成复制，具体作用机制为竞争性抑制脱氧鸟苷三价磷酸盐和DNA 聚合酶结合，抑制病毒DNA 合成；同时丙氧鸟苷三价磷酸盐能够和病毒DNA 结合，终止病毒DNA 链延长，继而抑制病毒复制［12-13］。更昔洛韦在单纯疱疹病毒和HCMV 所导致的感染中具有较好治疗效果，张佳佳等［14］研究显示，更昔洛韦治疗人类疱疹病毒4 型感染患儿显效率为60%，可以明显缩短患儿住院时间，安全有效。本次研究对HCMV 感染性疾病患儿予以更昔洛韦治疗，结果显示治疗后HCMV 感染性疾病患儿尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 阳性率均较治疗前显著降低，提示更昔洛韦可以明显抑制HCMV-DNA 复制，可控制HCMV 感染。肝功能损害是HCMV 感染重要表现之一，结果中治疗后HCMV 感染性疾病患儿TBIL、DBIL、ALT 和ALP 水平均较治疗前显著降低，与李娟等人［15］研究结果相符，表明更昔洛韦可通过抑制HCMV-DNA 复制减轻肝损伤，使肝功能得到恢复。

综上所述，HCMV 感染性疾病患儿尿HCMVDNA 水平较高，容易发生多种并发症，如贫血、肺炎、视网膜炎等，对HCMV 感染性疾病患儿予以更昔洛韦治疗，不但能够有效降低其尿HCMV-DNA水平，且可以较好改善患儿肝功能。