动物尿液中β-受体激动剂酶联免疫检测试剂盒使用通则的建立

赵立军，姚顺凯，张静，林顺全，冯波，李云

（1.四川省饲料工作总站，四川 成都 610041；2.四川省若尔盖县动植物产品检验检疫站，四川 若尔盖 624500）

β-受体激动剂又叫β-兴奋剂，也称“瘦肉精”，临床上常被用作止喘药，因其具有加快畜禽生长、降低动物脂肪含量、提高瘦肉率等作用，在养殖中往往被非法使用［1-3］。β-受体激动剂会在动物组织中形成蓄积性残留，通过食物链进入人体，对人的肝、肾等内脏器官产生毒副作用，造成肌肉震颤、心悸、眩晕、恶心等症状［4-5］。早在2002 年我国就明确将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、特布他林等β-受体激动剂列为养殖环节禁用物质。

为保证动物产品质量安全，国家每年都将β-受体激动剂类物质列为重点监控对象。尽管如此，仍有一些不法养殖场户受利益驱使，违法使用“瘦肉精”类物质，导致有毒有害畜产品流向市场、进入百姓餐桌。因此，加强对动物尿液中β-受体激动剂类物质的快速准确检测十分必要［6-7］。目前，国内外关于动物尿液中β-受体激动剂类药物多残留分析一般采用气相色谱质谱联用技术［8-9］和液相色谱质谱联用技术［10-11］等方法。该方法具有灵敏度高和准确度高的优点，但需要昂贵的仪器设备和专业的技术人员，检测成本高，无法满足基层检测机构对样品进行批量和快速检测的需要［12-13］。

近年来，酶联免疫检测技术在国内外农产品质量安全监测中得到广泛普及，其所用设备成本低、操作简便、灵敏度高［14-15］。商品化酶联免疫检测试剂盒的检测速度快，可实现样品的批量化检测。目前国内市场上针对动物尿液中β-受体激动剂的酶联免疫检测试剂盒种类繁多，但产品质量参差不齐。操作人员由于对产品性质、使用方法、注意事项等关键环节理解的偏差，往往造成检测结果不正确、假阳性率高，可能导致阳性样品流入市场［16］。

本文建立了酶联免疫检测试剂盒的使用通则，将有效指导检验检测机构采购和验收该类产品，规范操作人员的关键控制点，从而保障基层农产品样品的批量检测和准确检测。

1 术语与定义

下列术语和定义适用于本使用通则。

1.1 酶联免疫检测试剂盒 基于酶联免疫技术研发的可用于检测样品中某种或某几种化合物具体含量的产品，由多种化学或生物制品（如抗原、抗体、酶结合物、稀释缓冲液等）组合而成。

1.2 灵敏度 试剂盒可从样品中检测出待测物的最低浓度，用检测限来表示。

1.3 准确度 测定值与真实值的接近程度，表示试剂盒分析结果的准确性，用添加回收率来表示。

1.4 精密度 在限定条件下，用某种分析方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度，表示分析结果的重现性，用变异系数表示。

1.5 定量限 符合准确度和精密度要求的试剂盒可定量检测的浓度。

2 产品质量要求

2.1 外观要求 试剂盒外包装应洁净、无破损；内包装应无破损、无裂痕、无渗漏。标签清晰，包括品名、批号、保存条件、检测限、有效期信息。盒内各组分完整，与说明书描述一致。

2.2 标准曲线 线性相关系数r≥0.99；拐点数≤2个。

2.3 灵敏度 灵敏度与说明书标注的灵敏度一致。

2.4 准确度 准确度范围在60%～120%。

2.5 精密度 批内变异系数≤15%；批间变异系数≤20%。

3 使用方法

3.1 样品处理 若待检动物尿液澄清，则直接取样品进行检测；若尿液浑浊，需过滤或离心后取上清液进行检测。

3.2 样品检测 取出所需酶标板条和试剂置于平整的台面上，放置至说明书要求的温度，并按照说明书描述进行操作，同时做添加回收率实验。

3.3 添加回收率实验 将空白样品添加为各β-受体激动剂定量限1 倍或2 倍的浓度，制备成阳性样品。取两份同一浓度样品按说明书描述进行实验操作。按标准曲线计算后，得出添加回收率，其相对偏差应不大于15%。

3.4 结果分析

3.4.1 百分吸光度的计算 百分吸光度等于标准品或样品的吸光度平均值（双孔）除以零标准溶液的吸光度平均值，再乘以100%。

3.4.2 标准曲线的绘制 以标准品百分吸光度为纵坐标，以标准品系列浓度的对数为横坐标，绘制标准曲线。

3.4.3 定量分析 将样品百分吸光度代入标准曲线中，计算所对应的β-受体激动剂浓度，再乘以其对应的稀释倍数即为样品中β-受体激动剂药物的实际浓度。实验结果为阳性的样品应经仪器确证方法进行确证。

4 注意事项

4.1 实验开始前应检查试剂盒的保存条件和有效期，仔细阅读产品说明书确认其适用范围，并按要求准备所需器材。检查试剂盒内、外包装是否洁净、完整，标签是否清晰，材料、试剂是否齐全。

4.2 尿液样品应收集在洁净干燥、不含任何防腐剂的塑料杯或玻璃容器中，并及时检测；若不能及时检测，可在2～8 ℃下冷藏保存24 h，若需长期保存需置于-20 ℃以下冷冻，切忌反复冻融。

4.3 尿液样品在检测前需放置至试剂盒说明书要求的温度。

4.4 实验前应将所有试剂和所需板条的温度放置至说明书指定温度，实验环境应配有温控设施，避免阳光直射。

4.5 取出需要数量的板条，将剩余的板条按说明书要求存放。

4.6 实验前须检查各种实验器具是否洁净，避免污染。

4.7 每种试剂使用前均须摇匀，避免接触皮肤。

4.8 实验中必须使用一次性吸头，吸取不同的试剂时应更换吸头。加液时应避免吸头触碰板孔内壁。

4.9 洗板过程中如出现板孔干燥，会造成标准曲线不呈线性、重复性差。因此洗板拍干后应立即进行下一步操作。

4.10 部分产品恒温孵育过程要求避光操作，应将反应板条置于暗处或用盖板膜封住微孔板。

4.11 不得使用不同批号试剂盒中的试剂。

4.12 严格按说明书要求储存试剂盒及未使用的试剂材料。