超高效液相色谱-串联质谱法测定畜肉中阿托品

杜国辉，姜冬峰，张应龙

（山东商业职业技术学院，山东 济南 250103）

阿托品是抗胆碱药，为从茄科植物颠茄、曼陀罗或莨菪等提取的消旋莨菪碱，为M-受体阻断剂。其碱酸盐为无色结晶或白色粉末，易溶于水。阿托品有抑制腺体分泌、抗休克、解除平滑肌痉挛、解毒、兴奋呼吸中枢等多重药理作用[1]。在监督执法的案例中发现有违法分子对待宰牲畜注射肾上腺素、阿托品等违禁药物，被注射后的牲畜药性发作后处于极渴状态，大量超负荷饮水。而这些违禁药物进入人体后，可能导致中毒。

目前阿托品检测方法主要有放射受体检测法[2]、高效液相色谱法（HPLC）[3]、高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）[4-5]、气相色谱法[6]、毛细管电泳法[7]等。在所有的这些方法中，HPLC-MS/MS不仅使阿托品残留的鉴定结果更准确，同时提升检测灵敏性。

本文建立了测定猪肉、牛肉、羊肉等常见畜肉中阿托品的超高效液相色谱-串联质谱（UPLCMS/MS）法。具有简单、快速、高效、准确的特点，可用于检测市场上注水肉，有效保障食品安全。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子分析天平，精准度为十万分之一（德国Sartorius公司）；Milli-Q型纯水系统（美国Millipore公司）；匀浆机（德国IKA公司）；固相萃取仪（美国Waters公司）；涡旋振荡混合器（江苏海门其林贝尔仪器制造公司）；离心机（德国Sartorius公司）；Waters XEVO TQS超高效液相色谱仪-串联质谱仪（美国Waters公司）。

1.2 材料与试剂

自制Milli-Q超纯水（实验室制备）；阿托品对照品（中国食品药品检定研究院）；乙腈（美国Meck公司）。Oasis PRiME HLB 固相萃取柱（美国Waters公司，规格为200 mg，6 ml）；0.2 μm微孔滤膜（Agilent 公司）。

2 方法与结果

2.1 仪器条件

2.1.1 色谱条件 流动相：A：0.1 %甲酸乙腈，B：0.1 %甲酸水，梯度洗脱；流速0.3 ml/min；柱温40 ℃；进样量1 μl；色谱柱为Waters ACQUITY UPLC®BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.1.2 质谱条件 多反应监测模式，碰撞气流量为0.20 ml/min；脱溶剂气流量为1000 L/h；脱溶剂温度为500 ℃：离子源温度为150 ℃；毛细管电压为3.0 kV；电离模式为ESI正离子模式；其他参数见表2。

表2 阿托品LC-MS/MS MRM参数一览表

2.2 溶液的制备

2.2.1 阿托品校准液制备 精密量取阿托品对照品溶液适量，加空白基质溶液稀释成浓度约50 ng/ml的溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液制备 取样品约2 g，精密称定，置入50 ml离心管，加入25 ml提取液（乙腈和水体积比为8:2），充分混匀。超声提取20 min，10 000 r/min离心5 min，弃去沉淀，取8 ml上清置入10 ml玻璃试管，缓慢装入PRiME HLB，缓推净化柱，当液体离开净化层之后，吸取净化层上的液体，体积为2 ml，50 ℃下氮气吹干，加1 %甲酸乙腈0.5 ml溶解残渣，0.22 μm滤膜过滤，进样测定。

2.2.3 空白基质溶液制备 根据2.2.2供试品溶液制备项方法进行配制，样本改为不含阿托品的猪肉样本。空白基质溶液、供试品溶液的总离子流图见图1。

图1 空白基质溶液、供试品溶液的总离子流图

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线和定量限 分别用猪肉、牛肉、羊肉3种空白基质绘制标准工作曲线。由表3可见，阿托品在一定范围线性关系较好，其相关系数可达0.99以上。羊肉、牛肉、猪肉中阿托品药物的定量限为0.5 μg/kg，其信噪比（S/N）均满足≥10的要求。

表3 不同基质中阿托品药物的标准曲线及定量限

2.3.2 回收率及精密度 分别选取猪肉、牛肉、羊肉3大类基质进行试验，每类基质中选取相应的代表样品进行加标回收率试验，并计算相对标准偏差RSD。猪肉、牛肉、羊肉阿托品的添加量分别为0.5，5，10 μg/kg，并进行6次平行实验。为保证数据的准确性，以相应类别的空白样品基质配置的标准溶液所得标准曲线进行定量，结果见表4。

表4 回收率与RSD测定结果

由结果可见，阿托品的回收率达82.6 %～102.8 %，RSD均10 %，表明该方法对测定猪肉、牛肉、羊肉中阿托品的残留量均具有较好的准确度和精密度。

3 讨论

3.1 流动相的选择

分别对乙酸铵、甲酸水、水和乙腈、甲醇形成的流动相系统的洗脱效果进行对比和分析，通过对比峰形对称性和洗脱效果发现，流动相使用0.1 %甲酸水溶液和0.1 %甲酸乙腈有较好的洗脱效果，通过优化条件，可提升检测效率，同时避免基质对检测结果产生影响。

3.2 质谱参数的优化

较多质谱因素会影响检测物质裂解，如碰撞、电压等，通过使用阿托品校准液优化质谱条件，可优化质谱参数，确认待测物质的一级准确离子峰；可对碎片离子的相对响应强度进行观察，从而确定适宜的碰撞能量，并最终确定最适定量离子、碎裂电压等。

3.3 前处理方法的选择

分别采用HLB柱、MCX柱、PRiME HLB柱考察目标分析物。通过调节提取液pH值，目标化合物在HLB柱、MCX柱上也可获得较好的回收率，但PRiME HLB柱无需任何活化和平衡，净化过程相对简单、快速、省时，且能有效去除畜肉中脂类和蛋白质等基质干扰物[8]，因此选择PRiME HLB柱对目标分析物进行净化。

4 结论

本文通过UPLC-MS/MS，建立了一种可以对肉质样本中残留阿托品量进行检测的方法，该方法操作简单，通过优化处理条件，可使前处理过程更加简便。此外，该方法具有合理的线性范围和较高的回收率，分析时间较短，适宜快速检测，对市场上注水肉的监管具有一定的积极作用。