瑶药止痛散的制备工艺研究

莫海玲，李以军，蒋璐慧，周海坚，周佳宁，陆海鹏

（广西壮族自治区民族医院，广西 南宁 530001）

瑶药止痛散为广西壮族自治区民族医院临床经验方，由毛两面针、洋金花、草乌、山乌龟、莪术等10味药材组成，具有解毒散结、消肿止痛、补气行血、温通经络的功效［1-3］，临床用于缓解肿瘤患者放化疗及手术过程中所引起的疼痛。方中毛两面针为主药，为芸香科植物毛叶两面针的干燥根和茎，瑶药称之为“入山虎”，“入山虎”是最具代表性瑶药“五虎”之一，具有活血化瘀、行气止痛、祛风通络的功效，其主要有效成分为氯化两面针碱［4］。烘干和粉碎工艺是否合理将直接影响散剂的质量，进而影响临床疗效。为使瑶药止痛散更有效、更稳定、更安全，本文采用正交试验法，以氯化两面针碱含量为指标，考察烘烤温度、粉碎细度和烘烤时间因素的影响，为该产品的实际生产应用提供可靠的保证。

1 实验材料

1.1仪器 LC-2030 型高效液相色谱仪（日本岛津公司，包括UV 检测器，柱温箱，Labsolutions 色谱数据工作站）；METTLER TOLEDO XS 205 电子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；KQ-300DB 型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率300 W，频率40 kHz）；HHitech 和泰水纯化系统（上海和泰仪器有限公司）；DLF-28分级连续投料粉碎机（温州顶级医疗器械有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海智诚分析仪器制造有限公司）；药用筛（浙江上虞市五四仪器厂）。

1.2试药与试剂 氯化两面针碱对照品（批号:110848-201604，纯度：91.0%）购自中国食品药品检定研究院；毛两面针（批号：1809034）、洋金花（批号：1811151）、草乌（批号：D1703003）、山乌龟（批号：1811081）、莪术（批号：1811092）等药材均购于广西张益堂中药饮片有限公司，经我院周海坚副主任中药师鉴定为正品。瑶药止痛散（自制制剂，批号为20190607、20190608、20190609）；三乙胺、磷酸试剂均为分析纯，乙腈为色谱纯，水为实验室自制纯化水。

2 方法与结果

2.1正交试验设计 以氯化两面针碱含量的综合评分为指标，采用L9（34）正交设计考察烘烤温度、粉碎细度和烘烤时间因素，正交因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.2样品制备 按处方比例准确称取毛两面针、洋金花、草乌、山乌龟、莪术等10 味药材共18 份（每次试验平行2 次），分别按L9（34）正交表的安排进行烘干、粉碎、混匀，备用。

2.3氯化两面针碱含量测定

2.3.1色谱条件 色谱柱：Waters bridge phengl C18（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）；流动相：乙睛-0.2%磷酸溶液-三乙胺（20∶80∶1）；检测波长：328 nm；流速1.0 ml/min；柱温：30 ℃，进样量：10 μl；理论塔板数按氯化两面针碱计不低于2 500。

2.3.2对照品溶液的配制 精密称取氯化两面针碱对照品2.5 mg，加70%甲醇溶解后定容于50 ml容量瓶中，摇匀，即得质量浓度为50 μg/ml 对照品溶液储备液。再精密量取对照品溶液储备液1 ml，加70%甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀，即得浓度为5 μg/ml对照品溶液。

2.3.3供试品溶液的配制 取瑶药止痛散约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇20 ml 超声处理30 min，过滤，滤渣和滤纸再加70%甲醇20 ml 超声处理30 min，放冷，滤过，滤液置同一量瓶中，加适量70%甲醇洗涤3 次，洗液并入50 ml 容量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.3.4阴性对照品溶液的配制 称取毛两面针之外的药材，按照供试品制备方法，制备缺毛两面针的阴性对照溶液。

2.3.5标准曲线的绘制 分别精密吸取质量浓度为50 μg/ml 的对照 品 储备液0.25 ml、0.5 ml、1 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml 置10 ml 量瓶中，加入70%甲醇稀释至刻度，摇匀。从中分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪，以氯化两面针碱质量浓度为横坐标（X）、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得标准曲线方程为Y＝55 065.1X+5 178.40，r＝0.999 6（n＝6），线性范围为1.25～12.5 μg/ml。

2.3.6含量测定 精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品各10 μl，注入高效液相色谱仪中测定，据峰面积计算，即得，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.4正交试验方案安排与结果 正交试验方案安排与结果见表2，方差分析见表3。

表2 正交试验方案安排与结果 （n=2）

表3 方差分析结果

由表2 极差R 值可知，RA>RB>RC，影响因素大小顺序为A>B>C，即烘烤温度>烘烤时间>粉碎细度。由表3方差分析结果可知，A因素烘烤温度有显著性差异（P<0.05），应取A3，而其它两个因素无显著性差异。结合生产实际情况，最终确定本方的最佳制备工艺条件为A3B2C2，即原方药材于烘箱中80 ℃干燥3 h，粉碎成100目。

2.5验证实验 为进一步确定此工艺的合理性，按照正交试验优选的工艺条件A3B2C2进行验证试验，即80 ℃烘烤3 h，粉碎成100目，制备3批（20190607、20190608、20190609）样品，并测定氯化两面针碱含量的含量。结果3 批样品中氯化两面针碱的含量分别为100.12 μg/g、100.71 μg/g、101.75 μg/g，平均含量为100.86 μg/g，高于正交试验中各工艺的结果，表明该工艺条件可行，进一步确定此工艺为最佳制备工艺。

3 讨 论

瑶药止痛散为外用散剂，由毛两面针、洋金花、草乌、山乌龟、莪术等10 味药材烘干后粉碎入药，药材饮片的烘干、粉碎工艺设计好坏直接影响制剂质量，本文通过参考文献［5-6］，以烘烤温度、粉碎细度和烘烤时间为考察因素，以氯化两面针碱为考察指标，优选最佳制备工艺。中药饮片干燥可分为“自然干燥”和“人工干燥”，人工干燥的温度应视药物性质灵活掌握，一般药材以不超过80 ℃为宜，含挥发性成分的药材以不超过50 ℃为宜［7］，因此本文选取40 ℃、60 ℃、80 ℃为3个因素水平进行正交试验。

毛两面针为方中主药，氯化两面针碱是毛两面针的主要活性成分之一，且其含量测定方法的专属性良好，含量测定方法比较成熟［8-9］，故作为控制本品质量的指标成分。流动相经筛选比较，选用乙腈-0.2%磷酸溶液-三乙胺（20∶80∶1）作为流动相，测定结果显示精密度、重复性、稳定性良好。

经实验证明，按试验优选结果制备瑶药止痛散，结果制剂中氯化两面针碱含量较高，再次验证最佳工艺为：烘干温度80 ℃，烘干3 h，粉碎成100目。该工艺可为瑶药止痛散的工业生产提供参考依据。