饲料中沙门氏菌检测技术的研究

王怀超

（濮阳市畜产品质量安全监测检验中心，河南濮阳457000）

在现代畜牧业生产中，饲料内沙门氏菌的存在是严重威胁养殖业健康、可持续发展的一个主要因素，同时影响着社会公共安全。不同的沙门氏菌检测技术各有优点、缺点，应用范畴方面也存在一定差异，只有全面了解这些差异，才能够灵活、正确地采取相应的检测技术，最大限度地控制饲料中沙门氏菌的污染问题。笔者对沙门氏菌进行了简单的介绍，重点分析了检测饲料沙门氏菌的传统培养技术、分子生物学检测技术、免疫学检测技术，以供同行参考。

1 沙门氏菌概述

沙门氏菌以人畜共感染为主要特点，是无荚膜、无芽孢的一种病原菌。从沙门氏菌目前的研究进展来看，已有超过2 000余种沙门氏菌血清型被公布了出来，我国在这方面的工作有很大的贡献和突破，检出300余种不同的沙门氏菌血清型，其中包括10多种国际新型沙门氏菌血清型。饲料一旦被沙门氏菌所污染，则可能传播给人类或者动物，需严格落实针对性的控制措施，重视饲料沙门氏菌的检测工作，才能够避免饲料内出现沙门氏菌，消除饲料产品安全隐患。

2 检测饲料中沙门氏菌的关键技术

2.1 沙门氏菌培养技术

在检测饲料中沙门氏菌时，必须严格按照国际相关标准要求进行，先进行沙门氏菌的培养。常见的培养技术以常规微生物学为基础，通过按以下程序进行。

第一步，液体培养基内的检测样品需先开展预增菌操作，修复其中活性较差的沙门氏菌。

第二步，开展分离纯化和选择性增菌的操作，在两个不同选择性增菌液中分别转接预增菌，开始培养，完成培养后再次分离纯化，通过两种不同选择性琼脂平板开展，鉴定已经纯化好的沙门氏菌疑似菌落。

此过程的鉴定可以通过微生物生化鉴定系统或者商品化生化鉴定专门试剂盒完成。

第三步，采取血清学鉴定方法处理分离好且纯化完成的沙门氏菌疑似菌落，对自凝现象进行排查，针对没有自凝的疑似菌落开展Ⅵ抗原、H抗原、O抗原的检测。

这种传统且常见的沙门氏菌培养检测技术，优势在于无假阳性、准确性高，缺点在于耗时较长，操作程序繁琐，通常整个检测周期在6 d左右。

2.2 主要分子生物学检测技术

目前检测饲料中沙门氏菌的分子生物学检测方法主要包括以下几种。

2.2.1 荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测法

荧光定量PCR技术目前广泛应用，发展速度较快，是深受欢迎的沙门氏菌快速检测技术之一，解决了传统PCR检测过程污染概率大的问题，弥补了假阳性结果出现频率高的不足，体现出了可定量、重复性高、特异性强、灵敏度强等技术优势。在具体检测中多样品的细菌定量和扩增可以同时完成，常见于大批饲料样品的沙门氏菌检测工作，在检测传染病和食源性病原菌方面的作用非常大。

2.2.2 基因芯片检测法

在饲料沙门氏菌检测技术中，基因芯片检测法是一种常见的快速检测方法，利用沙门氏菌毒力因子、抗原和其致病性之间的关系，对肠道内沙门氏菌通过基因芯片进行快速检测，进而完成鉴定未知菌属的工作。

2.2.3 核酸探针检测法

核酸探针检测法已经融入了DNA-RNA杂交检测技术，克服了传统的鼠伤寒沙门氏菌检测技术难题，适用于饲料食品的沙门氏菌检测，探针具有更高的敏感性，通过48 h左右的增菌处理后，在专门实验室内完成检测操作。但因对检测条件要求较高，所以实际推广和应用受到一定阻碍。从该技术研究现状来看，以核酸探针为基础的沙门氏菌比色剂检测技术正在迅速兴起，保持了检测的高敏感性，同时让无辐射检测从不可能变为了有可能。

2.2.4 环介导等温扩增检测法

环介导等温扩增检测法的核酸扩增技术较为新颖、高效，优点在于控制效率高和特异性较强，60～65℃环境下能在60 min内完成扩增，形成白色沉淀副产物，能利用沉淀浊度进行反应结果的判断。

2.3 主要免疫学检测技术

目前饲料中沙门氏菌的免疫学检测方法主要包括以下几种。

2.3.1 免疫胶体金检测法

对样品抗原采取双抗夹心技术进行有效检测，载体为硝酸纤维素膜，原理在于微孔膜具有毛细血管功能。在被检饲料样品内浸入试纸下端，在毛细管作用下的样品会向金标抗体垫过滤并进入，相应抗原与金标抗体进行特异性结合，逐渐渗移向膜条，不会形成抗原抗体复合物，所以检测试纸没有红色反应。这种检测技术常见于环境、饲料、食品中沙门氏菌的检测，具有较高准确性、操作简便的优点，但缺点是需要较高检测成本。

2.3.2 特异性抗体介入检测法

应用特异性抗体介入检测技术进行沙门氏菌检测时，需先在选择性增菌液内添加多克隆抗体，对干扰菌发挥出生长抑制作用，防止干扰后期的选择性分离。相较于一些常规检测方法而言，特异性抗体介入检测技术减少了沙门氏菌假阳性结果的概率，不过也有技术缺点，主要体现在准确性不足、制备繁琐等方面。

2.3.3 斑点酶联免疫吸附检测法

斑点酶联免疫吸附检测法的固相载体为硝酸纤维素膜，反应发生在膜上，抗体或抗原含量的判断依据膜片中央出现的斑点深浅程度进行。斑点酶联免疫吸附检测沙门氏菌方法的优点在于能长期保存检测结果、成本低、操作简单，缺点在于产生假阳性结果概率较大、特异性较低。

2.3.4 乳胶凝集检测法

乳胶凝集检测法检测沙门氏菌的方法属于间接凝集检测试验，惰性载体为聚苯乙烯胶乳微粒（人工合成），表面能对可溶性抗原进行吸附，结合特异性抗体发生凝集现象。此技术优点在于无须特殊仪器、操作简单、可在基层现场进行检测，缺点在于假阴性结果概率较高、敏感性不足。