虎杖苷联合甘草汁对大鼠血清性激素作用及与多囊卵巢综合征的研究

崔亚斌，贾云涛，邬朋格，慕莹莹，李树军，崔琳，丁玉

（黄河科技学院，河南 郑州 450000）

0 引言

多囊卵巢综合征（PCOS）是一种常见的妇科疾病，主要表现为高雄性激素、排卵障碍或月经紊乱和卵巢多囊性改变[1]。多囊卵巢的治疗方式多样，有调整患者生活方式，使用促排卵药物CC（使用不宜超过6个周期）、使用胰岛素增敏剂、使用促性腺激素、进行手术治疗和辅助生殖技术等[2]，但上述治疗方法都有较大的局限性和较多的不良反应，因此中医药对多囊卵巢的治疗也成为了学者们研究讨论的一个热门话题[3]。本项目采用来曲唑建立PCOS大鼠模型来探究虎杖苷联合甘草汁对雌性大鼠血清性激素作用及与PCOS的治疗。

1 实验材料

1.1 实验动物

3周龄雌性SD大鼠SPF级50只，体重60-80g，购自河南省实验动物中心，许可证编号（DW2019110615），存放于黄河科技学院动物房，光照10～12h/d，温度10-18℃，相对湿度40%-60%，自由饮水及摄食。

1.2 实验试剂及药品

大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒（货号：CD30237，批号：12/2019）、大鼠天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（货号：CD30806，批号：12/2019）、大鼠睾酮（T）试剂盒（货号：CD30387，批号：12/2019）、大鼠黄体生成素（LH）试剂盒（货号：CD30447，批号：12/2019）、大鼠促卵泡激素（FSH）试剂盒（货号：CD30274，批号：12/2019），均武汉纯度生物科技有限公司。虎杖苷、甘草购自河南张仲景大药房股份有限公司，来曲唑片（江苏恒瑞医药股份有限公司），二甲双胍（山东旭晨化工科技有限公司），羧甲基纤维素钠(CMC)（河南万邦实业）。

1.3 实验仪器及设备

电子天平（XJ320M,上海天美仪器）、恒温箱（UV-1902,上海奥析科学仪器有限公司）、离心机（GT16-3A，北京北利公司）、酶标仪（SC-5A，江苏天翎仪器有限公司）、三诺安稳免调码血糖仪(产品标准编号：YZB/湘0043-2012，版本号：QY-PYVPU)、三诺安稳免调码血糖试条(批号820625)、三诺一次性使用末梢采血针(生产批号：180908)、移液枪、一次性使用负压采血容器(山东省成武县医用制品厂，生产批号：20181102)、震荡摇床、多功能酶标仪（SpectraMaxM3，美谷分子）。

2 实验方法

2.1 实验大鼠建模及分组方法

空白组10只以普通饲料喂养，自由饮食。实验组40只大鼠每日灌服来曲唑（1mg/kg）+1%羧甲基纤维素钠（2mL/kg）[4]，自由摄食饮水，观察并记录各组大鼠的基本状况。4周后，将实验组分为5组：模型组、甘草组、虎杖苷组、联合组及二甲双胍组，每组8只。空白组抽取2只，实验组五组各抽取1只，进行建模检测。每周对所有实验大鼠测量一次体重和身长。

2.2 给药方法

二甲双胍组给予二甲双胍片剂，研磨成粉，现配现用，剂量为4g/kg/d，甘草汁组1.5g/kg/d,虎杖苷组1.5g/kg/d，虎杖苷联合甘草汁组1.5g/kg/d，灌胃干预3周[5]。

2.3 样品采集与指标测定

在上述条件下将各组实验大鼠饲养至第8周，禁食24h，测量体重和身长，计算BMI。使用10%水合氯醛（2～3mL/100g）腹腔注射麻醉,取腹主动脉血，分离血清，放置在-5℃冰箱保存；按照试剂盒说明测其血清中的LH、FSH、T、ALT、AST含量，对比分析结果数据。

2.4 统计学方法

应用SPSS 25.0统计软件，定量数据以均数±标准差(±s)来表示，多组间比较采用单因素方差分析，若方差齐则采用Bonferroni法，若方差不齐则采用Tamhane's T2法，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果与分析

3.1 实验大鼠一般情况的观察

空白组大鼠体型均匀，皮毛有光泽且整齐，活跃好动，喜啃食，进食量较大；而模型组大鼠体型肥胖，毛发旺盛，嗜睡少动，精神状态不佳，不喜啃食，进食量亦较小；经灌胃治疗3周后，联合组大鼠一般情况明显改善，二甲双胍组的大鼠较其他组大鼠反抗明显。实验过程中虎杖苷组大鼠死亡1只，模型组大鼠死亡1只。空白组有2只存在明显个体差异，不纳入结果统计。

3.2 各组对PCOS模型大鼠血清FSH、LH、T、LH/FSH的影响

和空白组比较，模型组大鼠血清的LH、T的含量极显著增加（P＜0.01），LH/FSH比值极显著增加（P＜0.01），FSH的含量极显著减少（P＜0.01）；和模型组比较，甘草组和虎杖苷组大鼠血清的LH、T的含量显著减少（P＜0.05），LH/FSH比值显著减少（P＜0.05），FSH的含量显著增加（P＜0.05），联合组与二甲双胍组大鼠血清的LH、T的含量极显著减少（P＜0.01），LH/FSH比值极显著减少（P＜0.01），FSH的含量极显著增加（P＜0.01），见表1。

表1 各组对PCOS模型大鼠血清FSH、LH、T、LH/FSH的影响

3.3 各组大鼠血清ALT及AST水平比较

和空白组比较，模型组大鼠的AST、ALT含量极显著增加（P＜0.01），二甲双胍组大鼠的AST、ALT含量极显著增加（P＜0.01），联合组大鼠血清的AST、ALT含量显著增加（P＜0.05），甘草组和虎杖苷组大鼠血清的AST、ALT含量无统计学意义（P＞0.05）；与模型组比较，二甲双胍组大鼠血清的AST、ALT含量极显著增加（P＜0.01），联合组大鼠ALT含量显著增加（P＜0.05），AST含量无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 各组大鼠血清ALT及AST水平比较

3.4 各组大鼠肝组织BMI指数的比较

和空白组比较，模型组大鼠的BMI指数显著增加（P＜0.05）,虎杖苷组大鼠的BMI指数显著增加（P＜0.05），联合组、甘草组、二甲双胍组大鼠的BMI指数均无统计学意义（P＞0.05）；与模型组比较，甘草组、虎杖苷组、联合组、二甲双胍组大鼠的BMI指数无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 各组大鼠BMI指数比较

3.5 各组大鼠OGTT结果比较

与空白组比较，模型组和各组给药组血糖较高，胰岛β细胞功能降低；与模型组比较，各组给药组血糖较低，胰岛β细胞功能有一定程度改善，且二甲双胍组和联合组优于甘草组和虎杖苷组,见图1。

图1 各组大鼠OGTT结果比较

3.6 各组大鼠卵巢形态观察

与空白组比较，模型组外观苍白，体积大，可见较多囊状扩张卵泡。联合组和二甲双胍组大鼠卵巢体积较模型组小，肉眼观察有差异，颜色淡红，可见成熟卵泡，甘草组和虎杖苷组大鼠卵巢体积较模型组体积差异不大。各组大鼠卵巢体积与实验时间、个体差异有关。

4 讨论

多囊卵巢对患者的生育和健康有很大影响。PCOS患者体内高水平的LH促进雄激素的合成，致雄激素的水平升高，高雄激素血症常表现为多毛、痤疮、脂溢性皮炎和雄激素性脱发[6]。多囊卵巢的发病机制暂不明确，大量临床研究证明中药治疗PCOS的有效性[7]，但在收集、分析中药治疗PCOS的文献中发现关于中药治疗PCOS的具体作用机制及相关信号转导途径尚不十分清楚，仅仅小部分研究从单味中药的药理出发阐述中药治疗PCOS的机理。相关资料显示虎杖苷和甘草分别对于多囊卵巢的治疗有一定积极作用。甘草可以减小卵巢质量，一定程度上的恢复卵巢组织形态，降低血清中促黄体生成素和睾酮水平、升高雌二醇水平、促进卵巢内雄激素转化向雌激素[8-10]。虎杖苷可以降低小鼠胰岛素水平，缓解胰岛素抵抗状态；降低血清睾酮水平，减轻血清高雄激素状态；同时可以促进卵泡发育和成熟，减少初级卵泡，增加高级卵泡数量，同时抑制卵泡发生闭锁[11]。本实验探究虎杖苷联合甘草汁对大鼠血清性激素作用及与多囊卵巢综合征的关系，为以后临床用药开创新思路。

经过药物干预，各给药组对PCOS大鼠相关指标影响程度不同。实验结果显示：与模型组比较，甘草组和虎杖苷组大鼠血清的LH、T的含量显著减少（P＜0.05），LH/FSH比值显著减少（P＜0.05），FSH的含量显著增加（P＜0.05），联合组大鼠血清的LH、T的含量极显著减少（P＜0.01），LH/FSH比值极显著减少（P＜0.01），FSH的含量极显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，二甲双胍组大鼠血清的AST、ALT含量极显著增加（P＜0.01），联合组大鼠ALT含量显著增加（P＜0.05），AST含量无统计学意义（P＞0.05）；与模型组比较，甘草组、虎杖苷组、联合组、二甲双胍组大鼠的BMI指数无统计学意义（P＞0.05）；与模型组比较，各组给药组血糖较低，胰岛β细胞功能有一定程度改善，且二甲双胍组和联合组优于单一给药。

本实验表明，虎杖苷联合甘草汁具有降低血清性激素水平的作用，并能提高葡萄糖耐受程度，改善PCOS大鼠相关症状，临床治疗可作为参考。